Содержание к диссертации
Введение
1 Обзор литературы 12
1.1 Нарушения состояния иммунной, кроветворной систем и других показателей естественной резистентности птицы и их коррекция
1.2 Специфическая иммунопрофилактика птицы 22
1.3 Адъюванты вакцин и их применение в ветеринарной практике 28
1.4 Перспектива использования белковых гидролизатов в животноводстве и птицеводстве
2 Основное содержание работы 43
2.1 Материалы и методы исследований 43
3 Результаты собственных исследований 50
3.1 Определение токсичности лизатов «Гидамис» и «Гидамир» 51
3.1.1 Острая токсичность 52
3.1.2 Кумулятивные свойства 55
3.1.3 Хроническая токсичность 58
3.1.4 Раздражающее и аллергизирующее действие лизатов 67
3.1.5 Эмбриотоксическое и тератогенное действие
3.2 Разработка дозы «Гидамис» при применении вместе с вакциной против инфекционного бронхита кур
3.3 Влияние лизата «Гидамис» в составе вакцины на формирование иммунитета против инфекционного бронхита у ремонтного молодняка птицы
3.3.1 Зоогигиенические условия содержания и кормления ремонтного молодняка птицы
3.3.2 Влияние «Гидамис» на формирование иммунитета молодняка кур при вакцинации против ИБК
3.3.3 Показатели роста молодняка птицы 80
3.3.4 Морфологические показатели крови 81
3.3.5 Биохимические исследования сыворотки крови 84
3.3.6 Предубойный осмотр, убой цыплят и послеубойная ветеринарно-санитарная оценка мяса и внутренних органов птицы
3.3.7 Биологическая оценка мяса цыплят после вакцинации с применением лизата «Гидамис» в качестве адъюванта
3.3.8 Микроструктура отдельных внутренних органов цыплят после применения «Гидамис» в качестве адъюванта вакцины против инфекционного бронхита
3.3.8.1 Сравнительные гистологические изменения в структуре селезёнки подопытных цыплят, подвергнутых действию «Гидамис» в качестве адъюванта при вакцинации против инфекционного бронхита кур
3.3.8.2 Сравнительные гистологические изменения в структуре печени подопытных цыплят, подвергнутых действию «Гидамис» в качестве адъюванта при вакцинации против инфекционного бронхита кур
3.3.8.3 Сравнительные гистологические изменения в структуре почек подопытных цыплят, подвергнутых действию «Гидамис» в качестве адъюванта при вакцинации против инфекционного бронхита кур
3.3.8.4 Сравнительные гистологические изменения в структуре клоакальной сумки подопытных цыплят, подвергнутых действию «Гидамис» в качестве адъюванта при вакцинации против инфекционного бронхита кур
4 Экономическая эффективность применения лизата «Гидамис» в качестве адъюванта
5 Заключение 111
Предложения производству 119
Список использованной литературы
Список иллюстрированного материала 146
Приложения 149
- Адъюванты вакцин и их применение в ветеринарной практике
- Определение токсичности лизатов «Гидамис» и «Гидамир»
- Биологическая оценка мяса цыплят после вакцинации с применением лизата «Гидамис» в качестве адъюванта
- Сравнительные гистологические изменения в структуре клоакальной сумки подопытных цыплят, подвергнутых действию «Гидамис» в качестве адъюванта при вакцинации против инфекционного бронхита кур
Введение к работе
Актуальность темы. Птицеводческая промышленность - это одна из самых наукоёмких и динамичных отраслей и являясь базовым производителем высококачественного животного белка, который в суточном рационе россиян, путём потребления диетических продуктов (мяса птицы и яиц) составляет 40 %, и тем самым вносит ощутимый вклад в дело обеспечения продовольственной безопасности государства (Фисинин В.И., 2010).
Создание благоприятных условий содержания птицы и обеспечение ее
полноценными и безопасными кормами, соблюдение технологии выращивания и
ветеринарно-санитарных требований, качественное проведение лечебно-
профилактических мероприятий позволяют не только получать высокие показатели продуктивности, в соответствии с генетическим потенциалом используемого кросса птицы, но и обеспечивают ветеринарное благополучие хозяйства (Дмитриева М.Е., 2014).
