Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 11
1.1 Микроорганизмы, используемые для создания препаратов широкого спектра действия на организм животных 11
1.2 Разновидности пробиотических препаратов и их применение 16
1.3 Механизм действия пробиотиков 26
1.4 Пробиотики как эффективное средство для профилактики и терапии желудочно-кишечных и респираторных болезней животных 28
1.5 Влияние пробиотиков на иммунный статус животных 36
2. Собственные исследования 39
2.1 Материалы и методы исследований .39
2.2 Результаты собственных исследований 48
2.2.1 Физико-химическая и токсикологическая оценка препарата бактоцеллолактин .48
2.2.2 Влияние бактоцеллолактина на клинико-физиологический статус белых мышей 52
2.2.3 Определение оптимальной дозы бактоцеллолактина для телят 1-месячного возраста 57
2.2.4 Иммунно-морфо-биохимические показатели крови и профилактическая эффективность в отношении респираторных и желудочно кишечных болезней после применения бактоцеллолактина телятам в дозе 10 мл 65
2.2.5 Определение оптимальной дозы бактоцеллолактина для поросят отъёмышей, его влияние на иммунно-морфо-биохимический статус и профилактическая эффективность .70
2.3 Бактоцеллолактин и рекомендуемая схема его применения телятам и поросятам-отъёмышам 76
2.4 Апробация схемы применения бактоцеллолактина для профилактики респираторных и желудочно-кишечных болезней телят и поросят-отъёмышей
3. Заключение 82
4. Выводы 92
5. Практические предложения .94
6. Список литературы
- Разновидности пробиотических препаратов и их применение
- Пробиотики как эффективное средство для профилактики и терапии желудочно-кишечных и респираторных болезней животных
- Физико-химическая и токсикологическая оценка препарата бактоцеллолактин
- Определение оптимальной дозы бактоцеллолактина для поросят отъёмышей, его влияние на иммунно-морфо-биохимический статус и профилактическая эффективность
Введение к работе
Актуальность темы. В настоящее время ветеринарной наукой и практикой накоплен определённый опыт в профилактике и лечении иммунодефицитных состояний с использованием биологически активных веществ и средств иммунокоррекции (Антипов В. А., 1991; Данилевская Н. В., 2005; Панин А. Н. с соавт., 2012; Некрасов А. А., Попов Н. А. с соавт., 2014 и др.). Имеются рекомендации о применении широкого спектра препаратов, которые позволяют повысить адаптационные способности животных к условиям окружающей среды и влиянию болезнетворных агентов, корректировать метаболические процессы, снижать влияние стрессовых факторов. К таким препаратам относятся тканевые препараты, индукторы эндогенного интерферона, фитоэкдистероиды, пробиотики и другие вещества (Воронин Е. С., Петров Р. В., 1994; Грязнева Т. Н. с соавт., 1991; Ивановский А. А., 2001; Дармов И. В., 2012; Жданова И. Н., 2012).
В перечне болезней молодняка крупного рогатого скота и свиней значительное место занимают желудочно-кишечные и респираторные патологии, одной из главных причин которых является снижение у животных естественной резистентности. В настоящее время внимание учёных и практиков приковано к препаратам на основе живых апатогенных микроорганизмов, известных под названием пробиотики. Очевидна актуальность применения пробиотиков как альтернативы антибиотикам, позволяющая снизить заболеваемость молодняка желудочно-кишечными болезнями и уменьшить риск контаминации животноводческой продукции возбудителями пищевых токсикоинфекций. В связи с этим поиск эффективных бактерий-пробионтов и создание на их основе препаратов – актуальная задача ветеринарной науки (Каширская Н. Ю., 2000; Зернов К. О. с соавт., 2012; Кузовкова Н. Ю. с соавт.,2013; Коцюмбас Г. И., Лемишев-ский В. М., 2014).
Степень разработанности проблемы. В работах ряда учёных (Тараканов Б. В., Николичева Т. А., 2000; Гаффаров Х. З. с соавт., 2002;
4 Кошелева Г., 2003; Ивановский А. А., 2004; Хусаинов В. Р., 2005; Санин А. В. с соавт., 2012; Данилевская Н. В. с соавт., 2013) имеются данные о положительном опыте использования пробиотиков с целью повышения естественной резистентности животных. Однако, несмотря на достигнутые успехи, проблема, связанная с изучением механизма действия препаратов на основе пробиотических микроорганизмов на различные системы организма животных разных видов, возраста и пола, по-прежнему требует пристального внимания учёных.
Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось изучение влияния пробиотика бактоцеллолактин (БЦЛ) на состояние естественной резистентности организма телят, поросят, лабораторных животных, его фармако-клиническая оценка и разработка эффективной схемы применения телятам и поросятам.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:
– наработать препарат БЦЛ, определить его максимально переносимую дозу для белых мышей;
– изучить действие БЦЛ на клинико-гематологический и иммунно-биохимический статус белых мышей, телят и поросят;
– экспериментально обосновать оптимальную дозу БЦЛ для повышения профилактической эффективности при респираторных и желудочно-кишечных болезнях телят и поросят-отъёмышей;
– разработать схему применения БЦЛ для повышения естественной резистентности телят и поросят-отъёмышей, апробировать её в производственных условиях.
Предмет и объект исследования. Предмет исследования – препарат БЦЛ и его действие на клинико-гематологический статус и показатели естественной резистентности белых мышей, телят и поросят. Объект исследования – беспородные белые мыши в возрасте 2-х месяцев, телята в 1-месячном возрасте и поросята-отъёмыши в возрасте 2-х месяцев.
Научная новизна работы. Изучено влияние БЦЛ на иммунно-биохимический и клинико-гематологический статус телят 1-месячного возраста, поросят-отъёмышей и белых мышей. Экспериментально установлена оптимальная доза БЦЛ для телят в возрасте одного месяца и поросят-отъёмышей в возрасте двух месяцев. Определена профилактическая эффективность препарата в отношении желудочно-кишечных и респираторных болезней телят 1-месячного возраста и поросят-отъёмышей. В результате проведённой работы научно обоснована и экспериментально подтверждена целесообразность коррекции естественной резистентности организма телят и поросят с помощью препарата БЦЛ на основе схемы его применения.
Теоретическая и практическая значимость работы. Изучено влияние БЦЛ на состояние естественной резистентности, биохимию и морфологию крови телят и поросят, что вносит вклад в понимание фармакодинамики как самого препарата, так и пробиотиков в целом. Результаты проведённых исследований могут быть использованы при написании соответствующих разделов учебных пособий по ветеринарной фармакологии и терапии.
Разработана схема применения препарата БЦЛ, позволяющая повысить сохранность молодняка крупного рогатого скота и свиней на 10–15%. На основании результатов экспериментов изданы методические рекомендации: «Способ применения бактоцеллолактина (БЦЛ) телятам» (Киров, 2009); «Применение бактоцеллолактина для профилактики иммунодефицитов у телят и поросят» (Киров, 2011).
Методология и методы исследования. Основой методологического подхода в достижении поставленной цели и задач являлось системное изучение предмета и объектов исследования, анализ и обобщение полученных результатов. Методология исследований настоящей работы включала экспериментальное моделирование с использованием лабораторных и сельскохозяйственных животных, клинические, гематологические, биохимические, иммунологические, микробиологические методы, а также биометрический анализ полученных результатов.
Степень достоверности и апробация результатов исследований. Достоверность результатов подтверждается математической обработкой с использованием критерия Стьюдента. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции (ФГБОУ ВПО Вятская ГСХА г. Киров, 2007 г.), VIII-й научной конференции аспирантов и соискателей (ФГБОУ ВПО Вятская ГСХА г. Киров, 2008), Международной конференции, посвящённой 100-летию со дня рождения П. Г. Петского (ФГБОУ ВПО Вятская ГСХА, г. Киров, 2009 г.), на Учёных советах ФГБНУ НИИСХ Северо-Востока (г. Киров, 2008, 2009, 2010 гг). Материалы научных исследований используются в учебном процессе при чтении лекционного материала, проведении лабораторно-практических занятий и выполнении научных исследований со студентами на кафедре диагностики, терапии, морфологии и фармакологии факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВО Вятская ГСХА, г. Киров.
Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, 4 из них в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.
Основные положения, выносимые на защиту:
фармако-клиническое обоснование влияния БЦЛ на морфо-биохимический статус и показатели естественной резистентности телят 1-месячного возраста, поросят-отъёмышей и белых мышей;
оптимальные дозы БЦЛ для телят и поросят-отъёмышей и схема применения препарата;
профилактическая эффективность БЦЛ при респираторных и желудочно-кишечных патологиях телят и поросят-отъёмышей;
апробация схемы применения БЦЛ телятам и поросятам-отъёмышам в производственных условиях.
Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 124 страницах текста и содержит следующие разделы: Введение, Обзор литературы, Собственные исследования, Обсуждение полученных результатов, Выводы, Практические предложения, Приложения. Список литературы
7 включает 165 источников, в том числе 42 – на иностранных языках. Диссертация иллюстрирована 5 рисунками и 21 таблицей.
Личный вклад автора. Автором лично сформулирована проблема, определены цель и задачи исследований. Проведены экспериментальные исследования и проанализированы их результаты. Вклад в работу других авторов отражен в публикациях по теме диссертации.
Разновидности пробиотических препаратов и их применение
По данным Малик Н. И., Панина А. Н. (2006), основным биотопом условно-патогенных бактерий родов Escherichia, Proteus, Citrobacter, Klebsiella, Peptococcus, Bacillus, Clostridium, Bacteroides, Yersinia, Ervinia, Salmonella, Streptococcus, Staphylococcus, Pseudomonas является кишечник теплокровных животных. Высокая экологическая пластичность условно-патогенных бактерий позволяет им длительно сохраняться в различных объектах внешней среды.
На фоне высокой обсемененности кормов и различных объектов внешней среды условно-патогенными микроорганизмами происходит опережающее заселение кишечника новорожденных животных энтеробактериями и замедление процессов колонизации кишечной стенки, нормальной микрофлорой – бифидобактериями, энтерококками, молочнокислыми и пропионовокислыми бактериями. Неслучайно болезни молодняка, сопровождающиеся диарейным синдромом, остаются наиболее сложной проблемой ветеринарной медицины. Практика показывает, что существующий в настоящее время комплекс технологических, зоогигиенических, ветеринарно-санитарных приёмов при выращивании молодняка животных не позволяет поддерживать в полной мере высокий уровень резистентности к бактерийным инфекциям, вызванных условно-патогенной микрофлорой. Применение антибиотиков для профилактики и лечения при желудочно-кишечных болезнях небезопасно и становится все менее эффективным (Abdel-Samee A. M., 1995; Спасская Т. А., 1998; Perdigon G. et. al., 2001).
Особую тревогу в современных условиях ведения животноводства и птицеводства вызывает тенденция к увеличению массовой заболеваемости и падежа новорожденных телят и поросят, а также цыплят второго периода откорма от желудочно-кишечных инфекций.Доказано, что интенсивная технология выращивания животных искажает процессы формирования кишечного микробиотопа у новорожденных. У животных промышленного
стада – поросят, телят и цыплят – существенно снижен общий индекс кишечной микрофлоры. Состав кишечного микробиотопа молодняка характеризуется присутствием анаэробных спорообразующих бактерий, стафилококков, протея, плесневых и дрожжеподобных грибов. Количество эшерихий со сниженной ферментативной активностью может достигать 30– 40%. Значительно снижен уровень молочнокислой флоры. Количество бифидобактерий минимально (Tannock G. W., 1988; Сидоров М. А., 2000; Белорыбкина О. В., 2006; Бобровская О. И., 2012).
Защитный потенциал кишечной популяции лактобацилл и бифидобактерий у молодняка продуктивных животных существенно снижен. Большую часть популяции лактобацилл и бифидобактерий представляют клоны со слабыми антагонистическими свойствами и с низкими колонизационными характеристиками. Под действием ряда технологических и экзогенных (антибиотики, вакцинация) факторов нарушается микроэкологическое равновесие кишечного биотопа, что приводит не только к доминированию потенциально патогенных микробов. Ускоряются темпы изменчивости условно-патогенных микроорганизмов, усиливаются генетический обмен и скорость формирования клонов, несущих плазмиды лекарственной устойчивости и нередко включающих гены, детерминирующие адгезивные, цитотоксические и энтеротоксические свойства условно-патогенных бактерий.
