Содержание к диссертации
ВВЕДЕНИЕ 4
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8
Средства терапии острой лучевой болезни 8
Противолучевые свойства препаратов природного происхождения 15
2.3 Заключение по литературному обзору 31
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 32
3.1. Материалы 32
Животные 32
Препараты растительного и животного происхождения 32
3.2. Методы 33
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 39
4.1. Влияние экстракта Chamaenerion angustifolium на
интактных и облученных животных 39
4.1.1. Интактные животные 39
Общее состояние, безвредность 39
Показатели белой крови и клеточности органов кроветворения 40
Фагоцитарная способность нейтрофилов 41
4.1.2. Облученные животные 43
Общее состояние, выживаемость 43
Устойчивость облученных животных к физической
нагрузке и кислородной недостаточности 46
Показатели белой крови и клеточности органов кроветворения 48
Фагоцитарная способность нейтрофилов 51
4.2. Влияние сока Stellaria media на интактных
и облученных животных 52
4.2.1. Интактные животные 52
Общее состояние, безвредность 52
Показатели белой крови и клеточности органов кроветворения 53
Фагоцитарная способность нейтрофилов 54
з
4.2.2. Облученные животные 56
Общее состояние, выживаемость 56
Устойчивость облученных животных к физической нагрузке
и кислородной недостаточности 58
Показатели белой крови и клеточности органов кроветворения 60
Фагоцитарная способность нейтрофилов 64
Колониеобразующая активность селезенки 64
4.3. Влияние препарата СПСЛ на интактных и облученных
животных 66
4.3.1. Интактные животные 66
4.3.1.1. Общее состояние, безвредность 66
4.3.2. Облученные животные 68
Общее состояние, выживаемость 68
Устойчивость облученных животных к функциональным
нагрузкам 68
Показатели венозной крови и клеточности органов кроветворения облученных животных 71
Колониеобразующая активность селезенки 75
Действие профилактического препарата СПСЛ и лечебного сока Stellaria media на облученных кроликов 76
Иммунотропные свойства сока Stellaria media 84
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 86
ВЫВОДЫ 104
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 105
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 106
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 139
ПРИЛОЖЕНИЕ 140
Введение к работе
Актуальность темы. Проблема разработки научно-обоснованных методов и средств лечения и профилактики острой лучевой болезни животных в условиях интенсивного развития и применения ядерной энергетики, является актуальной задачей радиобиологии.
Литературные данные свидетельствуют, что при у- облучении в дозах от 3 до 10 Гр, одним из наиболее серьезных последствий радиационного облучения животных является угнетение кроветворной и иммунной системы. Вызванное лучевым воздействием нарушение кроветворения, приводит к обеднению венозной крови форменными элементами, в результате чего развивается прогрессирующая лейкопения, эритро - и тромбоцитопения [179, 60].
В терапии лучевых поражений чрезвычайно важную роль играют процедуры, способные восстановить кроветворные функции организма, такие как - пересадка костного мозга, переливание крови и ее компонентов. Наряду с этим, важным путем разработки средств терапии лучевой болезни представляется изыскание стимуляторов кроветворения и витаминов, способных усиливать процессы размножения и восстановления кроветворных элементов, а также трансформировать недифференцированные элементы костного мозга, обладающие относительно низкой радиочувствительностью, в клетки крови. Поэтому, вполне закономерно, что одно из первых мест в лечении лучевой болезни занимают мероприятия, направленные на предупреждение нарушений и на скорейшее восстановление гемопоэза [51, 95, 86, 24, 260, 211].
В настоящее время в радиобиологии научную поддержку приобретают лечебные средства, приготовленные из природных источников, в частности, из растений, которые содержат целый комплекс физиологически активных веществ: флавоноиды, каротиноиды, токоферолы, жиро- и водорастворимые витамины, обладающие адаптогенными, иммуномодулирующими,
5 антиоксидантными свойствами и обеспечивающие, в совокупности, повышение радиорезистентности организма [102, 85].
Биологические препараты отличаются от химических более мягким и продолжительным действием, безвредностью, эффективны после облучения (55,100). К положительным свойствам средств природного происхождения относятся их относительная дешевизна, безвредность, возможность перорального неограниченно длительного применения, хорошая сочетаемость с другими препаратами. Некоторые из них имеют корригирующее действие по отношению к органам и системам организма при различных болезнях.