Вакцинные препараты, в первую очередь, должны быть биологически безвредными. Но ни одна из существующих адъювантных вакцин не является абсолютно безопасной. Суждение о безопасности адъювантов в настоящее время базируется на проведении исследований на токсичность, осуществляемых на лабораторных и других животных (Камалиев А.Р., 2015; Goldenthal K.L. [et al.], 1993).
Таким образом, в настоящее время усовершенствование и подбор
стимулирующих компонентов для повышения антигенной активности
инактивированных вакцин является актуальной задачей, которая требует изучения и изыскания новых, более эффективных биологических препаратов и внедрения их в производственную практику.
Тема работы является составной частью научных исследований, проводимых кафедрой зоогигиены ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ имени Н.Э. Баумана.
Степень разработанности проблемы. Адъюванты для вакцин известны давно, но потребность в их использовании стимулируется уменьшением иммуногенных свойств современных антигенов (Bowerstock T.L., 1999).
В практическом аспекте оценка состояния иммунной системы основывается на количественной характеристике иммунокомпетентных клеток и антител, и является основой контроля эффективности и безопасности вакцин и иммунокоррегирующих препаратов, использующихся в ветеринарии (Донник И.М. 2001; Груздев К.Н. 2005; Асрутдинова Р.А., 2010; Сагитова М.Г. 2015).
В настоящее время основными адъювантами, используемыми в технологии изготовления вакцин, являются эмульсии и соли алюминия. Несмотря на использование правил вакцинации, состоящих из нескольких последовательных инъекций, длительный иммунный ответ, стимулированный вакцинами на основе алюминия, не проявляется.
В центре внимания научного поиска остается проблема подбора
стимулирующих компонентов для повышения антигенной активности
инактивированных вакцин. Поэтому исследования по определению токсичности различных типов адъювантов, проводимых на лабораторных и других животных весьма актуальны.
Цель и задачи исследований. Целью работы явилось изучение фармако-токсикологических свойств лизатов и возможности применения «Гидамис» в птицеводстве.
Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:
-
Изучить токсические свойства лизатов «Гидамис» и «Гидамир»;
-
Выявить оптимальную дозу применения «Гидамис» в составе вакцины против инфекционного бронхита кур;
-
Установить влияние «Гидамис», в качестве адъюванта на клинико-физиологическое состояние, морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови цыплят;
-
Изучить действие «Гидамис» как адъюванта на гистологическую картину внутренних органов ремонтного молодняка птицы при вакцинации против инфекционного бронхита;
-
Провести ветеринарно-санитарную оценку мяса ремонтного молодняка птицы, получаемого после применения лизата в составе вакцины;
-
Рассчитать экономическую эффективность применения «Гидамис» в качестве адъюванта при вакцинации против инфекционного бронхита кур;
Научная новизна работы. Впервые определены острая и хроническая токсичность, эмбриотоксические, тератогенные, аллергизирующие, кумулятивные свойства лизатов «Гидамир» и «Гидамис» и показана их безвредность для лабораторных животных. Изучено влияние «Гидамис» на физиологическое состояние, морфологические, биохимические, иммунологические показатели крови цыплят и впервые установлена возможность применения его в качестве адъюванта при вакцинации против инфекционного бронхита кур. Проведено впервые гистологическое исследование внутренних органов птиц, получавших «Гидамис» вместе с вакциной.
Теоретическая и практическая значимость работы. Проведенные исследования позволяют рекомендовать использование «Гидамис» в качестве адъюванта при иммунизации молодняка птицы против инфекционного бронхита кур.
Теоретические разработки диссертации используются в учебном процессе на кафедрах терапии, хирургии, ветакушерства и фармакологии; эпизоотологии, микробиологии, паразитологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВО «Брянский государственный аграрный университет»; на кафедрах зоогигиены; физиологии, патологической физиологии и фармакологии; микробиологии; эпизоотологии, паразитологии, и радиобиологии ФГБОУ ВО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана».
