Содержание к диссертации
Введение
2. Обзор литературы 9
2.1 Современное представление о раневом процессе и лечении гнойных ран 9
2.2 Биофармацевтические аспекты применения мазей и характеристика сополимеров акриловой кислоты 20
2.3 Характеристика диоксидина и его применение 35
2.4 Характеристика аминогликозидов (гентамицна) 43
3. Материалы и методы исследований 52
4. Результаты собственных исследований 57
4.1 Структура и распространнность хирургической патологии у крупного рогатого скота в хозяйствах Краснодарского края 57
4.2 Изучение антимикробной активности и оптимального соотношения компонентов в препарате 61
4.3 Состав, физико-химические свойства и контроль качества гента-диовета 62
4.4 Специфическая активность препарата 67
4.5 Токсикологическая оценка мази гентадиовет 69
4.2.1 Острая токсичность 69
4.2.2 Хроническая токсичность 73
4.2.3 Патоморфологические и гистологические исследования 83
4.2.4 Местно-раздражающее действия мази гентадиовет 91
4.5 Эффективность гентадиовета при экспериментальных инфицированных кожно-мышечных ранах 95
4.5.1 Эффективность при экспериментальных ранах у лабораторных животных 95
4.5.2 Эффективность мази гентадиовет при экспериментальных ранах у крупного рогатого скота 96
4.6 Эффективность мази гентадиовет при инфицированных кожно-мышечных ранах 102
4.7 Экономическая эффективность результатов исследования 122
5. Заключение 126
6. Выводы 132
7. Практические предложения 134
8. Список литературы 135
9. Приложения 162
- Биофармацевтические аспекты применения мазей и характеристика сополимеров акриловой кислоты
- Состав, физико-химические свойства и контроль качества гента-диовета
- Патоморфологические и гистологические исследования
- Эффективность мази гентадиовет при инфицированных кожно-мышечных ранах
Введение к работе
Актуальность темы исследования. Лечение ран и их осложнений остается одной из наиболее важных и актуальных проблем современной ветеринарной хирургии. В хозяйствах промышленного типа ряд факторов, таких как гиподинамия, стрессы, содержание большого количества животных на ограниченной площади, нарушение технологических режимов, ветеринарно-санитарных правил, ведет к частому травмированию животных. Положение осложняется и тем, что в современных животноводческих хозяйствах раневая инфекция, как правило, является постоянным спутником каждого механического повреждения тканей животного и, тем самым, наносит отрасли значительный экономический ущерб (В.А. Антипов с соавт., 2009; А.А. Сте-кольников с соавт., 2007; Г.С. Кузнецов, 1980; D. Whitby, 1995).
В настоящее время ветеринарными специалистами используется разнообразные методы и средства лечения гнойных ран, при этом местное лечение ран с помощью мазей остатся самым распространенным в силу своей результативности (Л.П. Трояновская, 2011; А.Н. Безин, 2014; Э.И. Веремей, 1989; Б.С. Семенов с соавт., 1997).
Среди лекарственных средств для наружного применения широко используются мази и гели на основах, которые не травмируют поврежденную поверхность при нанесении, обеспечивают дренаж ран, а лекарственные вещества, входящие в их состав, проявляют оптимальное лечебное действие. При этом современные препараты должны обладать разнонаправленным действием и сочетать в себе такие свойства, как широкая антимикробная активность, высокая дегидратирующая способность, стимуляция регенерации тканей.
Перспективным в этом аспекте является разработка ветеринарных лекарственных препаратов на основе производных акриловой кислоты, включающих антибактериальные, противовоспалительные соединения, а также стимуляторы регенерации, что и определило тему нашего исследования.
Степень разработанности проблемы. Развитие синтетической химии и особенно химии полимеров в последние десятилетия способствовало использованию в фармации вспомогательных веществ из класса полимеров, что в свою очередь, привело к совершенствованию технологии, улучшению качества, стабильности и эффективности лекарственных форм. Одним из передовых направлений в технологии мягких лекарственных форм является использование производных акриловой кислоты – карбополов, что обусловлено их ценными свойствами: при нанесении на кожу они образуют тончайшие гладкие пленки; обеспечивают пролонгированный эффект, а также высокую биодоступность и равномерное высвобождение лекарственных веществ; хорошо распределяются по слизистым и кожной поверхности; обладают микробиологической устойчивостью; инкорпорируют лекарственные вещества гидрофильной и липофильной природы.
Наибольший вклад в развитие этого направления фармацевтической технологии в России внесли труды сотрудников ВНИИФ – М.Т. Алюшина, В.Н. Ли, К.В. Алексеева и их школ (1976-2015).
Разработкой комплексных мазей для лечения гнойно-мышечных ран у животных в ветеринарной медицине занимались ученые: В.А. Лукьяновский, 1997; Ф.Н. Чеходариди, 2005; И.А. Родин, 2016 и другие.
В связи с тем, что на фармацевтическом рынке России мазей для ветеринарного применения на основе карбополов, включающих диоксидин и ген-тамицина сульфат, не представлено, то уровень разработки темы диссертации потребовал дополнительной ее конкретизации за счет создания мягкой лекарственной формы с высокой лечебной эффективностью при гнойно-мышечных ранах у крупного рогатого скота, что и было осуществлено в настоящей диссертационной работе.
