Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 11
2.1. Особенности строения печени у птицы и ее биологическая роль в организме 11
2.2. Основные патологии печени у птиц и их проявление 17
2.3. Методы и средства терапии и профилактики гепатозов у птиц 35
3. Материалы и методы исследований 52
4. Собственные исследования 57
4.1 Степень распространения и основные причины возникновения гепатозов в птицеводческих хозяйствах Краснодарского края 57
4.2 Заболеваемость цыплят-бройлеров незаразной патологией в ЗАО «Курганинский мясоптицекомбинат» в различные возрастные периоды 59
4.3. Состав и физико-химические свойства гепрасана 64
4.4. Токсикологическая оценка гепрасана 69
4.4.1. Острая токсичность 69
4.4.2. Субхроническая токсичность 71
4.4.3. Влияние гепрасана на функцию печени и пищеварительного тракта 82
4.4.4. Влияние гепрасана на мочеотделение 85
4.4.5. Раздражающее и аллергизирующее действие гепрасана 86
4.4.6. Эмбриотоксическое и тератогенное действие 88
4.4.7. Влияние гепрасана на патоморфологию внутренних органов птицы при длительном введении 91
4.4.8. Ветеринарно-санитарная оценка мяса 100
4.5. Фармакологические свойства гепрасана 103
4.5.1. Определение оптимальных доз гепрасана 103
4.5.2. Влияние гепрасана на показатели обмена веществ и продуктивность цыплят-бройлеров 111
4.5.2.1 Влияние на физиологическое состояние цыплят-бройлеров, сохранность и приросты массы тела 112
4.5.2.2 Влияние на морфологические показатели крови 114
4.5.2.3 Влияние на биохимические показатели крови 117
4.6. Разработка показаний к применению и лечебно профилактическая эффективность гепрасана 121
4.6.1 Терапевтическая эффективность при микотоксикозах птиц 121
4.6.2 Профилактическая эффективность 128
5. Экономическая эффективность гепрасана при профилактике гепатозов у цыплят-бройлеров 130
6. Заключение 132
7. Выводы 141
8. Практические предложения 142
9. Список литературы 143
10. Приложения 168
- Основные патологии печени у птиц и их проявление
- Субхроническая токсичность
- Определение оптимальных доз гепрасана
- Терапевтическая эффективность при микотоксикозах птиц
Введение к работе
Актуальность темы. Птицеводство является одной из наиболее эффективных, высокорентабельных и перспективных отраслей сельского хозяйства, так как в отличие от других отраслей не имеет сезонности и занимает ведущее место по удовлетворению населения продуктами питания в течение всего года (Хохлов Р.Ю., 2004). Основной задачей птицеводства является выведение высокопродуктивной птицы с хорошим мясным качеством молодняка при невысоких затратах корма, при этом особое внимание уделяется повышению экономического эффекта от применения новых технологий и их внедрения в производство (Курилкин В.В., Никитченко В.Е., 2011).
Однако в связи с совершенствованием технологических процессов и интенсификацией производства в отрасли птицеводства, возрастает риск возникновения несоответствия между физиологическими возможностями организма птицы и существующими условиями ее кормления. Наличие в кормах посторонних химических и токсических агентов, и, в первую очередь, мико-токсинов, в сочетании с общей несбалансированностью рационов, приводит к развитию эдогенного и экзогенного токсикоза в организме, который становится пусковым механизмом возникновения многих заболеваний, и, в первую очередь, патологий печени, с которой прямо или косвенно связано большинство обменных процессов организма (Попова Е.А. с соавт., 2011; Дроздова Л.И., Кундрюкова У.И., 2010; Ежков В.О., 2008; Лукашенко B.C., 2010).
Для снижения негативных последствий использования недоброкачественных кормов в птицеводстве эффективно применяются специальные сорбенты – ветеринарные препараты и кормовые добавки, предназначенные для связывания в желудочно-кишечном тракте и выведения из организма животных токсичных веществ – микотоксинов, бактериальных токсинов, токсичных продуктов метаболизма, продуктов гниения, и др., оказывающих негативное действие на организм, и, в первую очередь, на печень (Ежков В.О. с соавт., 2007; Rosario K.J., 1990; Равилов А.З. с соавт., 2010; Невская А.А., Лебедева И.А., Дроздова Л.И., 2015; Семененко М.П., Антипов В.А., 2006).
В настоящее время рынок адсорбентов представлен достаточно широко, как препаратами отечественного производства, так и зарубежными средствами детоксикации.
Однако только устранение основных причин, способствующих возникновению и развитию заболеваний гепатобиллиарной системы у птицы, недостаточно для восстановления физиологических функций печени. На этом фоне необходимо проведение патогенетической терапии, направленной на адекватную фармакологическую коррекцию с помощью лекарственных средств, улучшающих метаболические процессы в печени, повышающих ее устойчивость к патогенным воздействиям, а также способствующих восстановлению ее функций при различных повреждениях.