Методология и методы исследований. Предметом исследования являлись лизаты «Гидамис» и «Гидамир». В качестве биологических объектов для
лабораторных и производственных опытов были использованы белые крысы, кролики и ремонтный молодняк кур-несушек кросса Ломанн Браун.
В соответствии с целью и задачами для изучения токсических свойств
лизатов «Гидамис» и «Гидамир» были проведены исследования с использованием
токсикологических, клинических, морфологических, биохимических,
иммунологических и зоогигиенических методов. При этом производили учёт зоотехнических параметров роста птицы и определяли экономическую эффективность применения лизата «Гидамис».
Основные положения, выносимые на защиту:
-
«Гидамир» и «Гидамис» являются малотоксичными лизатами, не обладают местнораздражающим, аллергизирующим, эмбриотоксическим, тератогенным, кумулятивным свойствами.
-
На основании морфологических, биохимических и иммунологических исследований крови дается обоснование о возможности использования «Гидамис» как адъюванта при вакцинации птицы против инфекционного бронхита.
-
Установлена оптимальная доза «Гидамис» для применения в качестве адъюванта в составе вакцины против инфекционного бронхита.
-
Использование «Гидамис» вместе с вакциной против инфекционного бронхита кур не вызывает морфологических изменений в паренхиматозных органах и фабрициевой сумке.
Степень достоверности и апробация результатов. Научные выводы и практические предложения теоретически и экспериментально обоснованы, что подтверждается фактическими данными. Они логически вытекают из содержания работы, согласуются с поставленными целью и задачами.
Основные результаты диссертации представлены и обсуждены на IV международной научно-практической конференции «Актуальные направления фундаментальных и прикладных исследований» (North Charleston, USA, 2014); международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию образования Иркутской государственной сельскохозяйственной академии и 10-летию первого выпуска ветеринарных врачей «Фундаментальные и прикладные исследования в ветеринарии и биотехнологии (г. Иркутск, 2014); международной научной конференции студентов, аспирантов и учащейся молодёжи, посвящённой 85-летию зоотехнического образования в Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана «Актуальные проблемы и тенденция развития агропромышленного комплекса» (г. Казань, 2015); международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Знания молодых для развития ветеринарной медицины и АПК страны» (г. Санкт-Петербург, 2015); VI международной научно-практической конференции «Актуальные направления фундаментальных и прикладных исследований» (North Charleston, USA, 2015), на расширенном заседании кафедры зоогигиены ФГБОУ ВО Казанская ГАВМ.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 научных работ, в том числе 5 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Адъюванты вакцин и их применение в ветеринарной практике
Развитие вирусной инфекции в организме птиц способно существенно изменить его иммунологическую реактивность, вследствие четко выраженного тропизма некоторых вирусов к лимфоцитам и макрофагам. Феномены иммунологической депрессии при вирусных инфекциях являются по своей природе вторичными иммунодефицитами и могут иметь характер или временный, или необратимый [109]. Главными инфекциями, которые обладают иммуносупрессивными свойствами и увеличивают восприимчивость птицы к вирусным, бактериальным и паразитарным болезням, по мнению Hoerr F.J. (2010), являются инфекционная бурсальная болезнь, инфекционная анемия и болезнь Марека [181, 229].
Переболевание птицы ИБК и, особенно, ассоциированной инфекцией, обусловленной ИБК и колисептицемией, отрицательно влияет на формирование поствакцинального иммунитета к ньюкаслской болезни, которое выражается в снижение титра антигемагглютининов в сыворотке крови и угнетении органов лимфопоэза [159, 173, 181].
При морфологическом исследовании тимуса цыплят больных ИБК, установлено развитие различных стадий акцидентальной инволюции органа. Иммунопрофилактика является основным мероприятием по борьбе с инфекционными болезнями птиц. Своевременное проведение ветеринарно-санитарных мероприятий в первую очередь означает проведение вакцинации против наиболее опасных инфекций птиц, приносящие большой экономический ущерб отрасли. В обязательном порядке на всех промышленных яичных и мясных птицефабриках иммунизируют всю птицу против ньюкаслской болезни, болезни Гамборо, Марека, а также инфекционного бронхита [100, 166, 192, 196]. При разработке любых профилактических мероприятий следует обратить внимание на очередность проведения вакцинаций, интервал между ними, подбор метода, а также сочетаемость биопрепаратов при их одновременном введении [39, 60].