Нарушение эволюционно сложившегося равновесия в кишечном микробиотопе приводит к развитию дисбактериоза и, как следствие, дисбактериозной диареи. На фоне дефицита нормальной кишечной микрофлоры и ее низких защитных характеристик под прессингом энтеробактерий происходит прорыв барьеров слизистой кишечника и проникновение их в кровь, паренхиматозные органы. Накоплены многочисленные факты о проницаемости слизистой кишечника для микроорганизмов, постоянной миграции бактерий в кровь в составе макрофагов, о транслокации под действием большого числа факторов, в результате чего у животного с ослабленной иммунной системой развивается генерализованная инфекция. Переболевшие животные отстают в росте и развитии, и длительное время могут быть скрытыми носителями условно-патогенных бактерий (Воронин Е. С. с соавт., 1991)
Дисбактериоз кишечника замыкает патогенетический порочный круг, разорвать который необходимо как для успешной профилактики основного заболевания, так и для ликвидации его последствий. Научные исследования подтверждают, что отдельные компоненты рациона являются особо полезными для здоровья животных. Использование кормов, обогащённых биологически активными кормовыми добавками, натуральными продуктами с лекарственными свойствами, минеральными соединениями и витаминами, позволяет предотвратить развитие многих патологий у животных.
Для нормализации работы пищеварительной системы животных применяют несколько групп веществ: кормовые антибиотики, кормовые ферменты, пробиотики, а также пребиотики. Данные группы имеют разную биологическую природу и, соответственно, разные первичные механизмы действия. Однако общим для них является регуляция микробной популяции в желудочно-кишечном тракте (Stekar J. et. al, 1977; Wilson K. H., Perini F., 1988; Collins M. D., Gibson G. R., 1999; Панин А. Н. с соавт., 2012).
Кормовые антибиотики представляют собой продукты микробиологического или химического синтеза, которые прямо подавляют размножение других микроорганизмов. Под их воздействием количество микроорганизмов в кишечнике резко сокращается. При этом снижается риск развития заболеваний, вызываемых условно-патогенной флорой, а часть питательных веществ, ранее потреблявшихся кишечными микробами, достаётся организму-хозяину. Оба процесса приводят к увеличению сохранности и продуктивности.
Пробиотики как эффективное средство для профилактики и терапии желудочно-кишечных и респираторных болезней животных
В результате установлено, что Lactobacillus plantarum (шт. Киров-1) – полиморфная, грамположительная палочка, встречаются как длинные, так и короткие (наподобие кокков) формы. Располагается отдельными микробами, скоплениями, парами или в цепочку. Спор и капсул не образует. Неподвижна, величина – 9,5х1,2 микрона. На плотной питательной среде МПА образует колонии 1–2 мм диаметром, куполообразные, гладкие, непрозрачные, бежевые.
шероховатой матовой поверхностью, приподнятые над поверхностью агара, с Bacillus Subtilis (шт. 91) – представляет собой грамположительные, прямые палочки с закруглёнными концами, расположенными беспорядочными скоплениями, в центре может наблюдаться спорообразование. На плотной питательной среде МПА образует колонии 1– 2 мм диаметром с волнистыми краями, вязкой консистенции, гомогенные в проходящем свете.
Ruminococcus albus (шт. 85) – относится к микроорганизмам-целлюлозолитикам, частым обитателям рубца жвачных животных (Лаптев Г.Ю., 1995). Представляет собой грамположительные, овоидные, слегка удлинённые клетки со сферическими концами, расположенными одиночно или короткими цепочками. Формирует на плотной питательной среде МПА колонии размером до 0,5 мм в диаметре, выпуклые, с ровными краями, гомогенные, прозрачные, слизистые.
Концентрация микроорганизмов в препарате соответствовала 2,5108 КОЕ/мл. При изучении сроков хранения БЦЛ получены следующие результаты. Происходило изменение концентрации микроорганизмов, в зависимости от длительности хранения препарата, поскольку составляющие его основу микроорганизмы обладают разными свойствами, в частности, скоростью роста. После хранения более 3-х месяцев была отмечена тенденция к снижению концентрации живых бактерий всех трёх целевых штаммов.
В результате к окончанию эксперимента суммарная концентрация живых микроорганизмов в препарате снижалась в 8,3 раза и составляла 0,3108 КОЕ/мл.
Таким образом, установлено, что оптимальная концентрация микроорганизмов в препарате наблюдается в течение первых 3-х месяцев, при хранении в тёмном месте при температуре 100С.