Цель и задачи исследований. Цель работы - разработка мази гента-диовет, изучение ее фармако-токсикологических свойств и лечебной эффективности при инфицированных кожно-мышечных ранах у крупного рогатого скота.
Для достижения цели были поставлены следующие задачи:
провести мониторинг распространнности хирургической патологии у крупного рогатого скота в некоторых хозяйствах Краснодарского края;
разработать состав мази гентадиовет, изучить ее физико-химические свойства, стабильность и определить срок годности препарата;
провести доклинические исследования мази, включающие изучение антимикробной активности, токсикологическую оценку, а также эффективность применения гентадиовета при экспериментальных ранах у животных;
изучить эффективность гентадиовета при лечении инфицированных кожно-мышечных ран у крупного рогатого скота в производственных условиях;
рассчитать экономическую эффективность применения препарата. Научная новизна. Разработан состав мази гентадиовет, изучены ее физико-химические и специфические свойства. Обоснованы показатели качества разработанной мази и установлен срок ее годности. Впервые проведено определение комплекса токсикологических показателей гентадиовета, позволившее выявить степень безопасности применения препарата. Изучен лечебный эффект гентадиовета при заживлении экспериментальных инфицированных кожно-мышечных ран у животных и выявлено положительное действие мази на течение таких поражений. В производственных условиях экспериментально доказана эффективность препарата при лечении гнойных кожно-мышечных ран у крупного рогатого скота. Рассчитана экономическая эффективность применяемых схем лечения.
Теоретическая и практическая значимость работы. Для ветеринарной медицины предложен новый препарат - гентадиовет, позволяющий достигнуть положительных результатов при терапии инфицированных ран у животных и сократить сроки лечения.
Проведнные исследования содержат новое решение проблемы терапии гнойной раневой патологии у крупного рогатого скота, заключающееся в применении мази гентадиовет, что ускоряет сроки очищения ран от некротических масс, появление здоровых грануляций и эпителизацию гнойных ран,
при этом полное выздоровление травмированных животных происходит на 5-6 суток раньше по сравнению с традиционными способами лечения.
Данные проведенных исследований учтены при разработке научно-технической документации (временная инструкция по применению препарата гентадиовет в ветеринарии).
Результаты работы внедрены в хозяйствах Краснодарского края: на мо-лочно-товарных фермах учебно-опытных хозяйств «Кубань» КубГАУ и «Племзавод учхоз Краснодарское КГАУ».
Изложенные в диссертационной работе материалы могут быть использованы при составлении научно-информационной литературы, в учебном процессе сельскохозяйственных ВУЗов, а также в ветеринарной хирургической практике.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
распространнность хирургической патологии у крупного рогатого скота в некоторых хозяйствах Краснодарского края (учебно-опытных хозяйствах «Кубань» КубГАУ и «Племзавод учхоз Краснодарское КГАУ»);
изучение антимикробной активности и оптимального соотношения компонентов в препарате;
состав, физико-химические свойства и контроль качества мази гентадиовет;
специфическая активность мази;
токсикологическая оценка препарата;
эффективность гентадиовета при экспериментальных инфицированных кожно-мышечных ранах у животных;
клиническое изучение мази гентадиовет при лечении раневой патологии у крупного рогатого скота в условиях животноводческого хозяйства.
Личное участие автора. Все приведенные в диссертации данные получены при личном участии автора, как на этапе постановки задач и разработки методических подходов к их выполнению, так и при наборе первичных фактических данных, статистической обработке и анализе полученных результатов, написании и оформлении публикаций. Выводы диссертации сформулированы автором.
Апробация работы. Результаты экспериментальных и клинических исследований, являющихся основой диссертации, доложены и обсуждены: на заседаниях Ученого совета Краснодарского НИВИ (2013 - 2017 гг.); на Международной научно-практической конференции, посвященной 85-летию Самарской НИВС «Актуальные проблемы развития ветеринарной науки» (Самара, 2014); на Международной научно-практической конференции «Интеграция науки и практики в обеспечении ветеринарного благополучия» (Казахстан, Алматы, 2015); на Международной научно-практической конференции, посвященной 70-летию Краснодарского НИВИ «Актуальные проблемы современной ветеринарной науки и практики» (Краснодар, 2016).
Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 10 научных статьях, 4 из которых в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 162 страницах машинописного текста и состоит из разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложения. Список использованной литературы включает 267 источников, в том числе иностранных – 71. Работа иллюстрирована 19 таблицами, 45 фотографиями и рисунками.
Биофармацевтические аспекты применения мазей и характеристика сополимеров акриловой кислоты
Мази "Unguenta" – это мягкие лекарственные формы, имеющие вязкую консистенцию и назначаемые для наружного применения. Мази являются официнальной лекарственной формой, их получают путем смешивания различных лекарственных веществ с формообразующими веществами, называемыми мазевыми основами [6, 134].
Данные лекарственные формы относятся к числу древнейших, упоминание об их применении с лечебной целью встречается еще в папирусе Эберса, относящегося к XVI веку до н.э. Мази широко использовались Гиппократом, Авиценной, Галеном. Широкое введение мазей в медицинскую практику связано с именем знаменитого французского хирурга Амбруаза Паре (1517– 1590), который первым отказался от прижигания ран и завоевал огромную популярность в связи с разработкой безболезненных методов лечения. [163, 220].