Перечень прививаемых инфекций и схема специфической профилактики строго индивидуальны для каждого птицеводческого предприятия и должны быть основаны на результатах мониторинговых и диагностических исследований, на оценке эпизоотической ситуации, как в хозяйстве, так и в регионе. Имеет значение и направление выращивания птицы, технология содержания, иммунный статус поступающего молодняка и т.д. [182].
При вакцинации имеет место иммунобиологическая перестройка организма птицы, в результате которой происходит формирование иммунитета [61].
С целью создания активного иммунитета у птиц применяют живые и инактивированные вакцины, которые, как правило, приводят к стимуляции не только специфических, но и неспецифических факторов и механизмов иммунитета, обеспечивая противоэпизоотическое благополучие птицехозяйств [24, 70, 155, 166, 184].
Живые вакцины предназначены для специфической профилактики вирусных болезней птиц и могут применяться орально, интраназально, интраокулярно, методом крупнодисперсного распыления (спрей), аэрозольно и подкожно. Инактивированные вакцины вводят методом однократной инъекции подкожно. Живые вакцины имеют преимущества над инактивированными: однократное использование, формирование быстрого иммунного ответа, экономичность, но они могут вызвать побочные эффекты (иммуносупрессию, респираторную патологию). Инактивированные вакцины безопасны, не реактогенны, не сопровождаются вирусоносительством и вирусовыделением, поэтому не происходит трансовариального распространения “диких” вирусов и микоплазм, как это возможно в случае применения живых эмбриональных вирус-вакцин. Эти вакцины легко дозировать и комбинировать с другими биопрепаратами. Однако большинство инфекций вызывают два и более возбудителей, поэтому в последние годы широко применяются ассоциированные вакцины, предназначенные для профилактики нескольких заболеваний [45, 126, 166, 233]. Эффективным считается применение двух-, трехвалентных вакцин двумя – тремя инъекциями [38, 166].
При выборе вакцин специалисты птицефабрик отдают предпочтение живым вирусвакцинам, которые отличаются относительно низкой стоимостью и способностью создавать прочный и длительный иммунитет, по напряженности приближающийся к постинфекционному иммунитету [181, 198].
Однако живые вакцины обладают высокой реактогенностью, вследствие тропизма некоторых вирусов, входящих в их состав, к мембранным структурам лимфоцитов. Частота проявления реактогенности вакцины зависит от условий, в которых находится птица и наличие на птицефабрике сопутствующих инфекций и инвазий [65].
Замена живых вакцин на инактивированные, по мнению ряда авторов, позволит разработать более эффективные схемы специфической профилактики и снизить неблагоприятные воздействия бактериальной флоры и вирусного давления на окружающую среду [58, 181, 203, 220].
Несмотря на то, что на сегодняшний день на ветеринарном рынке существуют различные виды вакцин против тех или иных болезней птиц, поиск стимулирующих компонентов для повышения их антигенной активности остается актуальным, так как регистрируются случаи проявления измененных форм существующих или новых штаммов вирусов [52, 101].
В промышленном птицеводстве иммунопрофилактика является одним из основных методов борьбы с инфекционными болезнями птиц [166].
Основные достижения в разработке вакцин для птиц пришлись на 50-90-е годы прошлого столетия, когда были получены специфические биопрепараты против большинства известных возбудителей болезней [50]. Необходимо отметить, что на сегодняшний день эффективность ряда уже известных вакцин становится недостаточной из-за появления новых эпизоотических штаммов возбудителей болезней, быстрого «старения» при неудовлетворительном подборе защитных сред для лиофилизации или инактивации антигена, что приводит к сокращению сроков их хранения, возможна повышенная реактогенность у птицы, ввиду недостаточной очистки от балластных веществ.