К таким растениям относятся Звездчатка средняя (Stellaria media) и Кипрей узколистный (Chamaenerion angustifolium), однако их противолучевые свойства не исследованы. В связи с вышеизложенным, изучение противолучевых и иммунотропных свойств растений St. media и Ch. angustifolium является актуальным.
Цель и задачи исследований
Цель работы - изучить противолучевые и иммунотропные свойства растений St. media и Ch. angustifolium.
Исходя из поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:
Разработать способы получения биологически активных веществ из растений St. media, Ch. angustifolium и из тканей облученных овец и свиней (селезенки, печени, сыворотки крови и легких) - СПСЛ.
Изучить безвредность полученных веществ и их влияние на общее состояние, показатели венозной крови и костномозгового кроветворения у интактных и облученных животных.
Оценить терапевтические и иммунотропные свойства сока St. media и экстракта Ch. angustifolium, профилактические свойства препарата СПСЛ при костномозговой форме острой лучевой болезни.
Научная новизна работы:
Впервые установлены противолучевые и иммунотропные свойства растений St. media и Ch. angustifolium.
Показано благоприятное влияние препаратов из растений St. media и Ch. angustifolium на показатели кроветворения и выживаемость животных, облученных в дозах, вызывающих костномозговую форму экспериментальной острой лучевой болезни.
Личный вклад соискателя
Представленные в диссертационной работе экспериментальные исследования, теоретический и практический анализ полученных результатов проведены автором самостоятельно. В выполнении работы практическую и консультативную помощь оказывали сотрудники ГНУ ВНИИВВиМ: Куренков Д.В., Пономарев В.Н., Прилепская Е.П.
Практическая значимость
Изготовлены и предложены для экспериментальных испытаний опытные образцы из растений St. media, Ch. angustifolium и тканей облученных животных - СПСЛ.
Разработаны методические рекомендации по применению сока St. media, экстракта Ch. angustifolium и препарата СПСЛ для лечения и профилактики экспериментальной острой лучевой болезни, предназначенные для специалистов научно-исследовательских и учебных учреждений, занимающихся разработкой средств фармакологической противолучевой защиты животных. Апробация работы
Материалы диссертации доложены на II- й Открытой Всероссийской
научно — практической конференции молодых ученых «Молодежь и наука
XXI века» (г. Ульяновск, 2007), I Съезде ветеринарных фармакологов России
(г. Воронеж, 2007), Международной научно - практической конференции
«Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов»
(г. Щелково, 2007), Международной научно - практической конференции
«Актуальные вопросы аграрной науки и образования» (г. Ульяновск, 2008),
7 Международной научно - практической конференции, посвященной 50 -летию ВНИИВВиМ «Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционними болезнями животных» (г. Покров, 2008), Вторых чтениях, посвященных памяти В.И. Корогодина и В. А. Шевченко «Актуальные вопросы генетики, радиобиологии и радиоэкологии» (Дубна, 2008), заседаниях Ученого совета ВНИИВВиМ (2006, 2007, 2008 гг.).
Публикация результатов
Результаты основных этапов диссертации опубликованы в 8 научных работах, в том числе 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ. Основные положения, выдвигаемые на защиту
Влияние препаратов биологической природы на гематологические и иммунологические показатели облученных животных.
Лечебно-профилактические свойства продуктов биологической природы при костномозговой форме острой лучевой болезни.
Иммунотропное и стимулирующее действие осветленного сока St. media и экстракта Ch. angustifolium на кроветворение в костном мозге и селезенке при острой лучевой болезни.
Благодарности
Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Исследования проведены в лабораториях «Изотопных методов исследований» и «Иммунологии». Иммунотропные свойства Stellaria media исследованы совместно с д.б.н. Б.В.Новиковым, при выделении клеток костного мозга консультативную и практическую помощь оказывали д.б.н. В.Н. Пономарев, к.б.н. Д.В. Куренков, Е.П. Прилепская. Автор выражает искреннюю признательность всем участникам этих работ.
2. Обзор литературы 2.1. Средства терапии острой лучевой болезни
Непрерывное развитие ядерной энергетики, широкое использование в промышленности, науке и других сферах деятельности человека источников ионизирующего излучения (ИИ) неизбежно повышает риск возникновения радиационных аварий и, соответственно, облучения человека и животных в поражающих дозах [25, 27, 203].