Фармакопея определяет мази как мягкую лекарственную форму, предназначенную для нанесения на кожу, раны, слизистые оболочки. В зависимости от консистенции, степени вязкости и упругости к мягким лекарственным формам можно отнести следующие: мази (Ointments); кремы (Creams);гели (Gels); кашки (Еlectuarium); пасты (Pastes); линименты (Liniments); суппозитории (Suppositorium); мягкие желатиновые капсулы (Capsulis); пластыри (Emplastra).
Важнейшими показателями мягких лекарственных форм являются стабильность, структурно-механические характеристики и резорбтивные свойства. Требования, предъявляемые к качеству мягких лекарственных форм, содержатся в общих фармакопейный статьях и в зарубежных фармакопеях [120, 126, 157, 189].
В мировой практике при технологии производства мягких лекарственных форм применяют значительное количество различных основ, однако идеальной основы до настоящего времени нет. В качестве мазевых основ обычно используют вещества или смеси веществ, обладающие высокой мажущей способностью, хорошо смешивающиеся, но не реагирующие с лекарственными веществами и не изменяющие своих свойств под влиянием света и воздуха. Основы являются одновременно структурообразователями, пластификаторами и носителями, обеспечивающими равномерное распределение действующих веществ в лекарственном препарате. Основы придают определенный объем лекарственной форме, консистентность, распределяе-мость на коже. В зависимости от состава она может оказывать влияние на высвобождение, биодоступность и терапевтическое действие лекарственного вещества [21, 97, 168, 204].
При классификации основ в ГФ заложены наиболее характерные их признаки (сродство к воде, полярным или неполярным веществам), что позволяет выбрать оптимальный способ введения выбранных основ в мягкие лекарственные формы [50, 197].
Мягкие лекарственные средства и их основы могут быть классифицированы по следующим признакам:
- по типу дисперсных систем: на однофазные (растворы, сплавы), двухфазные (эмульсии типа масло/вода (м/в) и в/м, суспензии, коллоидные дисперсии высших жирных спиртов или кислот, стабилизированные гидрофильными ПАВ) и многофазные системы (множественные эмульсии, а также комбинированные системы);
- по сродству к воде: на гидрофильные и гидрофобные (липофильные);
- по способности абсорбировать воду и механизму абсорбции;
- по концентрации и дисперсному состоянию вспомогательных и/или лекарственных веществ;
- по реологическим свойствам при установленной температуре хранения и условиях применения.
По функциональному назначению вспомогательные вещества, входящие в состав мазей и других мягких лекарственных средств, можно разделить на следующие группы:
- мягкие основы-носители (вазелин, ланолин и др.);
- воду и гидрофильные растворители (пропиленгликоль, спирты этиловый, полиэтиленгликоли 200-600, пропиленкарбонат, димексид, глицерин);
- вещества, повышающие температуру плавления и вязкость основ (воски, парафин, гидрогенизированные растительные масла, спермацет, поли-этиленгликоли с высокой молекулярной массой и др.); - гидрофобные растворители (изопро-пилпальмитат, минеральные и растительные масла, полиалкилсилоксаны, изопропилмиристат, бензилбензоат и др.);
- гелеобразователи (карбомеры, производные целлюлозы, альгиновая кислота и ее соли, бентонит, полиэтилен, полиэтиленгликоли 1500-8000, каолин, желатин и др.);
- эмульгаторы типа вода в масле (холестерин, высшие жирные спирты, спирты шерстного воска, глицерилмоноолеат, глицерилмоностеарат и др.);
- эмульгаторы типа масло в воде (соли высших жирных кислот, натрия лау-рилсульфат, твины, полиоксиэтиленгликолевые эфиры высших жирных спиртов и др.);
антиоксиданты (аскорбиновая кислота, а-токоферол, лимонная кислота, про-пилгаллат и др.);
- стабилизаторы рН (лимонная кислота, фосфорнокислые соли натрия и др.).
- антимикробные консерванты (мирамистин, бензойная и сорбиновая кислоты и их соли, этиловый спирт, пропиленгликоль и др.) [41, 47, 114, 245].
Принцип подбора местных мазевых лекарственных средств и применения методов лечения, эффективных в той или иной фазе раневого процесса, практически отработан и традиционно не пересматривается в течение длительного времени [187].
Применение местных антисептиков является неотъемлемой частью лечебного процесса при гнойных ранах. При выборе антисептиков предпочтение отдается препаратам с универсальным, широким спектром действия, активным против смешанной микрофлоры. Несмотря на длительное применение данного метода лечения, выявляются все новые нюансы использования давно известных антисептиков [55, 190, 258].
После очищения раны от гнойно-некротического содержимого и достижения ее бактериологической санации наступает фаза раневого процесса, когда одним из условий скорейшего заживления ран является способность препаратов оказывать бактерицидное действие в целях предупреждения вторичной инфекции; защитить грануляционную ткань от механических повреждений, а также оказывать умеренное влагопоглащающее действие и стимулировать рост грануляций. Оптимальным вариантом является одновременное сочетание этих факторов в одном препарате [93, 111, 226].