Ведущие биопредприятия и фирмы по производству вакцин постоянно их совершенствуют, повышая, прежде всего качество по основным показателям: иммуногенности и безопасности для птицы. Иммунитет, создаваемый отдельными вакцинами, может быть недостаточно напряженным и длительным, как и нет абсолютно безопасных вакцин. Поэтому дальнейший прогресс в вакцинологии основывается на научных достижениях [54, 55, 155, 166]. Наиболее известная и важная для производства вакцин возможность неспецифической стимуляции иммунного ответа основана на способности различных веществ, называемых адъювантами, усиливать образование специфических антител и повышать степень сенсибилизации организма, зависящей от Т-клеток, к антигену. Использование адъювантов является перспективным направлением для создания напряженного противовирусного иммунитета, стимуляции неспецифической резистентности организма, а также сохранности и продуктивности птицы [77, 117, 166].
Определение токсичности лизатов «Гидамис» и «Гидамир»
Особое внимание уделяли поению цыплят в день посадки, так как их необходимо как можно скорее напоить, чтобы они смогли восстановить потерянный объём жидкости в организме. Первоочередное предоставление воды, а через 1 – 2 часа кормов способствует более полному выведению из организма накопившейся в ходе эмбрионального развития мочевой кислоты. Корм и воду готовят заранее, для того чтобы он принял температуру окружающей среды.
Посадку в клетки суточных цыплят производили при температуре помещения +34,0 - +35,0 С. При этом локальная температура в самих клетках достигала +35,0 - +36,5 С. По мере роста цыплят, развития у них механизма терморегуляции, перьевого покрытия температуру в птичнике снижали и к 16-й неделе роста молодняка она находилась в пределах +20 С - +22 С, а к 30 дню она составляла +21 С. Относительная влажность воздуха в помещении, вне зависимости от возраста птицы, составляла 65 – 75 %. Скорость движения воздуха колебалась от 0,3±0,06 до 0,8±0,06 м/с. Показатели микроклимата представлены в таблице 15.
По органолептическим и физико-химическим показателям качество воды соответствовало гигиеническим требованиям; она не имела запаха; цветность воды - менее 10 градусов и прозрачность – более 30 см. pH воды составила 6, общая жесткость - 4,4 мг.экв/ л.
Таким образом установили, что микроклимат в помещении для содержания цыплят соответствует технологическому режиму выращивания птицы данного кросса. 3.3.2 Влияние «Гидамис» на формирование иммунитета молодняка кур при вакцинации против ИБК
Для подтверждения результатов лабораторных исследований в птичнике подобрали 60 голов цыплят кросса Ломанн Браун, из которых было сформировано 3 группы по 20 голов в каждой. В соответствии с принятой схемой иммунизации, цыплята были вакцинированы образцом инактивированной вакцины против инфекционного бронхита кур из штамма «РВ-07» в возрасте 46 дней подкожно.
Цыплятам 1 группы вводили вакцину, содержащую только антиген вируса инфекционного бронхита кур (1 группа - контроль), цыплятам 2 опытной группы вводили вакцину содержащую антиген вируса инфекционного бронхита кур и лизат «Гидамис» в конечной концентрации 1,0 % в качестве адъюванта. 3 группа оставалась интактной. Схема опыта по определению эффективности лизата «Гидамис» в составе вакцины против инфекционного бронхита кур представлена в таблице 17.
Установлено, что применение «Гидамис» вместе с вакциной в качестве адъюванта уже к 14 дню после иммунизации способствует увеличению титров антител к вирусу инфекционного бронхита кур на 192,0 (7,2%) по сравнению с контрольной группой.
Максимальный титр антител к вирусу инфекционного бронхита кур в опытной группе регистрировали на 56 день после вакцинации. Следует отметить, что титр антител в первой опытной группе цыплят, привитых образцом вакцины, содержащим в своём составе 1 % «Гидамис» на 28 и 56 сутки после иммунизации был выше по сравнению с контролем на 2059,8(65,5%) и 3507,6(89,2 %).
Из вышеизложенного следует, что применение «Гидамис» в качестве адъюванта при вакцинации птицы против инфекционного бронхита благоприятно влияет на поствакцинальный иммуногенез.