Исследование БЦЛ на безвредность подтвердило безопасность препарата (все мыши остались живыми). На протяжении всего периода наблюдений охотно потребляли корм, активно вели себя, не проявляя каких-либо патологических симптомов.
При определении МПД препарата установлено, что начиная с дозы 7108 КОЕ/мл у мышей наблюдалось угнетённое состояние, сопровождаемое тремором и диарейным синдромом. Гибель мышей при этом составляла 20% и наступала на 2-е сутки. Концентрации 8108 КОЕ/мл оказалась смертельной для 40%, а 10108 КОЕ/мл – для 60% белых мышей. Максимальная летальность отмечалась при дозе 11108 КОЕ/мл и составляла 70%. Концентрации микробных клеток от 1 до 5108 КОЕ/мл не вызывали негативных реакций у подопытных животных. Доза 6108 КОЕ/мл оказывала угнетающее влияние на мышей, проявляющееся в снижении аппетита, усиленном потреблении воды и снижении двигательной активности. В контрольной группе все мыши оставались живыми. Таким образом, МПД штаммов бактерий составляющих препарат бактоцеллолактин при парентеральном введении находится на уровне 6108 КОЕ/мл.
Лабораторные мыши достаточно часто используются для проведения различных исследований. Это объясняется тем, что мыши обладают чрезвычайно высоким обменом веществ, высокой интенсивностью роста и развития, малым размером тела. Также они отличаются большой плодовитостью, непродолжительным сроком беременности, способностью выкармливать свое потомство в короткие сроки.
На этапе изучения фармакодинамики определялось влияние БЦЛ на ряд биохимических и иммунологических показателей крови белых мышей. Полученные данные представлены в
Примечание: Р 0,05 в сравнении с началом опыта Как видно из данных, приведённых в Таблице 8, при исследовании крови мышей в контрольной группе оказалось, что достоверные изменения (Р 0,05) отмечены только по показателю общего белка, количество которого увеличилось в конце опытов на 16%. По остальным исследуемым показателям изменения не достоверны.
В группе 2, где применялся БЦЛ в дозе 0,2 мл (0,5108 КОЕ) отмечено достоверное увеличение фагоцитарной активности на 9,5% и бактерицидной активности на 8,7%.
В группе 3 (доза БЦЛ 0,5 мл=1,25108 КОЕ) выявлено достоверное увеличение (Р 0,05) в сыворотке крови количества общего белка на 8%, гамма-глобулинов – на 25%, фагоцитарной и бактерицидной активности на – 32%, лизоцимной активности – на 62,5%.
В группе 4, в которой БЦЛ применялся в дозе 1 мл (2,5108 КОЕ), достоверно изменялась только бактерицидная активность (Р 0,05), которая увеличилась на 19%.
Таким образом, после проведённых исследований было установлено, что наиболее благоприятные изменения по исследуемым показателям были отмечены в дозе 0,5 мл/мышь.
После применения БЦЛ все мыши оставались клинически здоровыми. На протяжении всего периода наблюдений животные потребляли корм и воду, активно вели себя, не проявляя каких-либо патологических симптомов, летальных случаев не отмечалось.
После эвтаназии и вскрытия мышей, установлено, что препарат БЦЛ не влиял на массу исследуемых внутренних органов в сравнении с контролем, однако, оказал влияние на массу тела животных в дозе 1 мл, которая увеличилась на 16,7% (Таблица 9).
Физико-химическая и токсикологическая оценка препарата бактоцеллолактин
Данные таблицы 16 свидетельствуют о том, что достоверных изменений в исследуемых показателях крови поросят контрольной группы не выявлено (Р 0,05), и они представляли собой картину, характерную для животных данного возрастного периода.
После применения БЦЛ в дозе 2 мл на животное количество лейкоцитов повысилось на 6,2%, сульфгидрильных (SH) групп на 5,5%, при этом отмечалось снижение -глобулинов на 16,7% (Р 0,05).
После применения БЦЛ в дозе 5 мл на животное достоверно (Р 0,05) отмечалось увеличение количества лейкоцитов на 27,9%, общего белка – на 10%, церулоплазмина – на 16,5%, сульфгидрильных групп – на 9,6%, альбуминов – на 15,4% и -глобулинов – на 18,4%, -глобулинов – на 13,8%, при этом количество -глобулинов уменьшилось на 41,8%.