События на Чернобыльской АЭС продемонстрировали значение использования комплексной защиты от радиационных поражений, которая наряду с методами физической защиты - экранированием инженерными сооружениями, сокращением времени нахождения в опасной зоне, расстоянием, являющимися наиболее надежными, но не всегда осуществимыми, предполагает применение радиопротекторов [35, 72, 88].
В результате многочисленных исследований были найдены вещества, которые будучи введенными в организм животных за определенное время до облучения, снижали в той или иной степени поражающий эффект радиации, что благоприятным образом сказывалось на развитие, течение острой лучевой болезни (ОЛБ) и увеличение процента выживаемости. При определенных условиях эксперимента некоторые препараты обеспечивали 100%-ную выживаемость животных в опытных группах при 100%-ой гибели в контрольных группах [6, 123].
Фармакохимическая, биологическая и локальная защита может в значительной степени ослабить поражающий эффект радиации, облегчить тяжесть лучевой болезни, спасти от смертельного исхода, но не предотвратить развитие самого патологического процесса, поэтому все пострадавшие (применялась защита или не применялась) будут нуждаться в лечении [173].
После масштабной аварии на Чернобыльской АЭС акцент в экспериментальных исследованиях переместился с радиозащитных
9 препаратов на лечебные. Основное направление исследований - поиск средств ускорения процессов пострадиационного восстановления на путях клеточной регенерации, прежде всего в кроветворном стволовом пуле [11].
Острая лучевая болезнь представляет собой полисиндромное заболевание, ее лечение должно быть комплексным и строиться в соответствии с формой, степенью тяжести и периодом заболевания [135, 158, 169].
Если рассматривать восстановление организма после общего облучения с клеточно-кинетических позиций [164], то в первом приближении можно считать, что оно представляет собой процесс замены пораженных клеток здоровыми. Терапевтические средства должны способствовать ускорению или стимуляции этого процесса. В этом состоит первый принцип лечения лучевой болезни - патогенетическая терапия наиболее значимых проявлений заболевания. Однако следует учитывать и нарушения, возникающие в «некритических» системах организма, воздействия на которые составляет второй принцип лечения, состоящий в симптоматической терапии.
Таким образом, ликвидация последствий острого облучения происходит в процессе заместительной и функциональной терапии.
Известно, что критической системой клеточного обновления млекопитающих и человека при облучении в диапазоне доз до 10 Гр является система кроветворения, и , в первую очередь, костный мозг [171, 113, 156, 208]. Большинство клинических проявлений и симптомов при таких дозах ионизирующего излучения связано с деструкцией и нарушением пролиферации кроветворных клеток, вследствие чего этот синдром называют костномозговым [255].
Важным компонентом кровеносной системы являются клетки стволового типа, способные к поддержанию численности собственного пула и дающие начало дифференцирующимся рядам. Стволовая кроветворная клетка (СКК), пролиферация и дифференциация которой и представляет
10 собственно процесс кроветворения, лежит в основе механизмов, поддерживающих гомеостаз в отношении выработки различных типов клеток при колебании потребностей организма в элементах того или иного ряда. СКК обладает высокой радиочувствительностью (D0 порядка 1 Гр), что предопределяет выраженную панцитопению белой крови уже после облучения в дозах, превышающих 1-2 Гр [93, 188, 194].
Следовательно, восполнение клеточной убыли кроветворной системы составляет первостепенную задачу заместительной терапии, способствующей ослаблению первичных (аплазия костного мозга, обеднение форменными элементами периферической крови) и вторичных (инфекционные осложнения и кровоточивость) нарушений, непосредственно угрожающих жизни [204].
Производились многочисленные попытки ослабить патологические состояния у облученных животных посредством лечения, включающего в себя переливание крови, введение изолированных периферических клеток крови и различных антибиотиков [213, 228]. Однако ввиду того, что ведущим симптомом при данной форме лучевой болезни является подавление кроветворения, симптоматическое лечение может дать эффект при условии относительно быстрого восстановления костного мозга.
Большой вклад в изыскание средств и способов лучевой лейкопении внесли крупнейшие отечественные и зарубежные ученые [28, 30, 52, 168, 197, 227].
Открытие ключевой роли поражения кроветворных клеток в диапазоне доз до 10 Гр принадлежит Jacobson L. О. (1951), который первым описал лечебный эффект трансплантации суспензии кроветворных клеток, полученных от необлученных животных. Положительные результаты трансфузии костного мозга были получены на разных видах млекопитающих: собаках [17, 242, 252], обезьянах [139] и др. Однако применение трансплантации ограничено вследствие того, что случаи совпадения группы крови и всех тканевых антигенов донора единичны [12, 178, 209, 217].