Установили, что лизат «Гидамис», введенный в составе вакцины вызывает более выраженную стимуляцию иммунных механизмов организма у молодняка птицы, что обуславливает у них достаточно устойчивый и относительно однородный синтез антител. 3.3.3 Показатели роста молодняка птицы Наблюдая за поведением, потреблением корма и воды визуально изучали и клиническое состояние птицы, проводили их индивидуальные взвешивания. Клиническим наблюдением и термометрией вакцинированной птицы в течение 56 дней установили: пульс находился в пределах 150-220 сердечных сокращений, частота дыхания - 55-60 дыхательных движений в минуту, температура тела у подопытных цыплят колебалась в пределах 40,9 - 42,0 С, что соответствует физиологической норме. Признаков воспаления или не рассосавшегося адъюванта на месте введения вакцины не обнаружили. Признаков заболевания, снижения аппетита, слабости, угнетения не наблюдали. Случаев заболевания и падежа не отмечали.
Сохранность молодняка составляла 99,7 %. Средняя живая масса одной птицы в опытной группе с 37,1±0,07 г при постановке опыта увеличилась до 1401,4±8,64 г к концу исследований. Показатели среднесуточного прироста изменялись в течение опыта и составляли от 5,5±0,09 до 21,4±1,38 г.
Исходя из анализа клинико-физиологического состояния организма иммунизированных цыплят, можно сделать вывод о том, что применение «Гидамис» в образце вакцины против инфекционного бронхита не оказывает влияния на температуру тела, частоту сердечных сокращений и дыхания.
За период наблюдения живая масса цыплят во всех группах колебалась в пределах установленных нормативов для данного кросса. Установлено, закономерное повышение продуктивности ремонтного молодняка птицы (таблица 18). Таблица 18 - Живая масса молодняка кур-несушек к концу опыта, п=20 (М±т) Показатель I опытная (1 % Гидамис) II опытная (контрольная) III опытная (интактная) Живая масса цыплят на начало опыта, гр 37,11±0,07 37,11±0,07 37,11±0,07 Живая масса цыплят к концу опыта, гр 1401,2±8,64 1399,3±8,55 1373,2±11,91 Среднесуточный прирост, гр 12,18±0,08 12,16±0,08 11,93±0,11 Наблюдения за птицей до конца опытного периода показывают, что наибольшей скоростью роста обладали цыплята опытной группы, в которой в составе вакцины против ИБК применяли в качестве адъюванта исследуемый лизат «Гидамис». Так, цыплята этой опытной группы на конец исследований имели живую массу 1401,4±8,64 г, что выше контрольных показателей на 0,15 %. В группе, в которой цыплята оставались интактными, живая масса на конец исследований была ниже относительно показателей контрольной и первой опытной группы и составила 1373,2 г. Таким образом, «Гидамис», введённый в качестве адъюванта в состав вакцины против ИБК проявляет ростостимулирующую тенденцию.
Биологическая оценка мяса цыплят после вакцинации с применением лизата «Гидамис» в качестве адъюванта
В почках подопытных птиц на протяжении четырнадцати суток после вакцинации против инфекционного бронхита с применением в качестве адъюванта «Гидамис» отмечали умеренно выраженную зернистую дистрофию эпителия, преимущественно отдельных дистальных канальцев, локальные умеренные проявления отека полости капсул почечных телец. В результате уровень кровоснабжения паренхимы органа не нарушался. Сохранялась пропускная способность канальцевой сети органа.
В почках птиц после вакцинации без «Гидамис» в качестве адъюванта на протяжении четырнадцати суток в большинстве почечных телец отмечали признаки выраженного отека полости капсулы, значительные нарушения проходимости канальцевой сети, вызванные набуханием и частичным слущиванием эпителия, преимущественно проксимальной области, а также наличием эпителия и белковой массой в просвете канальцев. Большинство капилляров в сосудистых клубочках и вблизи канальцев не имели выраженного просвета. Гистологическая картина почки цыплёнка интактной группы на 14-е сутки с начала опыта. Окраска гематокслином и эозином. Ув.400.
В почках интактных птиц на протяжении четырнадцати суток опыта отмечали признаки умеренно выраженной зернистой дистрофии эпителия канальцев, приводящие в конечном итоге к локальным нарушениям клубочковой фильтрации и проходимости канальцевой сети органа.