При использовании дозы 10 мл на животное достоверно (Р 0,05) произошло увеличение числа лейкоцитов на 30,7%, количество общего белка – на 11%, церулоплазмина – на 24,8%, сульфгидрильных групп – на 13,6%, альбуминов – на 22,2%, -глобулинов – на 15,8%, -глобулинов – на 9,4%, при этом выявлено снижение -глобулинов на 46,8%. Данные о влиянии БЦЛ на резистентность к желудочно-кишечным болезням поросят представлены в Таблице 17.
Как видно из данных, представленных в Таблице 17, максимальной сохранности поросят (100%) удалось добиться в группах 3 и 4, в которых препарат применяли в дозах 5,0 и 10,0 соответственно. Заболеваемость поросят желудочно-кишечными болезнями в контроле оказалась выше, чем во 2-й опытной группе в 2,6 раза.
В результате проведённых экспериментов установлено, что с профилактической целью наиболее рационально применять БЦЛ в дозе 5 мл (сохранность 100% по сравнению с 88% в контроле). При этом физиологическое состояние животных в опытных и контрольной группах в конце эксперимента не отличалось. Поросята активно передвигались, охотно потребляли корм и воду, не проявляли каких-либо патологических симптомов. Температура тела как в опытных, так и в контрольной группах находилась в пределах физиологической нормы и составляла от 39,5 до 40,30С; частота сердечных сокращений в минуту у поросят опытной группы составила 75±5,0, в контрольной – 69±4,0; частота дыхательных движений в минуту у животных опытных и контрольной групп находилась в пределах 10±1,0. Таким образом, следует заключить, что БЦЛ обладает профилактической эффективностью в отношении желудочно-кишечных патологий у поросят в дозах 5 и 10 мл (100%-ная сохранность поросят по сравнению с 88% в контроле). В качестве оптимальной дозы для использования в дальнейшей работе с поросятами-отъёмышами определена доза БЦЛ 5 мл как наиболее эффективная и экономически целесообразная.
На следующем этапе исследований изучено влияние оптимальной дозы БЦЛ на некоторые биохимические и иммунологические показатели, характеризующие функциональное состояние печени и естественной резистентности поросят-отъёмышей (Таблица 18). Таблица 18. Иммуно-биохимические показатели крови после применения БЦЛ поросятам в дозе 5 мл (X±Sx, n=30)
Из данных Таблицы 18, видно, что через месяц после начала эксперимента в сыворотке крови поросят опытной группы достоверно снизились (Р 0,05) исследуемые биохимические показатели: активность АСТ – на 6,6%, АЛТ – на 13%, содержание билирубина – на 42,6% и холестерина – на 8,4%, что свидетельствовало о благоприятном влиянии на функциональное состояние печени животных. Положительная динамика наблюдалась и в отношении иммунологических показателей (бактерицидная и лизоцимная активность), которые повышались, достигая при этом нормальных (для данной возрастной группы животных) значений.
Так, лизоцимная активность увеличивалась на 10%, а бактерицидная активность на 13,9% по сравнению с первоначальными показателями. В контрольной группе достоверных изменений не отмечено (Р 0,05).
Определение оптимальной дозы бактоцеллолактина для поросят отъёмышей, его влияние на иммунно-морфо-биохимический статус и профилактическая эффективность
При проведении опытов на поросятах-отъёмышах первоначально осуществлялся поиск оптимальной дозы БЦЛ. Для этого проводили оценку влияния БЦЛ на морфологические, биохимические и иммунологические показатели крови и профилактическую эффективность препарата при желудоч-но-кишечных болезнях.
Были сформированы 4 группы животных в возрасте 2-х месяцев по 100 голов в каждой: контроль (кормление животных производилось в соответствии со стандартным рационом, применяемым в хозяйстве) и 3 опытные, в которых в рацион дополнительно вводили БЦЛ в дозах 2 мл (5,0108 КОЕ); 5 мл (12,5108 КОЕ) и 10 мл (25108 КОЕ) на поросёнка.
В опытных группах БЦЛ равномерно смешивался с кормом, в соответствии с испытуемой дозой, из расчёта на каждую голову.
Препарат вводился в рацион один раз в день, перед утренним кормлением, в течение 30 дней. После этого отслеживалось клиническое состояние поросят, фиксировались все случаи возникновения патологий желудочно-кишечного тракта.