11 Средством, относящимся к заместительной терапии, можно считать и переливание жидкостей, солевых растворов, глюкозы и т.д., компенсирующих утрату электролитов и воды вследствие поражения кишечника [258]. Эти средства в комбинации с антибиотиками существенно уменьшают раннюю летальность животных.
В 70-е годы прошлого столетия в эксперименте разрабатывались различные средства функциональной терапии острого лучевого синдрома, результаты которых суммированы в работах В. Бонда и др. (1971) и D.W. Van Bekkum (1974). Среди них, особый интерес представляют попытки ученых применить препараты ДНК и РНК в лечении облученных животных. По данным разных авторов [192, 235], эффективными оказались высокополимерные препараты, олиго - и мононуклеотиды. Рогозкиным В.Г. и Чертковым К.С. (1979) получены убедительные результаты, свидетельствующие о положительном влиянии небольших количеств глюкокортикоидов на процессы репарации. А.К. Гуськовой и Г.Д. Байсоголовым (1970) успешно применен препарат преднизолон (по 10-15 мг) в конце фазы разгара и в начале фазы раннего восстановления острой лучевой болезни.
Дальнейшие исследования в области радиобиологии по разработке средств патогенетической терапии радиационных поражений позволили сформулировать классические схемы терапии острой лучевой болезни.
Схемы комплексной терапии предусматривают средства, направленные на поддержание и улучшение деятельности всех органов и систем, страдающих при ОЛБ, включающие в себя следующие мероприятия:
оказание помощи при первичной реакции;
предупреждение и борьбу с инфекционными осложнениями;
замещение и восстановление нарушенной деятельности кроветворных органов;
профилактику и лечение геморрагического синдрома [51].
12
Иммунная система также является критическим звеном при лучевом
поражении организма, поскольку развивающийся при острой лучевой
болезни пострадиационный вторичный иммунодефицит по
агранулоцитарному типу является причиной развития костномозгового синдрома [31]. По данным А.А. Ярилина и др. (1992), в ранние сроки острой лучевой болезни у лиц, пострадавших на аварии Чернобыльской АЭС, выявлено относительное снижение содержания Т-лимфоцитов в крови, уменьшение титра тимического сывороточного фактора в 1,5 раза и отсутствие изменения числа В-лимфоцитов [4, 55]. Так, по мнению В.А. Киршина (1999), при воздействии ионизирующих излучений, первоначально специфические изменения возникают в органах иммунной системы (биофизические, биохимические, функциональные, морфологические изменения), и лучевую болезнь следует классифицировать как неинфекционную патологию иммунной системы [54, 87, 183].
Вследствие наблюдающегося у больных лучевой болезнью длительного пострадиационного агранулоцитоза, в целях предупреждения развития инфекционных осложнений необходимо проводить ряд профилактических мероприятий [170, 179, 215]. При этом рекомендуется одновременно использовать несколько антибиотиков для увеличения спектра их действия. Это имеет большое значение в борьбе с лучевой бактериемией, при которой виды выделяющихся из крови микробов и состав нормальной флоры кишечника, являющегося источником микроорганизмов, очень разнообразны [56]. Разработаны рациональные комплексы на основе антибиотиков различных классов, назначаемые циклами 2 раза в сутки [16, 36, 199]. Вследствие развития у больных, под влиянием антибиотиков, дисбактериоза, были проведены эксперименты и получены положительные результаты лечения ОЛБ с использованием бактерийных препаратов -антибиотикоустойчивых штаммов бифидобактерий [37, 71, 85].
Эффективным средством лечения ОЛБ является терапия гемопоэтическими ростовыми факторами. К наиболее изученным
13 гемопоэтическим ростовым факторам относится фактор стволовых клеток (ФСК), гранулоцитарно - макрофагальный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ), макрофагальный колониестимулирующий фактор (Г-КСФ), ИЛ-3, ИЛ-5, Ил-6, ИЛ-11, ИЛ-12 и др. [31, 40, 66].