Степень разработанности темы исследования. Учитывая многообразие отрицательных факторов, действующих на организм птицы в целом и на
печень в частности, особое значение приобретают своевременные меры, направленные на регенерацию и защиту ее от токсинов. В наше время ученые из разных стран мира ведут научные исследования, пытаясь обнаружить различные вещества и их комбинации, которые надежно защищали бы печень от действия токсичных веществ (Чечеткин А.В. с соавт., 1985; Kee Hong Nahm, 1995; Бирюкова С.В., Бочкарева И.И., 2010; Бурков П.В. с соавт., 2009; Войтов Л.И. и др., 1990; Rosario K.J., 1990; Ежков В.О., Яппаров И.А., 2007; Diaz G.J., 2007; Невская А.А., Лебедева И.А., Дроздова Л.И., 2015; Семененко М.П., Антипов В.А. и др., 2010). К сожалению, многие химические ветеринарные препараты не могут решить эту задачу: они сами содержат сильнодействующие субстанции, которые создают дополнительную нагрузку на орган, мешая восстанавливаться (Кольберг Н.А., Садовников Н.В., 2010; Бетлиг Е., 2005; Столляр Т.А. с соавт., 1987; Сурай П., Фисинин В.И., 2012).
Правильные средства для ее защиты и регенерации должны оказывать всестороннее, комплексное действие на организм птицы. Решение столь сложной и комплексной проблемы требует и неординарных решений.
Именно поэтому при дисфункции печени, обусловленной скармливанием недоброкачественных кормов, предпочтение следует отдавать препаратам с корректирующим гепатотропным действием, комбинирование которых с традиционными средствами позволяет усилить их позитивный эффект (Гу-люшин С.Ю., Зернов Р.А., 2011; Дроздова Л.И., Кундрюкова У.И., 2010).
Решение проблемы нормализации обменных процессов в организме и морфофункционального состояния печени с использованием гепатотропных препаратов представляется важным резервом повышения эффективности ведения птицеводства и производства птицеводческой продукции. Гепатотроп-ные препараты, которые в последние годы находят все более широкое применение в ветеринарной практике нейтрализуют действие токсинов в организме животных, снижают в определенной степени функциональную нагрузку на печень и предупреждают развитие нарушений его морфофункциональ-ного состояния (Кузнецова Т., Околелова Т., 2008; Буеверов А.О., 2001).
К сожалению, на сегодняшний день, несмотря на обширный арсенал современных гепатозащитных средств, препаратов, обладающих антитоксической и гепатопротекторной активностью, эффективными фармакологическими свойствами, низкой токсичностью и отсутствием побочного действия, очень мало. Перспективным направлением в этом плане может быть разработка комплексного препарата, содержащего недорогие, но эффективные компоненты.
Все вышеперечисленное послужило основанием для выбора направлений наших исследований в области фармакопрофилактики и фармакотерапии заболеваний печени в бройлерном птицеводстве.
Цель и задачи исследований. Целью нашего исследования явилась разработка и изучение фармако-токсикологических свойств комплексного гепа-топротекторного препарата и его лечебно-профилактическая эффективность при гепатозах у цыплят-бройлеров. Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:
Изучить степень распространения и основные причины возникновения гепатозов у бройлеров в птицеводческих хозяйствах Краснодарского края;
Разработать состав и изучить физико-химические свойства нового комплексного препарата;
Оценить параметры его общетоксического действия на организм;
Определить фармакологические свойства комплексного препарата;
Изучить лечебно-профилактическую эффективность препарата гепрасан при гепатозах цыплят-бройлеров;
Гипотеза исследования основана на том, что лечение заболеваний гепа-тобиллиарной системы у птицы предусматривает два основных направления. Первое - это устранение экзо-и эндотоксинов, способствующих возникновению и развитию заболевания с помощью сорбентов, связывающих в желудочно-кишечном тракте и выводящих из организма токсичные вещества, оказывающие негативное действие на организм, и, в первую очередь, на печень. Второе - восстановление функциональной и метаболической активности ге-патоцитов печени с помощью препаратов, обладающих направленным корректирующим гепатотропным действием.
Научная новизна работы. В результате проведенных исследований изучена степень распространения заболеваний печени у птицы в условиях птицеводческих хозяйств Краснодарского края, а также заболеваемость цыплят-бройлеров незаразной патологией в различные возрастные периоды. Разработан новый комплексный препарат гепрасан, определены его физико-химические и основные фармако-токсикологические характеристики. Выявлено положительное влияние препарата на морфо-биохимический состав крови, функциональную активность печени, метаболический статус и продуктивные качества цыплят.
В производственных условиях изучена профилактическая и терапевтическая эффективность препарата при гепатозах цыплят-бройлеров, обусловленных сочетанными микотоксикозами.
По результатам исследований подана заявка для получения патента РФ на изобретение «Кормовая добавка для сельскохозяйственной птицы, обладающая гепатопротекторным и антитоксическим действием » № 201713700, а также получено решение о выдаче патента РФ № 2016139885.
Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость работы заключается в том, что доказана возможность повышения сохранности и продуктивности сельскохозяйственной птицы благодаря использованию препарата, обладающего антитоксическими и гепатопротектор-ными свойствами, улучшающими метаболическую активность печени.