Основные требования к лекарственным препаратам, применяемым в третьей фазе, во многом совпадают с требованиями к препаратам для лечения второй фазы раневого процесса: эффективная защита грануляционной ткани, профилактика вторичного инфицирования раны, ускорение эпителизации.
Когда рана уже практически очистилась от гнойного содержимого (на 5–7 сутки лечения), рекомендуют применять мази, которые кроме противо-микробного действия усиливают восстановление целостности поврежденных тканей, а также выстилают рану молодой грануляционной тканью [169, 211].
Хорошим ранозаживляющим эффектом обладают метилурациловая мазь, тиотриазолин, этоний, последний, кроме того, анестезирует раневую поверхность. Данные мази особенно широко используют в дерматологии при вяло заживающих дерматитах и т. д. На последней стадии, когда рана начинает заживать, применяются препараты с выраженным эффектом стимуляции роста клеток кожи [49, 76, 121, 240, 255].
В последние годы отмечается повышенное внимание к вспомогательным веществам, выполняющим роль носителей лекарственных веществ в мягких лекарственных формах. Они должны обеспечивать терапевтический эффект, хорошую ее переносимость, не проявлять общетоксического, раздражающего и сенсибилизирующего действия на организм, иметь оптимальные реологические свойства и стабильность при хранении [150]. Качество вспомогательных веществ должно соответствовать нормативным документам и не изменяться в процессе изготовления, хранения и применения лекарственных форм [22, 253].
Состав, физико-химические свойства и контроль качества гента-диовета
Основным объектом исследования являлся препарат гентадиовет, разработанный в лаборатории фармакологии Краснодарского НИВИ.
Предложенная фармацевтическая композиция представляет собой мягкую лекарственную форму – мазь, компоненты которой позволяют одновременно воздействовать на разные звенья раневого процесса, проявляя проти-вомикробное, противовоспалительное, ранозаживляющие, гиперосмолярное действие.
Разработка и создание новых комбинаций эффективных химиотерапев-тических синтетических препаратов, обеспечивающих потенцирование бактерицидного действия и эффективное подавление гнойной инфекции, является актуальной задачей фармацевтической науки. В связи с этим одним из путей решения проблемы является создание многокомпонентной мази с использованием соединений, обладающих принципиально различным механизмом антимикробного действия.
Гентамицина сульфат относится к группе аминогликозидных антибиотиков. Оказывает бактериологическое действие в отношении многих грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов. В связи с широким спектром действия гентамицин назначают при смешанной инфекции, а также в случаях, когда возбудитель не установлен. Механизм действия ген-тамицина связывают с нарушением синтеза полипептидов микробной клетки в рибосомах.
Диоксидин (производное ди-N-окиси хиноксалина: 1,4 Ди-N-окись 2,3 бис-(оксиметил) хиноксалина) относится к препаратам с бактерицидным типом действия. В основе механизма действия диоксидина лежит повреждение биосинтеза ДНК микробной клетки с глубокими нарушениями структуры нуклеоида уже при действии субингибирующих концентраций. Кроме этого препарат снижает активность внеклеточной нуклеазы и плазмокоагулазы у микроорганизмов, что приводит к нарушению функции генетического аппарата микробной клетки и, в результате, подавляется биосинтез биологически активных макромолекул, являющихся факторами патогенеза. Повышение активности в анаэробных условиях характерно для всех производных ди-N-окиси хиноксалина с антимикробной активностью и не описано для других классов антимикробных веществ. В этом принципиальное отличие механизма действия диоксидина от механизма действия других антимикробных препаратов.
Основной целью сочетанного применения диоксидина и гентамицина, явилось расширение спектра антибактериального действия, восполнение пробелов в спектре каждого из компонентов комбинации и предупреждение формирования устойчивости микроорганизмов.
В состав гентадиовета также входят:
Метилурацил – мощный репарант, производное пиримидина, структурный элемент нуклеиновых кислот, который характеризуется анаболическим и антикатаболическим эффектом, ускоряет регенерацию, заживление ран, стимулирует клеточные и гуморальные звенья иммунитета и гемопоэз, проявляет противовоспалительное действие;
Экстракт цветов ромашки проявляет антимикробное, противовоспалительное и местно-обезболивающее действие;
Карбопол при использовании в мягких лекарственных формах имеет ряд преимуществ: высокой вязкостью при низких концентрациях (менее 1%), значительной эмульгирующей и суспендирующей способностью, обеспечением высокой биодоступности и пролонгирующего эффекта, возможностью использования в большинстве видов лекарственных форм, значительной биоадгезией, отсутствием раздражающих свойств, микробиологической устойчивостью, удобством применения, совместимостью со многими группами лекарственных веществ и др. Эта основа обеспечивает наиболее высокий уровень высвобождения компонентов из мази. Принципиально новым свойством, которое придает карбопол входящим в состав многокомпонентных мазей антибиотикам и антисептикам, является способность образовывать с ними комплексные соединения и транспортировать их вглубь тканей, где локализуются микробы.
При разработке мягкой лекарственной формы (мазь гентадиовет) использовался следующий способ получения готового препарата. Диоксидин, гентамицина сульфат и метилурацил, взвешивали в определенных соотношениях.