Цитокины представляют собой низкомолекулярные пептиды, обнаруживающиеся в системном кровотоке, тканях млекопитающих в нормальных условиях и служащие для передачи межклеточной информации. Они вовлекаются в регуляцию воспалительных, иммунологических и гемопоэтических реакций. По мнению Черткова К.С. и соавт. (1999), средства ранней терапии лучевых поражений ускоряют начало и интенсифицируют процесс восстановления количество.^ стволовых кроветворных клеток и последовательно всей популяции костного мозга и периферической крови.
Впервые гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор был успешно использован при лечении ОЛБ в 1986 г. у пострадавших при аварии на ЧАЭС [177, 226]. Перспективно применение человеческого гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (hG-CSF) при лечении радиацинноиндуцированной миелосупрессии. Так, рекомбинантный интерлейкин-1Р человека при введении через 1 - 3 ч после облучения в дозах СД8о/зо повышал выживаемость мышей до 60-90%, способствовал снижению выраженности лейкопении и более быстрому восстановлению клеточных элементов костного мозга [18].
Комбинированное применение цитокинов может существенно повысить терапевтический эффект вследствие синергизма в действии ранне -(ГМ-КСФ, ИЛ-3) и позднедействующих (Г-КСФ, М-КСФ) цитокинов [205, 221]. Однако их необходимо вводить многократно (10-12 раз), что существенно затрудняет практическое применение при массовых поражениях [165].
14 В поиске противолучевых средств одним из перспективных направлений исследований является создание нового поколения модификаторов лучевого поражения - биологически активных веществ природного происхождения, не оказывающих токсического влияния на организм животных. Их применение способствовало повышению противолучевой устойчивости организма, как при остром воздействии, так и в условиях хронического облучения [79, 146].
Таким образом, современный период развития радиобиологии, связанный с проблемами радиоэкологического кризиса, диктует новые подходы к разработке средств противолучевой защиты от ионизирующей радиации. Сохраняется необходимость в исследованиях природных препаратов, способных, не оказывая вредного побочного действия на организм, снижать или предотвращать эффекты ионизирующего облучения [87, 100].
2.2. Противолучевые свойства препаратов природного
происхождения
Большое количество исследований по изысканию радиозащитных противолучевых средств и полученные при этом результаты позволили провести их классификацию [105, 106], согласно которой они подразделяются на три группы: радиопротекторы, стимуляторы резистентности и средства защиты от внутреннего облучения. В свою очередь радиопротекторы, в зависимости от органов (систем) для защиты которых они предназначены, разделены на миело-, энтеро- и церебропротекторы; стимуляторы резистентности - на средства защиты от поражающих и субклинических доз облучения; средства защиты от внутреннего облучения - на препараты, предупреждающие всасывание, накопление и выведение радионуклидов из организма.
Среди радиопротектеров, относящихся к группе веществ, направленных на защиту костного мозга и гемопоэтических тканей, важное место занимают миелопротекторы, защитная эффективность которых выражается в единицах фактора уменьшения дозы (ФУД), достигающего 1,5-1,7, применяющиеся для профилактики и лечения в «костномозговом» диапазоне доз [80].
Не акцентируя внимания на препаратах химической природы, механизм действия которых связан с гипоксическим эффектом, включающих в себя биологически активные амины, серотонин и другие производные индолалкиламинов, адреналин, мезатонин, клонидин, индралин и др. [173], а также классических серосодержащих миелорадиопротекторов - цистамин, цистафос, гаммафос и др., остановимся на фармакологических средствах природного происхождения, механизм действия которых основан на повышении эндогенного фона радиорезистентности (ЭФР), захватывающего нейрогуморальные и гемопоэтические регуляторные системы [80]. Авторы гипотезы ЭФР показали, что внутренние противолучевые ресурсы организма, включающие биологически активные вещества (тиоловые соединения,
биогенные амины), вещества - антиоксиданты, замедляют и останавливают реакции свободнорадикального окисления и, следовательно, уменьшают образование эндогенных радиосенсибилизаторов — радиотоксинов.
Концепция ЭФР позволила предположить, что препараты природного происхождения, а также лекарственные средства, модулирующие общую резистентность организма, издавна применяемые в народной медицине, могут быть использованы в качестве противолучевых средств. Предполагается, что повышение радиорезистентности при введении этих средств опосредовано через увеличение миграции лимфоидных клеток в костный мозг, возрастание количества рецепторов на иммуннокомпетентных клетках, повышение их ферментативной активности, усиление взаимодействия макрофагов с Т- и В- лимфоцитами, увеличение пролиферации стволовых клеток, активизацию гранулоцитопоэза. Большинство природных препаратов сохраняют свою противолучевую активность и иммунотропные свойства в условиях как профилактического, так и лечебного применения [14, 34, 50, 98, 167, 105]. Важным фармакологическим свойством данных соединений является их способность повышать эффективность антиоксидантной системы клеток [91, 186].