По результатам работы для практической ветеринарии и животноводства предложен новый препарат на основе природных алюмосиликатных минералов из группы монтмориллонита, гипосульфита, и природного растительного биофлавоноида для лечения и профилактики гепатозов у цыплят-бройлеров, нормализующий обменные процессы в организме, способствующий защите
печени и скорейшей утилизации токсинов и оказывающий ростостимулиру-ющее действие. Дано экономическое обоснование использования гепрасана в мясном птицеводстве.
Разработана временная инструкция по применению препарата гепрасан, утвержденная в установленном порядке.
Внедрение результатов исследований. В условиях птицеводческих хозяйств Краснодарского края обеспечено применение препарата гепрасан в качестве эффективного лечебно-профилактического средства при гепатозах цыплят-бройлеров.
Степень достоверности и апробация работы. Достоверность полученных результатов подтверждена статистической обработкой материалов исследования, которые выполнены с использованием современных методов.
Результаты экспериментальных и клинических исследований, представляющие собой основу диссертации, доложены и обсуждены: на Международной научно-практической конференции «Наука, образование и инновации» (Челябинск, 2015), Международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института «Актуальные проблемы современной ветеринарной науки и практики» (Краснодар, 2016); Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы обеспечения ветеринарно-санитарного благополучия и охраны окружающей среды» и Координационного совещания по итогам выполнения научных исследований за 2016 год (Москва, 2017), Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Эколого-биологические проблемы использования природных ресурсов в сельском хозяйстве» (Екатеринбург, 2017); Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых, посвященный 95-летию Кубанского ГАУ и 80-летию со дня образования Краснодарского края «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» (Краснодар, 2017).
Методология и методы исследований. Основа методологии исследования заключалась в постановке и решении обоснованной проблемы разработки комплексного препарата, обладающего корректирующим гепатотропным действием; его основных фармако-токсикологических характеристик и лечебно-профилактической эффективности в бройлерном птицеводстве.
Полученные результаты исследования подтверждены публикациями научных работ, отражающих достоверность полученных данных и их теоретической и практической полезности. При выполнении работы использованы использовались общепринятые методы исследований: клинические, физиологические, токсикологические, фармакологические, статистические.
На защиту выносятся:
причины и степень распространенности заболеваний печени у бройлеров в промышленном птицеводстве Краснодарского края;
состав и физико-химические свойства препарата гепрасан;
экспериментальные данные по изучению токсикологических свойств препарата гепрасан;
фармакологические свойства препарата и его влияние на организм птицы;
лечебно-профилактическое действие препарата гепрасан при гепатозах цыплят-бройлеров;
Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 научных работ, в том числе 3 - в изданиях, рецензируемых ВАК Минобразования Российской Федерации и 1 в издании, включенном в библиографическую и реферативную базу данных Scopus (Journal of Pharmaceutical Sciences and Research (JPSR) получена заявка на патент и решение о выдаче патента.
Объем и структура диссертации. Диссертация выполнена на 167 страницах стандартного компьютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственного исследования, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Библиографический список включает 229 источников, в том числе - 53 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 27 таблицами и 13 рисунками.
Основные патологии печени у птиц и их проявление
Известно что, каждому виду птиц присущ свой тип обмена веществ, который зависит от многочисленных факторов – возраста, породы, пола, наследственных особенностей и т.д. (Сарбаш Т.Ф., 1983; Кузнецов С.Л. с со-авт., 2005; Журина Е.Б., Ежков В.О., Бурдов Г.Н., 2002).
Полноценное сбалансированное кормление является базой для проявления высокой, генетически обусловленной продуктивности птицы и эффективной трансформации питательных веществ корма в продукцию (Бессара-бов Б.Ф., 2007; Якубенко Е.В., 2006; Savage J.E., Rhoades J.F., 1989).
В промышленном птицеводстве при нарушениях обмена веществ часто регистрируются заболевания органов пищеварения, а также печени. Занимая центральное место в регуляции обмена веществ, печень принимает прямое или косвенное участие во всех жизненных процессах, происходящих в организме. Симптоматика заболеваний печени проявляется через определенный период времени от момента действительного начала патологического процесса в его морфологическом «оформлении». В связи с этим не клинические признаки, а морфологические и биохимические изменения клеток и тканей должны быть главным ориентиром в диагностике начальных стадий развития патологических процессов (Логинов А.С., Арунин Л.Н., 1985).
Печень обладает большими функциональными способностями, однако, являясь высокоаэробной, кислородзависимой тканью, обуславливает высокую чувствительность гепатоцитов к повреждающему действию различных токсикантов. Ответной реакцией организма на внешнее негативное воздействие является состояние, получившее название окислительный стресс – усиление окислительных реакций в органах и тканях, индуцируемое вредными факторами окружающей среды, сопровождающееся увеличением концентрации сво-боднорадикальных форм метаболитов, нарушающих процессы обмена веществ и энергии в организме, а также ведущих к деструкции клеточных мембран и патологически измененным функциям клеток, в том числе и гепатоцитов. Патологические изменения печени отражаются на всех органах и системах, провоцируя возникновение заболеваний различной нозологии (Кузьминова Е.В., Семененко М.П., Старикова Е.А., Тяпкина Е.В., Ферсунин А.В., 2014).