В результате было установлено, что при применении БЦЛ в дозе 2 мл на животное достоверно (Р 0,05) повысилось количество лейкоцитов на 6,2% и SH групп на 5,5%, при этом отмечалось снижение -глобулинов на 16,7%. После применения БЦЛ в дозе 5 мл на животное достоверно (Р 0,05) отмечалось увеличение количества лейкоцитов на 27,9%, общего белка – на 10%, церулоплазмина – на 16,5%, SH групп – на 9,6%, альбуминов – на 15,5 и -глобулинов – на 18,4%, -глобулинов – на 13,8%, при этом количество -глобулинов уменьшилось на 41,8%.
При использовании дозы 10 мл на животное достоверно (Р 0,05) произошло увеличение числа лейкоцитов на 30,7%, количество общего белка – на 11%, церулоплазмина – на 24,8%, SH групп – на 13,6%, альбуминов – на 22,2%, -глобулинов – на 15,8%, -глобулинов – на 9,4%, при этом выявлено снижение -глобулинов на 46,8%. При этом по окончании опытов в контрольной группе количество заболевших животных составило 12%, в 1-й опытной группе – 3,4%, а в группах 3 и 4 заболевших поросят выявлено не было.
Таким образом, в качестве оптимальной дозы для использования в дальнейшей работе с поросятами-отъёмышами определена доза БЦЛ 5 мл как наиболее эффективная и экономичная.
На следующем этапе исследований формировались 2 группы поросят (100 голов) для изучения влияния оптимальной дозы на некоторые иммуно-биохимические показатели естественной резистентности.
В результате установлено, что исследуемые биохимические показатели снизились достоверно (Р 0,05): АСТ на 6,6%, АЛТ на 13%, билирубин на 42,6% и холестерин на 8,4%, находясь в пределах нормы, что свидетельствовало об отсутствии негативного влияния на функциональное состояние печени животных. Лизоцимная активность увеличивалась на 10%, а бактерицидная активность – на 13,9% по сравнению с первоначальными показателями, что указывало на повышение естественной резистентности.
На основании полученных результатов была разработана схема применения БЦЛ телятам 1-месячного возраста и поросятам-отъёмышам. БЦЛ рекомендуется для повышения естественной резистентности и профилактической эффективности при желудочно-кишечных и респираторных болезнях у одномесячных телят и желудочно-кишечных болезней поросят-отъемышей, методом выпаивания или смешивания с традиционным кормом. Препарат вводят один раз в день в течение 10–30 суток , в зависимости от экономической целесообразности, в следующих дозах: – телятам в возрасте 1-го месяца 10 мл; – поросятам-отъёмышам в возрасте 2-х месяцев 5 мл. Разработанная схема применения БЦЛ телятам и поросятам апробировалась в производственных условиях. БЦЛ применялся при использовании установленных экспериментальным путём оптимальных доз и кратности применения пробиотика для телят и поросят. На основании проведённых экспериментов на телятах было установлено, что вследствие применения БЦЛ в дозе 10 мл только 3 телёнка заболели респираторными болезнями(7,5%) и один – желудочно-кишечными патологиями (2,5%), однако в течение 5±1 дней отмечалось полное клиническое выздоровления от респираторных и в течение 4 дней – от желудочно-кишечных заболеваний. В то же время в контрольной группе 3 телёнка заболели респираторными (15%) и 1 – желудочно-кишечными болезнями (5%). Сроки выздоровления от респираторных заболеваний в контроле составили 7±1, а при желудочно-кишечных патологиях – 6 дней. В контрольной группе отмечали летальный исход в 10% случаев. Таким образом, профилактическая эффективность после применения препарата в опытной группе составила 90%, а сохранность оказалась выше, чем в контроле на 10% и достигала 100%.
В результате применения БЦЛ поросятам-отъёмышам в дозе 5 мл показано, что препарат обладает профилактической эффективностью в отношении желудочно-кишечных болезней. Заболеваемость желудочно-кишечными патологиями в опытной группе составила 2%, тогда как в контроле 16%. Профилактическая эффективность в опытной группе составила 98%, а сохранность – 100%, а в контрольной группе данный показатель составлял 90%. Продолжительность болезни животных до полного исчезновения клинических признаков в опытной группе оказалась на один день короче, чем в контроле. При этом заболевание у поросят опытной группы протекало в более лёгкой форме.