Ведущими звеньями в противолучевом действии профилактических и лечебных препаратов природного происхождения являются - стимуляция колониеобразования стволовых элементов костного мозга и селезенки, повышение функциональной активности лимфоцитов, фагоцитарной активности нейтрофилов, увеличение числа миелокариоцитов и гранулоцитов [33, 83, 189].
Группа средств биологической противолучевой защиты представлена препаратами, относящимися к различным классам (иммуномодуляторы, гормональные препараты, нуклеиновые кислоты, микроэлементы и др.). Для стимуляции пролиферации сохранившихся в облученном организме стволовых костномозговых клеток в эксперименте изучен широкий спектр
17 соединений бактериального, животного и растительного происхождения [49, 122].
Средства биологической защиты способствуют повышению эффективности схемы комплексной терапии лучевой болезни. Для них не имеется противопоказаний, они могут использоваться в любых условиях [173, 182]. Разработанные для медицинского применения четыре лечебных отечественных препарата (продигиозан, дезоксинат, брюшнотифозная вакцина с секстаанатоксином и протейная вакцина) обеспечивают повышение выживаемости животных, облученных в среднелетальных и минимально абсолютно летальных дозах на 25 - 60% . Так, брюшнотифозная вакцина с секстаанатоксином в опытах на мышах, морских свинках и собаках при подкожном применении через 5 часов или сутки после облучения обладала терапевтическим действием [3, 107].
Результаты исследований, направленных на изучение противолучевого действия микробных и вирусных препаратов (вакцин), их экстрактов, фракций, комбинаций, представлены в обобщенном виде в работах многих ученых [4, 89, 115, 184, 212, 216, 257]. Противолучевое действие обнаружено при использовании тетровакцины, гретой вакцины из кишечной палочки, оспенной вакцины, БЦЖ (противотуберкулезная вакцина), вирусов болезни Ньюкасла, гриппа, очищенных эндотоксинов. Вакцинация против сибирской язвы, бешенства, ящура являлась не только эффективным противолучевым мероприятием, но и повышала антиинфекционную резистентность облученных животных.
Сухая протейная вакцина {Proteus antigenic vaccine dried) вызывала формирование антител к О-антигену бактерий рода протея, стимулировала фагоцитарную активность нейтрофилов, бактерицидные и защитные функции сыворотки крови. Обладала способностью повышать устойчивость организма к воздействию ионизирующего излучения, облегчала течение костномозговой формы острой лучевой болезни, ускоряла восстановление функции кроветворения. В качестве средства раннего (через 6-24 ч после
18 радиационного воздействия) лечения протейную вакцину применяли в дозе 0,2 мг в 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия подкожно [32].
Внутривенное введение тифо-паратифозной вакцины собакам через 24 час после облучения в дозе 3,6 Гр повышало выживаемость леченных животных до 80% при 12% в контрольной группе [207].
Не только вакцины, но и другие микробные антигены обладали способностью повышать резистентность организма к действию ионизирующей радиации, снижать смертность облученных животных и выраженность проявлений острой лучевой болезни, повышать их выживаемость [36, 126, 236, 254].
Выявлено, что наиболее выраженное лечебное действие антигены шигелл Флекснера оказывали при однократном подкожном введении через 4 ч после облучения хомячков дозой 7,68 Гр (превышение выживаемости над контролем на 66,4-55,7%)), несколько ниже при назначении через 24 ч (на 43,2-13,6%). Не отмечено лечебного эффекта при пероральном назначении диантигенов шигелл [5].
Бактериальные препараты, выпускаемые медицинской
промышленностью (колибактерин, бификол и др.), также оказывали лечебный эффект при экспериментальной острой лучевой болезни [36].
Вещества животного происхождения (препараты лимфы, селезенки,
костного мозга, тимуса, сывороточных препаратов и др.) оказывают влияние
на регуляторные системы организма, повышают эндогенный фон
радиорезистентности, ускоряют процессы дифференцировки
предшественников кроветворных и иммунокомпетентых клеток в костном мозге [47, 133, 134, 153, 222, 225].