Все процессы, происходящие в паренхиме и строме печени, относятся либо к компенсаторным и приспособительным, либо к патологическим обратимым и необратимым. Учитывая высокую регенераторную способность органа, необратимые патологические процессы обнаруживаются в основном у птиц родительского стада, когда в организме птицы развивается целый комплекс патологии не только в печени, но и в других органах и тканях на фоне или сенсибилизации, или общей интоксикации организма. Из-за многофункциональности органа всегда трудно найти какой-либо морфологический маркер того или иного заболевания, поскольку гепатотоксичных факторов значительное количество. Сюда можно отнести и вирусы, такие как аденовирусы гидроперикардита кур, и бактерии, такие, как сальмонелла, микотоксины, и многие неспецифические воздействия. Даже такой фактор, как гипертермия, которая нередко случается при скученном содержании птицы, оказывает воздействие на реактивность и пластичность тканевых компонентов печени (Дроздова Л.И., Кундюкова У.И., 2013; Epstein R.L. Asworth R.B., 1989).
Как указывают А.В. Жаров с соавт. (2003), функции печени тесно взаимосвязаны и от них зависит полноценность работы как отдельных органов и систем, так и всего организма в целом. Формирование большинства заболеваний возможно лишь при угнетенной детоксикационной функции гепатоби-лиарной системы.
Печень, как важнейший орган, участвующий в обмене веществ, часто не выдерживает функциональной нагрузки вследствие неправильного кормления, что сопровождается развитием дистрофических процессов (Никитин Ю.П. с соавт., 1985; Rosario K.J., 1990).
Перевод отрасли птицеводства на промышленную основу вызвал коренные изменения в условиях содержания, ухода и кормления птиц. Это привело к резкому снижению и даже ликвидации одних заболеваний, но создало ситуацию для возникновения других заболеваний, которые раньше не встречались или встречались довольно редко. Так, у кур-несушек стали широко регистрировать нарушение липидного обмена, выражающееся в чрезмерном накоплении жира и печени, приводящее к серьезным изменениям их жизнедеятельности и даже к гибели. Печеночная недостаточность может развиться в результате воздействия на печень любых факторов, повреждающих гепатоциты (Винокуров В.И., Войтов Л.И, Федорова Н.М.,1988; Bhargava K.K., 1986). Сложность и многообразие функций печени, а также ее специфическое положение в организме обусловливают и сравнительно частое ее поражение (Тарасов И.И., Кондрахин И.П., Ильин В.Г., 1987). Широкое распространение болезней печени связано с изменением структуры потребляемых кормов, недоброкачественных кормов, которые нередко содержат токсины и другие вредные вещества (Байматов В.Н., 1986; Попова Е.А. и др., 2011).
Изучению взаимосвязи функциональных нарушений печени с тяжестью морфологических изменений гепатоцитов и ткани печени в целом посвящено немало работ (Блюгер А.Ф., Новицкий И.Н., 1984; Жаров А.В., 1974; Ильин П.А., Жабин Н.П., Шведов С.И. и др., 1994; Кирилив Я.И., Ратыч И.Б., Лагодюк П.З., 1985).
Болезни печени бывают первичные – алиментарной, токсической или инфекционной этиологии или вторичные – при различных специфических неинфекционных, инфекционных и инвазионных болезнях, приобретенного, врожденного или наследственного происхождения. По механизму развития различают болезни невоспалительной и воспалительной природы, по течению – острые и хронические.
Среди наиболее распространенных заболеваний печени неинфекционной патологии можно выделить следующие: гепатиты, гепатозы, токсическую дистрофию печени, циррозы.
Гепатиты – это группа болезней печени воспалительной природы, характеризующихся развитием сосудисто-мезенхимальной реакции на повреждение органа. Неспецифический реактивный, или иммунный (острый и хронический не гнойный паренхиматозный) гепатит — воспаление печени, выражающееся комплексом альтеративных, экссудативных и пролифератив-ных изменений, возникающих в органе вторично при разных заболеваниях. Различают активный и персистирующий, перипортальный, портальный и ло-булярный гепатиты (Жаров А.В., Шишков В.П., Жаков М.С.,1999).
Печень при остром гепатите увеличена в объеме, дрябловатой консистенции, неравномерно полнокровна, рисунок долек сглажен, цвет органа пестрый: красно-коричневый, красно-бурый, серо- и красновато-желтый, встречаются также пятнистые кровоизлияния. При хроническом гепатите печень менее увеличена в объеме, плотная, серо- или буро-коричневого цвета с темно-красными полосами и пятнами (Жаров А.В., Иванов И.В., Стрельников А.П., 2003).
Гнойный гепатит – остро, подостро или хронически протекающая болезнь печени с образованием гнойных очагов в органе. Печень заметно увеличена в объеме с наличием фибринозных наложений или соединительнотканных разрастаний на поверхности органа. Под капсулой или в глубоких слоях паренхимы видны множественные очажки желто-коричневого или серо-коричневого цвета с суховато-крошковатыми или саловидным, в более поздних стадиях – с зернисто-казеозным содержимым. Встречаются также многочисленные мелкие абсцессы, содержащие сметанообразный гной с более или менее выраженной фиброзной капсулой (Пичугин Л. М., Акулов А. Б., 1980).