Порошок карбомера (Карбопол-934) насыпают тонким слоем на поверхность рассчитанного количества экстракта цветов ромашки и оставляют набухать в течение нескольких часов. Затем перемешивают с помощью механической мешалки со скоростью 100 об/мин. до получения гомогенного гидрогеля. Для получения однородной дисперсии карбомер медленно добавляют к растворителю при средней скорости перемешивания и продолжают перемешивание в течение 15-20 минут. При этом не рекомендуется использовать интенсивное перемешивание при высоких скоростях, т.к. это может препятствовать разворачиванию молекул карбомера. Очень важно, чтобы карбомер сразу равномерно распределялся в воде, не образуя комков, т.к. на поверхности комка формируется прочный внешний слой гидратированного карбомера. Растворитель медленно диффундирует через этот сольватированный слой к сухому внутреннему слою. Крабопол оставляют на 1-2 часа, после чего проверяют pH фактор. Проводят реакцию нейтрализации, добавляют при постоянном перемешивании по каплям раствор щелочи до приобретения рН основы = 7,0.На выходе должна получиться однородная прозрачная гелеобразная масса, имеющая светло-коричневый оттенок. В реактор с мазевой основой при перемешивании последовательно загружают все компоненты, перемешивают до однородности, получая целевой продукт – мазь гентадиовет, который фасуют в банки.
По физико-химическим свойствам гентадиовет представляет собой однородную вязко-пластичную упругую массу гелеобразной консистенции, от светло-желтого до желто-коричневого цвета, рН которой находится в пределах 6,9-7,0 (Рис. 7).
Мазь гентадиовет должна быть однородной консистенции, от светло желтого до желто-коричневого цвета, не иметь прогорклого запаха, а также признаков физической нестабильности (агрегации частиц, фазового расслоения, коагуляции).
Однородность гентадиовета определяли по следующей методике: 4 пробы препарата по 20-30 мг каждая, помещали по 2 пробы на предметное стекло, накрывали вторым предметным стеклом и плотно прижимали до образования пятен диаметром около 2 см. При рассмотрении полученных проб невооруженным глазом (на расстоянии около 30 см от глаз) во всех четырех пробах не должно быть включений и признаков физической нестабильности.
Определение рН: навеску гентадиовета заливают 50 мл дистиллированной воды с температурой 50-600 С и встряхивают на вибраторе в течение 30 мин. Полученную вытяжку фильтруют и проводят потенциометрическое титрование по методике ГФ.
При лечении ран немаловажная роль отводится значению рН среды, создаваемой лекарственным препаратом на месте его локализации. Установленные нами величина рН мази была близка к нейтральной, что является физиологичным для кожи и слизистых оболочек (6,98±0,1). При более низких значениях рН может происходить осаждение полимера (карбомера), при более высоких значениях рН – падение вязкости препарата.
Стабильность мазей также определяется неизменностью содержания в них лекарственных веществ (в пределах установленного допуска), для этого нами в динамике течение 2-х летнего периода контролировались показатели основных компонентов гентадиовета: диоксидина, гентамицина сульфата и метилурацила.
Определение стабильности разработанной мази проводили согласно ОФС.1.1.0009.15 «Определение сроков годности лекарственных средств». Сроки хранения мази в естественных условиях устанавливали посредством мониторинга показателей качества через каждые 3 месяца в течение первого года хранения и каждые 6 месяцев в дальнейшем.
Для определения содержание диоксидина 0,15 г препарата помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл, смешивают с 50 мл уксусного ангидрида и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты до появления чисто-желтого окрашивания (индикатор – 0,3 мл 0,1 % раствора кристаллического фиолетового). Параллельно проводят контрольный опыт.1 мл 0,1 М раствора хлорной кислоты соответствует 22,22 мг диоксидина C10H10N2O4.
Патоморфологические и гистологические исследования
Животные, используемые в первой серии экспериментов по изучению хронической токсичности мази гентадиовет (белые беспородные крысы), в конце опыты были подвергнуты полной некропсии с оценкой поверхности тела, всех проходов, черепной, грудной, брюшной полостей и их содержимого. Крыс забивали декапитацией под эфирным наркозом, забор органов для гистологического исследования проводили в течение 25 мин после остановки сердца. Для макроскопического исследования и расчета массовых коэффициентов были извлечены: сердце, легкие, селезенка, печень, почки, головной мозг. Установлено, что отклонения в коэффициентах массы внутренних органов белых крыс, при применении гентадиовета в хроническом эксперименте, в опытных группах по сравнению с контролем были незначительны. Однако следует отметить тенденцию к дозозависимому увеличению коэффициента массы печени, так как в первой опытной группе (препарат вводился в наивысшей дозе) этот показатель превосходил контроль на 10,9%. В группах же с меньшей дозировкой вводимого образца подобных изменений не установлено.
При патологоанатомическом исследовании у крыс 2 и 3 опытных групп, а также у интактных макроскопических изменений не выявляли. Упитанность всех животных была средняя, количество жира в подкожной клетчатке и на сальнике небольшое. Расположение органов в полостях анатомически правильное (рис. 11). Плевра и брюшина была окрашена в светло-розовый цвет, имела влажную, гладкую, блестящую поверхность.