Сравнительные гистологические изменения в структуре клоакальной сумки подопытных цыплят подвергнутых действию «Гидамис» в качестве адъюванта при вакцинации против инфекционного бронхита кур Действие вакцины против инфекционного бронхита кур совместно с «Гидамис» в качестве адъюванта на протяжении четырнадцати суток способствовало в клоакальной сумке сохранению гистологического строения многорядного призматического эпителия. В подслизистой оболочке органа на седьмые, четырнадцатые сутки, поствакцинальные изменения проявлялись минимальными изменениями в виде малочисленных лимфоидных клеток и полным отсутствием в стенках кровеносных сосудов проявлений дезорганизации компонентов соединительной ткани. Многочисленные лимфатические узелки на протяжении всех сроков наблюдения сохраняли выраженный рисунок строения коркового и мозгового веществ. В широкой зоне коры отмечали насыщенность большими лимфоцитами и отсутствие признаков некробиоза. Выраженность ретикулярной основы в мозговом веществе узелков было связано с набуханием отростков ретикулоцитов и разрежением клеток лимфоидной ткани. Следовательно, в результате применения «Гидамис» в качестве адъюванта при вакцинации против инфекционного бронхита кур отмечали замедление 105 инволюции, резкое ослабление местных реактогенных процессов в паренхиме и эпителии клоакальной сумки.
После вакцинации инактивированной вакциной АВИКРОН-1 без применения адъюванта клоакальная сумка птиц на протяжении 14-и суток поствакцинального периода характеризовалась наличием участков разрушения многорядного призматического эпителия. В сохранившихся участках эпителий утрачивал полярную структуру клеток и приобретал пикноморфный вид. Подслизистая оболочка выделялась резким отеком мукоидным набуханием стенок и инфильтрацией ее лимфоидными клетками и лимфоцитами с признаками некробиоза. В лимфатических узелках отмечали нарушения структуры коры и медулы. Они проявлялись разрежением истончением корковой зоны, некробиозом лимфоцитов особенно расположенных вблизи пораженных участков эпителия. Локально утрачивалась границы между веществами лимфатических узелков. Вследствие разрежения клеток и отека медулярной области ее ретикулярная основа выявлялась более выраженно. Следовательно, в клоакальной сумке после вакцинации нарастали признаки инволюции лимфоидной ткани. Как следствие реактогенного действия вакцины возникали локальные разрушения эпителия, усиливались атрофические, некробиотические процессы в лимфоидной ткани.
У птиц интактной группы в клоакальной сумке на протяжении 14-и суток отмечали нарастание признаков инволюции. В лимфатических узелках происходило значительное разрежение клеток лимфоидной ткани, сопровождаемое некробиозом. В результате корковое вещество значительно истончались в первую очередь вблизи участков прилегающих к призматическому многорядному эпителию. В результате значительно утрачивались границы между корковым и мозговым веществами. В подслизистой оболочке отмечали умеренные признаки отека. Истонченная слизистая оболочка местами была отторгнута и в просвете складок сумки обнаруживали пикноморфные эпителиоциты, лимфоциты. Следовательно, у птиц интактной группы инволюционные процессы в клоакальной сумке достигали максимальной выраженности.
Сравнительные гистологические изменения в структуре клоакальной сумки подопытных цыплят, подвергнутых действию «Гидамис» в качестве адъюванта при вакцинации против инфекционного бронхита кур
На 7 день исследований после вакцинации цыплят отмечено уменьшение содержания гемоглобина в крови цыплят контрольной группы до уровня 121,65 г/л, а в опытной группе повышение до 148,35 г/л. Эта тенденция сохранилась и на 14 день опыта. К концу исследований уровень гемоглобина в крови птиц контрольной группыповысился и на 28 день достиг уровня опытной группы. Изменение уровня количества эритроцитов соответствовала динамике изменения гемоглобина.
Также можно отметить достоверную разницу количества лимфоцитов (p 0,001) между опытной и контрольной группами на 7 день опыта а на 14 день уровня палочкоядерных нейтрофилов(p 0,001), что говорит о более выраженной защитной реакции в организме после применения «Гидамис» в качестве адъюванта в составе вакцины против ИБК.