Как указывают Л.И. Дроздова и У.И. Кундюков (2013), в их исследованиях, при гепатите воспалительный процесс в основном начинался с системы триады, где шло накопление полиморфноклеточных инфильтратов, содержащих лимфоциты, макрофаги, плазматические клетки. Данная картина соответствовала аутоиммунной реакции организма, то есть нарушению иммунной толерантности организма – состояния ареактивности иммунной системы по отношению к антигенам своих органов и тканей. Сущность данного процесса заключается в том, что под действием кормовых токсикантов, химических веществ, лекарственных препаратов и вакцин изменяется антигенная структура органов и тканей организма; образовавшиеся аутоантигены стимулируют синтез аутоантител и сенсибилизированных Т-лимфоцитов, способных осуществлять агрессию против изменённых и нормальных органов, повреждая печень. Весь описанный процесс сопровождается нарушением кровообращения в микроциркуляторном русле печени и пролиферацией компонентов соединительной ткани (Lovland А., Kaldhusdal M., 2001).
Субхроническая токсичность
Токсические исследования гепрасана были проведены с целью установления переносимых и токсических доз препарата, а также выявления наиболее чувствительных к изучаемому веществу органов и систем организма, характера и степени патологических изменений в них.
Согласно методическим указаниям по токсикологической оценке новых препаратов для лечения и профилактики незаразных болезней животных (ВНИИ незаразных болезней животных, Воронеж, 1987) было проведено две серии опытов на лабораторных животных и цыплятах-бройлерах (продуктивная птица).
Первая серия эксперимента. Для проведения токсикологических исследований на лабораторных животных было сформировано 4 группы здоровых крыс-аналогов с массой тела 107,5-115,2 г (три опытные и одна контрольная) по 10 животных в каждой. Контрольная группа была сформирована из животных той же партии и исследовалась в те же сроки, что и животные, получившие испытуемый препарат. За четверо суток до начала эксперимента крыс всех групп (которые ранее не использовались для проведения каких-либо исследований) поместили в специальные отдельные клетки для адаптации, при этом животные содержались на регламентированном пищевом рационе. Доступ к корму животных был прекращен за 12 часов до введения образца препарата, поение - за 4 часа до начала эксперимента.
Животным исследуемый препарат задавали внутрь с кормом (в смеси с вареным желтком) по следующей схеме:
- крысы первой группы - в дозе 0,71 г/кг массы тела (1/10 от максимально введенной в остром эксперименте);
- крысы второй группы - 0,355 г/кг массы тела (1/20 от максимально введенной в остром эксперименте);
- крысы третьей группы - 0,142 г/кг (1/50 от максимально введенной в остром эксперименте);
- крысы четвертой группы содержались на основном рационе, к которому добавлялся вареный желток.
Препарат задавали ежедневно в течение 28 дней. В ходе эксперимента как опытные, так и контрольные животные содержались в виварии в соответствии с существующими нормами, рацион стандартный, поение вволю. Ежедневно за всеми животными вели клиническое наблюдение, учитывали потребление корма и воды, состояние шерстного покрова и видимых слизистых оболочек, реакцию животных на внешние раздражители, возможные проявления токсикоза.
В конце опыта в каждой группе (опытных и контрольной) под эфирным наркозом было убито по 5 животных для проведения морфо-биохимических исследований крови, патологоанатомического вскрытия и отбора образцов органов и тканей.
В ходе эксперимента и по его завершению лабораторных животных регулярно взвешивали.
В ходе исследований установлено, что в период длительного скармливания различных доз гепрасана, его токсического влияния на организм крыс установить не удалось. На протяжении всего эксперимента крысы были подвижными, активно передвигались по клетке, охотно поедали корм и предлагаемые лакомства, не испытывали жажду. Реакция на внешние раздражители не отличалась от реакции контрольных животных, шерстный покров был гладкий, блестящий, видимые слизистые оболочки бледно-розовые, без ран и изъязвлений. Клинически выраженных нарушений функций органов пищеварения и мочевыделения, а также жизненно важных органов и систем организма не регистрировали.
Результаты исследований по динамике массы тела опытных и контрольных крыс, а также проявление клинических признаков и выживаемость представлены в таблице 5. Так, среднесуточный прирост крыс опытных групп на конец эксперимента достоверно (Р0,05) превышал показатели контрольных крыс на 9,1, 19,2 и 17,2% соответственно, что может быть связано с положительным влиянием комплекса биологически активных веществ (макро- и микроэлементов), входящих в состав препарата, на обмен веществ, и обеспечивающих ростостимулирующее действие гепрасана.
В конце опыта по определению хронической токсичности препарата для изучения патоморфологии внутренних органов из каждой группы обездвиживали по пять крыс путем перерезания спинного мозга, не затрагивая трахею и крупные сосуды шеи.