Сердце не увеличено, конусовидной формы. Перикард гладкий, блестящий. В перикардиальной полости незначительное количество прозрачной светло-желтой жидкости. Миокард окрашен в светло-коричневый цвет, по консистенции умеренно плотный. Соотношение толщины правой половины к левой определяется как 1:3. Эндокард гладкий, блестящий, влажный, темно красного цвета.
Легкие не увеличенные, симметричные, мягкой консистенции. С поверхности и на разрезе окрашены равномерно в розовый цвет. Плевра гладкая, блестящая. Слизистая оболочка трахеи и бронхов гладкая, влажная, блестящая, розового цвета. Селезенка не увеличена, умеренно плотной консистенции, вытянутой формы. Капсула гладкая, блестящая. Цвет с поверхности и на разрезе однородный темно-коричневый, соскоб незначительный кровянистый. Желудок заполнен небольшим количеством кормовых масс. Слизистая оболочка была влажная, гладкая, блестящая, светло-розового цвета. Тонкий и толстый отдел кишечника местами был заполнен содержимым. Слизистая оболочка на всем протяжении была влажная, гладкая, блестящая светло-розового цвета. Печень не увеличена в размере. Капсула гладкая, блестящая. С поверхности и на разрезе равномерно окрашена в темно-коричневый цвет. На разрезе рисунок органа хорошо выражен. Соскоб с поверхности разреза незначительный кровянистый. Проходимость желчных протоков сохранена. Желчный пузырь заполнен желчью водянистой консистенции темно-зеленого цвета. Слизистая оболочка влажная, гладкая, блестящая. Поджелудочная железа не увеличенная, дольчатая, вытянутой формы, мягкой консистенции, светло-розового цвета. На разрезе рисунок хорошо выражен, соскоб незначительный. Почки не увеличенные, симметричные, окрашены в светло-коричневый цвет. Жировая капсула хорошо выражена серо-белого цвета. Фиброзная капсула хорошо отделяется. На разрезе рисунок между корковой и мозговой зоной хорошо выражен. Почечная лоханка пустая, слизистая оболочка ее гладкая, влажная, блестящая, светло-розового цвета. Мочевой пузырь заполнен небольшим количеством водянистой консистенции желтого цвета мочи. Слизистая оболочка его гладкая, влажная, блестящая, светло-розового цвета. Головной мозг не увеличен, слегка вытянутой формы, мягкой консистенции, мозговые извилины хорошо выражены. С поверхности окрашен в серый, а в глубине – в белый цвет. В мозговых желудочках небольшое количество прозрачной желтоватой жидкости. Кровеносные сосуды оболочек головного мозга наполнены умеренно.
В первой опытной группе, в которой препарат вводился в наивысшей дозе, отмечена инъекция сосудов печени и их большее, по сравнению с другими группами кровенаполнение.
Желудок при вскрытии пуст, слизистая гиперемирована, в подслизи-стой дна его мелкоточечные едва заметные кровоизлияния. Слизистая оболочка тонкого отдела кишечника также гиперемирована, с наличием в ней мелкоточечных кровоизлияний. В просвете тонкого отдела кишечника у отдельных крыс отмечается скопление незначительного количества слизи.
У крыс 2 и 3 опытных групп, а также у интактных при гистологическом исследовании сердца, легких, селезенки, печени, почек, желудка, тонкого отдела кишечника и поджелудочной железы изменений структуры выявлено не было.
Все структурные компоненты сердца были хорошо выражены. Эпикард был представлен рыхлой соединительной тканью с большим содержанием оксифильно окрашенных волокон и небольшого количества клеток – фиброцитов. Мезотелий, покрывающий эпикард видимых изменений не имел. В миокарде хорошо определялись тяжи мышечных клеток – кардиомиоцитов, разделенные между собой соединительнотканными прослойками. Расположенные в них, как мелкие, так и крупные кровеносные сосуды, изменений стенок не имели. Мышечные волокна располагались правильно в параллельном направлении. В каждом мышечном волокне отчетливо определялись сарколемма, цитоплазма с поперечнополосатой исчерченностью и центрально расположенные ядра. Между собой мышечные волокна были связаны перекладинами в общую сеть. Проводящая система сердца была представлена атипическими мышечными волокнами, которые без четких границ переходили в основные мышечные волокна. В отдельных участках эндокарда отчетливо просматривались внутренний, средний и наружный слои. В тонких его участках такого подразделения не отмечали.
Структурные компоненты легких хорошо определялись и были представлены различного диаметра бронхами, альвеолами, междольковой соединительной тканью скровеносными сосудамиразличного диаметра. Бронхи имели разветвляющую структуру и заканчивались альвеолами. Внутренняя поверхность альвеол была выстлана альвеолярным эпителием.
Все структурные компоненты селезенки имели обычное гистологическое строение. Соединительнотканная капсула и трабекулы, а также красная и белая пульпа паренхимы органа хорошо определялись. Кровеносные сосуды различного калибра нарушений структуры не имели. В ретикулярной ткани паренхимы четко дифференцировались два е компонента красная и белая пульпа. Фолликулы белой пульпы имели различную величину, округлую форму и состояли из большого количества малых лимфоцитов. В центре каждого фолликула располагалась центральная артерия. Красная пульпа была представлена ретикулярной тканью, большим количеством эритроцитов и небольшим количеством разных форм лейкоцитов.