В экспериментах с положительным результатом апробированы препараты тимусного и костномозгового происхождения: вилозен, тимозин, тимопоэтин, тимусный сывороточный фактор ТСФ, тимостимулин ТР-1, тималин, синтетического аналога тимусных пептидов - тимоген, В-активин и другие [8, 18, 78, 111, 141, 185, 198]. Так, препараты из вилочковой железы
19 вилозен и тимоген при двукратном введении (через 2 и 24 ч) мышам, облученным в дозе, близкой к СД5о, повышали выживаемость на 30%.
А.А. Турдыевым и др. (1985) установлена высокая терапевтическая эффективность экстракта селезенки среднеазиатской черепахи. Клеточный состав костного мозга мышей, облученных в дозе 8 Гр, восстанавливался уже к 8-м сут после облучения и введения экстракта. Выживаемость составила 71,2% против 4,2% в контроле.
Экстракты из иммунокомпетентных органов (тимуса, селезенки, костного мозга) содержат низкомолекулярные пептидно-белковые иммунорегуляторы. Так, препарат Неоген, изготовленный на основе трипептида Ile-Glu-Trp (IEW), интенсивно восстанавливает численность кариоцитов и КОЕ-С-8 костного мозга у мышей, облученных дозой 8 Гр. Предполагают, что действие препарата связано с замещением функции утраченных Т-акцессоров, обеспечивая необходимый регуляторный сигнал выжившим гемопоэтическим клеткам [142].
К препаратам, стимулирующим резистентность организма и гемопоэз, относятся отечественный кровезаменитель «Перфторан» и различные препараты крови. Исследованиями установлено, что их применение при острой лучевой болезни, вызванной гамма - излучением в дозе ЛДзо-юо/зсь оказывало положительный эффект, выражающийся в эффективном восстановлении лейкопоэза, корригирующем влиянии на ростки кроветворения, понижении патологических органных проявлений, и как следствие, в увеличении выживаемости животных [39, 75].
Радиопротекторные свойства отдельных компонентов веществ природного происхождения использованы при создании комбинированных пищевых добавок для повышения радиорезистентности организма человека при проведении аварийно-спасательных работ в зоне аварии Чернобыльской АЭС и других аналогичных ситуациях [2, 7, 38, 80, 116, 140, 150].
Для повышения естественной резистентности сельскохозяйственных животных после аварии на ЧАЭС в различных сочетаниях применяли
20
иммуностимуляторы. Применение Т-активина, В-активина,
минералогического субстрата и их сочетаний в комплексе с вакцинацией животных против паратифа, сибирской язвы, ящура и колибактериоза повышало устойчивость телят к заболеваниям пищеварительного тракта на территориях, загрязненных радионуклидами [83, 132, 198].
Для благоприятного иммунологического и физиологического эффектов при радиационной защите предлагается использовать витамины -антиоксиданты, витамино-аминокислотные комплексы, действие которых направлено на восстановление гемопоэза в облученном организме [78, 92, 96, 117, 163, 168, 193, 206, 245, 249].
Теоретическим основанием для использования вышеперечисленных препаратов является их способность благоприятно влиять на процессы биосинтеза белков, нуклеиновых кислот, углеводного и энергетического
обмена, что в конечном итоге оказывает стимулирующее действие на кроветворение, иммунологическую реактивность, смягчает морфологические и биохимические проявления стрессовой реакции, облегчая, таким образом, адаптацию организма к экстремальным факторам различной, в том числе и лучевой, этиологии [90, 229].
Установлено, что витамины - антиоксиданты Е и С снижают поражающий эффект ионизирующего излучения по проявлению острой и хронической лучевой болезни и ее отдаленных последствий [15, 136, 166, 195, 214, 234, 240]. Неоксидантный механизм, описанный наряду с антиоксидантной активностью, у витамина Е может быть обусловлен его влиянием на процессы функционирования клеточных ядер и митохондрий, а также взаимодействием с рецепторами белковой природы [261].