При проведении эвисцерации у лабораторных животных, как в опытных, так и в контрольных группах отклонений и изменений в макроскопическом строении не установлено, внутренние органы не увеличены, соответствуют физиологической норме, жидкость в полостях не выявлена. Упитанность выражена, в забрюшинной клетчатке и в околопочечном состоянии отмечено наличие жира. Волосяной покров равномерный, гладкий, блестящий, без очагов облысения. В тканях и оболочках головного мозга сосудистых расстройств, воспалительных и дистрофических изменений не выявлено. В просвете трахеи и бронхов слизи, катарального и гнойного экссудата не обнаружено, ткань легких розового цвета, без очагов некроза.
На разрезе – цвет слизистой желудка и кишечника серо-розовый, без воспалений и наложений слизи. Печень не увеличена, темно-вишневого цвета, поверхность гладкая, блестящая, без очагов некроза и дистрофических изменений, края ровные, дольчатость выражена.
Почки не увеличены в объеме, ткань упругая, капсула почек легко отделима, при разрезе четко просматриваются слои коркового и мозгового вещества; как на поверхности почек, так и при разрезе кровоизлияний и макро-структурных изменений ткани не выявили.
Таким образом, при патоморфологическом исследовании экспериментальных крыс, изменений анатомического строения и топографии внутренних органов, видимых патологий и макроскопических изменений тканей и органов выявлено не было. Следовательно, длительное применение гепраса-на не оказывает патологического действия на внутренние органы животных и не изменяет их структуру, что позволяет сделать вывод об отсутствии токсических свойств у изучаемого препарата.
Взвешивание внутренних органов крыс (таблица 6) опытных групп, в сравнении с контролем показало, что длительное скармливание гепрасана не вызывало отклонений в их развитии.
Средняя масса всех исследованных внутренних органов опытных белых крыс не отличалась от средней массы таковых у животных контрольной группы.
Длительное скармливание гепрасана в условно-токсических дозах (1/10, 1/20 и 1/50 от максимально-испытанной при изучении острой токсичности) не приводило к повышенной нагрузке на внутренние органы и, как следствие, не вызывало их гиперфункции и гипертрофии.
По результатам проведенных в конце эксперимента морфо-биохимических исследований крови опытных крыс отрицательного влияния гепрасана на показатели крови установлено не было (таблица 7).
Определение оптимальных доз гепрасана
Отработка оптимальной профилактической дозы препарата гепрасан проводилась в опытах на однодневных цыплятах-бройлерах кросса КОББ 500 в условиях цеха по выращиванию ЗАО «МПК Курганинский» при одинаковых условиях их содержания и кормления в соответствии с зоотехническими нормами (воздухообмен, освещение, обогрев, влажность воздуха). Поение осуществлялось посредством поилок ниппельного типа. Кормление – ручной россыпью комбикорма непосредственно в кормушки. Первые 10-ть дней жизни цыплята содержались на стартовом рационе, с 11-го дня их переводили на рацион «рост», который скармливался до 25-го дня выращивания и затем молодняк птицы переводился на комбикорм «финиш». Предварительно, скармливаемые корма были подвергнуты бактериологическому, микологическому и иммуноферментному анализу.
Органолептическая оценка проб корма позволила отнести их к доброкачественному, однако в результате микологических и микотоксикологиче-ских исследований проб комбикормов были выделены микроскопические грибы родов Fusarium и Penicillium, а также продуцируемые ими токсины, такие как афлатоксин, Т-2 токсин и ДОН (таблицы 14,15).
Кроме того, при бактериологическом исследовании проб кормов была выделена условно-патогенная микрофлора – Cluyvera cryocrescens (-гемолиз) и Staphylococcus aureus (-гемолиз).
Таким образом, комплексом проведенных исследований качество кормов по степени зараженности спорами микроспорических грибов и микробной обсемененности было оценено как «среднее».
Следует отметить, что наличие в кормах микотоксинов, даже в минимальных концентрациях, в процессе их длительного скармливания, способно привести к существенным патологическим мультиорганным изменениям в организме птиц. При этом ярко выраженных признаков токсикоза практически не наблюдается, заболевание протекает в латентной форме, и оценить истинные масштабы отравления цыплят-бройлеров токсическими метаболитами плесневых грибов очень сложно. Именно в этом случае необходимо в корма вводить комплексные поликомпонентные препараты, которые не только бы осуществляли связывание в желудочно-кишечном тракте вредных веществ, но и снижали общую токсическую нагрузку на организм, сводя к минимуму переход токсичных метаболитов в органы и ткани и, в первую очередь, в печени. Поэтому определение наиболее эффективной дозировки препарата гепрасан, использование которой позволило обеспечить необходимую эффективную защиту организма птицы, представлялось для нас одним из важных этапов изучения его профилактического действия.
Согласно схеме опыта (таблица 16) было сформировано шесть групп цыплят по 50 голов в каждой.
При проведении эксперимента учитывали следующие показатели: сохранность, динамику массы тела бройлеров, а также результаты биохимических показателей сыворотки крови и данные некропсии печени птицы.
Установлено, что введение в кормовые рационы гепрасана оказало положительное влияние на гравиметрические показатели массы тела и сохранность цыплят-бройлеров (таблица 17).