У большинства животных обеих групп дольки печени были хорошо выражены и отделены друг от друга междольковыми соединительнотканными перегородками. Печеночные балки в печеночных дольках сохраняли свое радиальное расположение. Оксифильно окрашенная цитоплазма и базофиль-но окрашенные ядра гепатоцитов хорошо определялись. Некоторые гепато-циты находились в состоянии митоза и имели по два четко выраженных ядра. Синусоидные капилляры и печеночные триады видимых изменений своей структуры не имели.
Все соединительнотканные структуры почек были хорошо выражены. В паренхиме их наблюдалось четкое разделение на корковое и мозговое вещество. В корковом веществе хорошо определяются крупные почечные тельца нефронов. Капсула нефрона имела выраженную узкую полость. Капилляры в почечном тельце не расширены. Вокруг почечного тельца расположены проксимальные извитые канальцы, выстланные однослойным призматическим эпителием. В цитоплазме некоторых эпителиоцитов выявлялось характерное для этого отдела помутнение, образующееся за счет происходящего в них процесса реадсорбции. Мозговое вещество содержало радиально расположенные собирательные трубки и петли Генле, между которыми находились тонкие соединительнотканные прослойки с мелкими и крупными сосудами. В кровеносных сосудах нарушений структуры не отмечали.
Слизистая оболочка желудка имела характерную складчатость, железистый эпителий ее был хорошо выражен. Главные клетки имели небольшой размер, призматическую и кубическую форму, базофильно окрашенную цитоплазму. Оксифильно окрашенные ядра у таких клеток были расположены на периферии. Обкладочных клеток по количеству было меньше, но по размеру они были крупнее, и поэтому выступали за пределы главных клеток. Форма их была овальная или грушевидная. Ядра у этих клеток были расположены по центру.
В строении стенки тонкого отдела кишечника хорошо определялись три оболочки: слизистая, мышечная и серозная. Слизистая оболочка на всем протяжении была выстлана однослойным цилиндрическим эпителием, под которым располагалась собственная пластинка, образованная рыхлой соединительной тканью, среди которой хорошо определялись кровеносные сосуды. На всем своем протяжении собственная пластинка была диффузно инфильтрирована лимфоидной тканью. При этом лимфоидная ткань имела вид небольших скоплений из лимфатических клеток, а также крупные группы лимфоцитов, которые образовывали лимфатические фолликулы. Мышечная пластинка слизистой оболочки была представлена одиночными, продольно расположенными гладкомышечными клетками.
Основным компонентом слизистой оболочки являлись кишечные ворсинки (выросты) и крипты (углубления). Среди клеток цилиндрического эпителия, покрывающего ворсинки, хорошо определялись самые высокие клетки – каемчатые. Ядра их овальной формы, располагались в нижней трети, а на апикальном конце располагались микроворсинки, которые формировали щеточную каемку. Между каемчатыми клетками беспорядочно располагались бокаловидные клетки. Между основаниями ворсинок располагались крипты (общекишечные железы). Среди клеток цилиндрического эпителия, выстилающего крипты определялись каемчатые, бокаловидные клетки и треугольной формы энтерохромафитные клетки, расположенные на дне крипт. В основании ворсинок и в криптах имелись клетки в состоянии митоза.
Мышечная оболочка кишечника состояла из двух слоев гладкой мышечной ткани: внутреннего – кольцевого и наружного – продольного, разделенных прослойкой из рыхлой соединительной ткани. Серозная оболочка была представлена тонкой пластинкой из однослойного плоского эпителия – мезотелия.
Эффективность мази гентадиовет при инфицированных кожно-мышечных ранах
Лечение инфицированных ран должно быть направленным не только на активное заживление раны и профилактику вторичных инфекций в ней, но и на максимальное сокращение сроков терапии.
В период 2014-2015 г.г. на фермах УОХ «Кубань» КГАУ в производственных условиях был проведен эксперимент по оценке лечебной эффективности мази гентадиовет при инфицированных кожно-мышечных ранах у крупного рогатого скота. С этой целью подобрались две группы животных – опытная и контрольная по 30 животных в каждой, которые формировались по принципу парных аналогов (с учетом пола, возраста, массы тела, эксплуатационного периода, характера раны и ее инфицирования).
Лечение гнойных ран осуществляли следующим образом: у животных проводили первичную хирургическую обработку раны стерильными ватно-марлевыми тампонами, смоченными 3% раствором перекиси водорода, а после тампоном смоченными физиологическим раствором; далее обильно смазывали раневую поверхность мазью гентадиовет в опытной группе, а в контрольной группе – мазью левомеколь. Обработку в обеих группах проводили раз в сутки. После измерения показателей температуры, дыхания, частоты сердечных сокращений и руминации, далее проводили соответствующее лечение.
В начальный период после получения ран у животных наблюдалась приблизительно одинаковая клиническая картина: общая и местная температура повышены, животные угнетны, вялые и апатичны, аппетит снижен. На первый день лечения в области ран наблюдался хорошо выраженный отек краев, стенок и дна, а также затронуты ткани окружающие рану – они плотные, при пальпации ран присутствует ярко выраженная болезненность, из полости ран обильно выделяется воспалительный инфильтрат. Также была отмечена гиперемия, на краях раны и прилежащих к ним тканей наблюдали наличие сгустков крови и корочек желто-коричневого цвета. В глубине раны присутствовало большое количество гнойно-фибринозного экссудата с ихо-розным запахом, коричневого цвета и вязкой консистенции. В обеих группах животных уровень возвышения отечности по сравнению с нормальной тканью составил около 3-4 см. В данном разделе работы представлены наиболее выраженные с хирургической точки зрения рисунки ран.