Содержание в сыворотке крови цыплят белка и его фракций после вакцинации повысилось. При этом количество общего белка в сыворотке крови цыплят первой опытной группы относительно контрольной группы на 7 день после иммунизации было выше на 29,3 % (p 0,001). Уровень альбуминовой фракции белка сыворотки крови цыплят в опытной группе на 7 день исследований также был выше по сравнению с контролем на 13,2 % (p 0,001).
Содержание глобулинов в сыворотке крови у цыплят первой опытной группы на 7, 14 и 21 день исследования было достоверно выше относительно контроля Это свидетельствует об иммунологической перестройке в организме цыплят в сторону усиления, так как глобулины (бета- и в основном гамма-подфракции) участвуют в синтезе специфических антител.
Воспалительных и аллергических реакций за период исследований мы не обнаружили, а сохранность подопытных цыплят к концу опытов составила 100 %.
Достоверной разницы уровня глюкозы в сыворотке крови контрольной и опытной групп цыплят не выявили. В ходе опыта имела место тенденция к некоторому снижению уровня кальция в сыворотке крови цыплят опытной группы относительно контроля но существенной достоверной разницы небыло. Уровень фосфора в сыворотке крови цыплят опытной группы был достоверно выше в начале опыта относительно контроля(p 0,001) но в дальнейшем этот показатель постепенно снижался во всех группах и к концу опыта достоверной разницы между животными опытной и контрольной группы не имелось. После иммунизации во всех опытных группах наблюдали постепенное снижение активности ферментов аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и щелочной фосфатазы. Различие было лишь в том, что активность АсАТ снизилась после незначительного повышения в начале опыта, а активность щелочной фосфатаза на 28 сутки несколько возросла. Все эти изменения могут свидетельствовать о безвредности применяемого лизата в качестве адъюванта вакцины и её положительном влиянии на печень.
При изучении показателей естественной резистентности после применнения «Гидамис» отмечено повышение бактерицидной активности сыворотки крови по сравнению с контролем.
Установлено, что применение «Гидамис» вместе с вакциной в качестве адъюванта уже к 14 дню после иммунизации способствует увеличению титров антител к вирусу инфекционного бронхита кур на 7,2% по сравнению с контрольной группой. Максимальный титр антител к вирусу инфекционного бронхита кур в опытной группе регистрировали на 56 день после вакцинации. Следует отметить, что титр антител в первой опытной группе цыплят, привитых образцом вакцины, содержащим в своём составе 1 % «Гидамис» на 28 и 56 сутки после иммунизации был выше по сравнению с контролем на 2059,8 и 3507,6.
При ветеринарно-санитарной оценке определили, что применение лизата «Гидамис» вместе с вакциной не проявляет отрицательного влияния на питательную ценность мяса цыплят. Результаты проведённых исследований свидетельствуют о том, что органолептические, физико-химические и бактериоскопические показатели мяса соответствуют стандартам, предусмотренным для доброкачественного мяса здоровой птицы, и оно может быть использовано для пищевых целей без каких-либо ограничений. Как показали результаты паталогоанатомических вскрытий у всей вакцинированной птицы макроскопических изменений в органах не выявлено.
При гистологическом исследовании селезёнки, печени, почек и клоакальной сумки определили, что применение «Гидамис» в качестве адъюванта при иммунизации инактивированной вакциной АВИКРОН-1 по сравнению с результатом действия вакцины без адъюванта способствует замедлению процесса инволюции лимфоидной ткани в лимфатических узелках клоакальной сумки. Их совместное применение в значительной степени снижало уровень проявления реактогенного действия на структуры эпителиальной и соединительной тканей исследуемых органов. В результате проведенных исследований установлена достаточно высокая эффективность использования «Гидамис» в качестве адъюванта для повышения иммуногенности вакцины при иммунизацинации против инфекционного бронхита кур. Таким образом, применение лизата «Гидамис» в качестве адъюванта при вакцинации представляется перспективным в современных условиях ведения птицеводства и позволит повысить эффективность профилактических мероприятий, снизить ущерб от заболеваемости сельскохозяйственной птицы, обеспечить стойкое ветеринарное благополучие.