На протяжении всего периода исследований масса тела птицы всех опытных групп превышала показатели контрольных аналогов. И если в первую неделю значения прироста по опытным группам различались с контролем незначительно, за исключением группы, в которой препарат применялся в максимальной дозировке, то, начиная с 14-го дня введения в рационы гепрасана, тенденция увеличения массы тела прослеживалась во все периоды выращивания, имея четкую прямую зависимость от процентного соотношения вводимого препарата. При этом наибольшие различия отмечались в группах с применением 2,0%, 2,5% и 3,0% гепрасана на 21-й и 35 дни исследования. Так, в 21-дневном возрасте масса тела цыплят-бройлеров в 4-й группе увеличилась в сравнении с контролем на 2,1%, в 5-й – на 2,3%, и в 6-й – на 4,6% соответственно. На 35-й день различия по массе в этих группах составили 1,3%, 2,1% и 5,0%.
Введение препарата в корма оказало положительное влияние на сохранность птицы. В опытных группах она была выше, чем у контрольных аналогов, в среднем, на 2,3-3,8%. При этом у бройлеров контрольной группы отмечалось ослабление костяка, заболевание конечностей, в некоторых случаях – диарея.
Таким образом, оценивая влияние гепрасана на сохранность и массу тела цыплят-бройлеров, можно отметить, что наибольший эффект проявлялся при использовании доз препарата в диапазоне от 2,0 до 3,0%.
Оценку биохимического статуса птицы проводили по ряду показателей, характеризующих состояние основных обменных процессов в организме цыплят-бройлеров и функциональную активность клеток печени. Отбор крови проводился из вен внутренней поверхности крыла цыплят трижды – на 7-й, 20-й и 35-й дни исследования (таблица 18).
Установлено, что применение гепрасана оказало существенное влияние на уровень общего белка в сыворотке крови подопытных цыплят. Причем, динамика роста данного показателя была прямо пропорциональна процентному содержанию вводимого в рационы препарата.
Так, к концу исследований, концентрация общего белка относительно фоновых значений возросла по группам на 32,1% (контроль), 39,6% (1-я опытная), 46,3% (2-я опытная), 42,8% (3-я опытная), 51,6% (4-я опытная) и 54,4% (5-я опытная).
Относительно контрольных аналогов, рост был отмечен в во всех опытных группах бройлеров, за исключением первой (на 10,0%, 8,4%, 9,1% и 13,3% соответственно) с высокой степенью достоверности (Р 0,001) в 3-й и 6-ой опытных группах.
Анализ полученных данных по мочевине на финальной стадии исследования в опытных группах коррелировал с уровнем общего белка, что подтверждает положительное влияние гепрасана на белковый обмен и активизацию протеинсинтетической функции печени подопытной птицы. Тогда как в группе контрольных цыплят-бройлеров к 35-дневному возрасту, концентрация мочевины снизилась относительно предыдущих показателей (4,3±0,05 ммоль/л) на 11,6%, сохраняясь на уровне значений в недельном возрасте. И это притом, что в заключительный период откорма птицы, у бройлеров происходит интенсификация обменных процессов, приводящая к физиологическому увеличению ряда биохимических показателей сыворотки крови. В данном случае, мы наблюдали обратную картину. Наличие микотоксинов в кормовом рационе оказало угнетающее воздействие на синтез мочевины в печени цыплят и привело к возможному накоплению в ней продуктов ее распада – ионов калия, производных гуанидана, среднемолекулярных пептидов и т.д.
По уровню глюкозы повышение установлено у всех цыплят. Однако в опытных группах ее концентрация превышала значения контроля на 4,7%, 5,5%, 10,9%, 8,6%, 18,8% соответственно. Наибольшее ее содержание отмечалось в 4-й (при Р 0,01) и 6-й группах.
Холестерин содержится во всех тканях и клетках организма и необходим уже на самых ранних стадиях развития. Причем его общее количество в организме остается примерно на одном уровне при любых экзогенных воздействиях посредством механизма гомеостаза организма. Поэтому в наших исследованиях, уровень холестерина у подопытной птицы с возрастом существенно не изменялся и находился в пределах видовой нормы с некоторой тенденцией увеличения по опытным группам. Аналогичная картина прослеживалась и по динамике триглицеридов и билирубина.
Терапевтическая эффективность при микотоксикозах птиц
Целью наших исследований явилось изучение эффективности применения гепрасана при лечении микотоксикозов у цыплят-бройлеров, для чего в условиях вивария Краснодарского научно-исследовательского ветеринарного института на цыплятах была смоделирована клиническая картина сочетанно-го микотоксикоза для изучения симптомов интоксикации, течения патологического процесса и патологоанатомических изменений.