Вытекание воспалительного экссудата менее обильное по сравнению с 1-ми сутками лечения. Рана почти вся заполнена грануляциями, просвет раны открыт значительно меньше (за счет разросшейся грануляционной ткани стенок). На дне раны кусочки некротизированной ткани. При удалении чужеродных объектов, гнойных корочек и девитализированных тканей обнажились слабо кровоточащие кожно-мышечные ткани бледно-розового цвета (рис. 22).
На 5-е сутки лечения общие физиологические показатели в пределах нормы, животные чаще вставали (по сравнению с первыми днями лечения), аппетит повышенный, при манипуляциях с ранами наблюдается умеренно агрессивное поведение. Отечность в районе ран спадает, края раны слабо ги-перемированны, практически безболезненные при манипуляциях. Воспалительный инфильтрат практически отсутствует, вокруг ран незначительное количество гнойного экссудата, в самих ранах небольшое количество гнойных масс светло-желтого цвета, грануляция бледно-розового цвета, сочная и обильная. В ранах наблюдается значительное разрастание грануляционной ткани с образованием грануляционного валика. По процессам, происходящим в ране, можно предположить о начале 2-ой фазы (рис.23, 24).
Размеры ран заметно уменьшились. Начинается формирование раневой корочки и процесс эпителизации. Грануляции однородные, мелко-зернистые, плотной консистенции, розового цвета, заполняют всю полость раны. По краю раны ярко выраженный эпителиальный ободок. В углах раны наблюдается наличие рубцовой ткани.
Поверхность раны слабо гиперемированна, безболезненна. Отмечается наличие незначительных корочек гнойно-некротических масс в ранах и вокруг них. Дно раны бледно-розового цвета, покрыто тонкой пленкой мутного серозного экссудата.
На 12-е сутки общее состояние животных соответствует физиологической норме. Отмечалось значительное уменьшение площади ран, отечность и болезненность отсутствовали, раны чистые, свободные от гнойных масс и сухих корочек, отмечалась активная эпителизация – образование раневой корочки (рис 29).
На 31-е сутки с начала лечения поведение животных и их общее состояние физиологически естественное. Шерстный покров полностью покрывает место раны и она визуально незаметна. Рубец слегка заметен, на ощупь практически не ощущается, его длина составляет 2,9 – 3,1 см и толщина 0,9 – 1,1 мм (рис. 33).
В контрольной группе все этапы проявлялись аналогично опытной, но при этом уменьшение площади ран проходило медленнее (уменьшение площади началось на 8-9-ый день лечения, в опытной на 6-7-ой день).
На 3-и сутки в контрольной группе животные угнетены, в основном лежат, аппетит снижен, общее состояние удовлетворительное. Отмечается температура тела в пределах физиологических показателей или субфебриль-ная. Воспалительный отк вокруг ран немного увеличился, края раны плотные, напряженны, болезненны. Обильная экссудация, при надавливании на рану она прозрачно-серая с примесями крови и гноя, неприятным запахом. При удалении выделений и некротизированных тканей обнажилась кожно-мышечная рана. Ее поверхность умеренно кровоточащая, бледно-красного цвета, с множеством мелких узелков нагноения (рис.34, 35).
Края и поверхность раны с сухими корочками синего или фиолетового цвета. В ране большое количество густого гноя серо-белого цвета с небольшой примесью крови и характерным запахом. После удаления корочек и экссудата внутренняя поверхность раны ярко красного цвета, сильно кровоточит. Площадь раны увеличивается в размерах, у некоторых животных остается без изменений
На 7-е сутки общее состояние животных удовлетворительное, аппетит естественный. Ткани вокруг раны более плотные, неподвижные, болезненный, отк без изменений и специфического запаха. Поверхность раны покрыта сухими корочками, в ране небольшое количество гноя желтого цвета с кровью с небольшими кусочками отторгнутых тканей.
9-е сутки лечения после хирургической обработки. Края раны малоподвижные, плотные, утолщенные, практически безболезненные. Поверхность раны покрыта сухими корочками, на дне раны небольшое количество гнойного экссудата желто-белого цвета, густой консистенции, без запаха. Дно раны и ее поверхность ярко-розового цвета, очаги гнойных узелков отсутствуют. Грануляции в полости раны в небольшом количестве, незначительно кровоточащая красного цвета, мелкозернистая. Появление рубцовой ткани на верхней части-поверхности раны. По краю раны наблюдается тонкий эпителиальный ободок.
На 12-е сутки общее состояние животных значительно улучшилось. Истечения из раны поверхностные и слабые. При удалении корочек обнажались стенки ран ярко-розового, края – розового цвета, поверхность блестящая, на дне ран незначительное количество серозного экссудата. Вся поверхность раны покрыта грануляцией белого или розового цвета, бугристые, отмечается гипергрануляция в середине ее. Идет процесс образования рубцовой ткани (рис. 41, 42).