В опыте использовали 80 голов 18-дневных цыплят-бройлеров с массой тела 658,1-673,2 г, разделенных на две группы (опытную и контрольную), аналогичных по клинико-физиологическому состоянию. В течение 7 дней опытной группе птиц скармливали корм, естественным образом пораженный микотоксинами, который предварительно был подвергнут микологическому, токсико-биологическому и иммуноферментному анализу (согласно правилам взятия и пересылки кормов для санитарно-гигиенических и химико-токсикологических исследований (ГОСТ 13586.3-83). При этом в обследуемом корме было установлено повышенное содержание спор грибов (7,6104 в 1 г. корма), на основании чего комбикорм был отнесен к группе токсичных кормов. При этом количество спор гриба Aspergillus nidulans составило 2,0104, Fusarium sp. – 4,6104, Mucor sp. - 1,0104. Концентрация микотокси-нов в пробе составила по фумонизину В1 - 10,4 мг/кг, стеригматоцистину – 0,2 мг/кг, охратоксину А - 0,08 мг/кг, что превышало максимально допустимый уровень в 2,1; 2,0 и 1,6 раза. Токсичность кормов была подтверждена биопробой на лабораторных животных (мышах).
Цыплятам контрольной группы скармливали нетоксичные корма.
Основные условия содержания птицы (параметры микроклимата, световой режим, плотность посадки, кормление и поение) были одинаковыми для обеих групп и соответствовали «Руководству по выращиванию бройлеров кросса «Росс-308».
В течение всего периода кормления за птицей вели клинический контроль, учитывая клиническое состояние, аппетит, поедаемость корма, изменения массы тела, поведенческие реакции.
В результате исследований установлено, что скармливание токсичного корма оказало отрицательное влияние на рост и развитие опытных цыплят-бройлеров. Первые признаки интоксикации микотоксинами у птицы стали проявляться на 2–3-й дни экспериментального периода и проявились снижением аппетита, повышенной жаждой, резким угнетением. В последующие дни цыплята были малоподвижны, в основном стояли, сбившись с кучу и опустив голову. Отмечалась сильная диарея с жидкими водянистыми каловыми массами и зловонным запахом. Перьевой покров был взъерошен, без блеска, тусклый, гребень и сережки бледные, кожа багрово-синюшного цвета. На 6–7 сутки был отмечен падеж 9 опытных цыплят со следами истощения. Выжившие цыплята значительно отставали по массе тела от контрольных аналогов (таблица 23).
Сохранность цыплят в опытной группе составила 77,5%, а среднесуточный прирост был ниже контроля на 46,5%.
Выделенные концентрации микотоксинов хотя и превышали МДУ для птицы, однако сами по себе смертельными не являлись, но, по-видимому, сочетание данных токсинов дало резко выраженный потенцированный токсический эффект, сопровождающийся яркими клиническими признаками и приводящий к высокой смертности цыплят.
Следующим этапом исследований явилось определение лечебной эффективности гепрасана при сочетанных микотоксикозах, а также его влияние на рост и развитие цыплят-бройлеров, для чего в продолжение эксперимента из 30-ти опытных цыплят-бройлеров 25-ти дневного возраста было сформировано 3 группы – 2 опытных и одна контрольная.
Первой группе опытных цыплят в пораженные микотоксинами корма дополнительно вводили гепрасан в количестве 2% от общей массы, второй опытной группе (положительный контроль) – в корма вносили 2% бентонита, цыплятам третьей (контрольной группы) препараты не назначали. При этом птицу всех групп в течение 2-х недель продолжали кормить токсичными кормами, учитывая клиническое состояние, степень выраженности симптомов интоксикации, динамику биохимических показателей сыворотки крови, а также патологоанатомические изменения органов и тканей. Кровь для исследований отбирали дважды – перед началом введения препаратов и на момент окончания опытного периода.
В ходе проведенного эксперимента установлено положительное влияние гепрасана на клиническое состояние цыплят-бройлеров при терапии ми-котоксикоза. Видимое снижение клинических симптомов интоксикации отмечалось с 3–4-го дня лечения, что проявилось улучшением аппетита, увеличением потребляемости корма, повышением двигательной активности, улучшением качества перьевого покрова и сформированностью помета. Слизистые оболочки ротовой полости становились бледно-розовыми, без наложений и изъязвлений. Лечебная эффективность проведенной терапии составила 90%.
Во второй опытной группе улучшение клинического состояния стало проявляться на 4–5 дни (повысился аппетит, снизилась жажда, произошло уплотнение помета), однако у двух цыплят улучшение состояния отмечено не было, на 9-й день опыта пал один цыпленок, на 12-й – еще один. Таким образом, лечебная эффективность от применения бентонита составила 80%.
В контрольной группе с каждым днем отмечалось нарастание симптомов интоксикации. При визуальном осмотре наблюдали вялость, отказ от корма, значительное загрязнение перьевого покрова, налипание помета в области клоаки. На 7–9 сутки у четырех цыплят отмечалось ярко выраженное угнетение, они упали на задние конечности и на 10–13 день эксперимента пали. Сохранность в этой группе была самой низкой, составив всего 60%.
Улучшение состояния опытной птицы подтверждалось и положительным приростом массы тела цыплят-бройлеров. Так, в первой опытной группе среднесуточный прирост на конец эксперимента был выше на 19,9% от прироста контрольных цыплят и на 2,7% выше от прироста птицы второй опытной группы, что указывает на положительное влияние изучаемого препарата на физиологические функции, развитие и рост цыплят (таблица 24).
Введение в рацион птицы гепрасана и бентонита сопровождалось положительными изменениями ряда биохимических показателей с приоритетом по ряду показателей у цыплят первой опытной группы (таблица 25).