Выявлены противолучевые свойства у витамина а- и р- каротина [144, 147, 161, 232, 246]. Витаминный препарат аммивит (комплекс витаминов группы «В»), обладающий радиопротектерными свойствами, при введении с кормом мышам линии Balb/C в объемах 0,15-0,60 мг/кг массы после облучения в дозе 5 Гр способствовал увеличению их выживаемости на 15-
21 25%. При облучении дозой 7 Гр введение аммивита отдаляет сроки гибели мышей на 1-2 суток [70]. Содержание мышей линии СВА на рационе, обогащенном бета — каротином (1мг/день/мышь), оказывало умеренное влияние на их радиорезистентность. Выживаемость мышей находящихся на лечебно-профилактическом или лечебном рационе, при облучении в дозе 9,5 Гр увеличивалась с 30 до 75%. При облучении в дозе 9,7 Гр увеличение выживаемости с 25 до 65% отмечено при лечебном применении бета -каротина. При облучении в дозе 9,9 Гр добавление к рациону бета -каротина не оказало эффекта на выживаемость облученных животных. При обогащении витаминного рациона мышам после введения изотопа 239Ри бета - каротином через 6 и 9 месяцев происходило увеличение содержания колониеобразующих элементов в костном мозге, а также антителообразующих клеток в селезенке - через 6 месяцев [151].
Выраженным защитно-лечебным действием при радиационном поражении обладали дезоксинат (натриевая соль ДНК, получаемой из молок осетровых рыб), соли оротовой кислоты, соли янтарной кислоты и др. Выявлены благоприятные эффекты рибоксина на восстановление пострадиационных нарушений биосинтетических процессов в миелокариоцитах костного мозга: синтеза ДНК, РНК и белка. Противолучевой эффект рибоксина на крупных животных при остром облучении в смертельных дозах составил 32% [135, 244].
Важное значение биоантиоксидантов в системе защиты организма от облучения в субклинических дозах обусловлено их способностью инактивировать радиотоксины (продукты перикисного окисления липидов, фенольных и гидроароматических соединений и др.), оказывающие угнетающее действие на процессы клеточного деления, вызывающие мутагенные и канцерогенные эффекты и т.д. Для профилактики этих последствий облучения могут быть использованы антоцианы, продукт переработки мидий МИГИ - К и его аналоги, препараты из микроводоросли спирулины, гуминовые препараты и др. [49, 64].
По данным О.И. Белоусовой и др. (1979) и др. препарат хитозан (линейный полисахарид, полученный из панциря ракообразных) способствовал интенсификации процесса восстановления кроветворной ткани. По современным представлениям это действие реализуется благодаря выработке различных цитокинов, принимающих участие в регуляции кроветворения и иммунитета, а также способностью хитозана предупреждать нарушение факторов естественного иммунитета у облученных животных. В опытах на морских свинках установлено, что низкомолекулярный хитозан обладал выраженными лечебными свойствами. При внутривенном или внутримышечном введении через 1-3 ч после облучения число благоприятных исходов увеличивалось до 50% по сравнению с 9% в контроле. Исследования японских и корейских ученых продемонстрировали, что «хитозановая диета» способствовала повышению выживаемости мышей, облученных в сублетальной дозе, при этом у них наблюдалось более быстрое восстановление количество лейкоцитов, тромбоцитов, эритроцитов, содержания гемоглобина и показателя гематокрита [145].
Препарат деринат (вытяжка из молок осетровых рыб, биологически активное вещество - натриевая соль дезоксирибонуклеиновой нативной кислоты) оказывал продолжительное стимулирующее действие на иммунокомпетентные и кроветворные стволовые клетки, проявляющееся через 20 сут и 3-4 мес после введения как у облученных, так и у интактных мышей возрастанием числа 8 - суточных КОЕс, тенденцией к увеличению количества 10-ти суточных КОЕс, активизацией кооперативного Т-В-клеточного взаимодействия, и повышением функциональной активности Т-супрессоров [20].
В результате проведенных Р.Н. Низамовым, Г.В. Конюховым и др. (2006) исследований установлено, что в составе кормовой добавки «Вита -Форце» имеются различные аминокислоты, макро- и микроэлементы, другие химические соединения (до 300). Проведены опыты на летально облученных
23 (7,6 Гр) белых мышах, которым внутрижелудочно с помощью зонда вводили различные концентрации препаратов на основе продуктов пчеловодства («Вита - Форце» и прополис). Установлено, что как профилактическое, так и лечебное применение данных средств уменьшало выраженность постлучевой лейкемии, ускоряло темп восстановления числа лейкоцитов и миелокариоцитов. Препараты стимулировали колониеобразующую способность клеток костного мозга облученных животных, снижали повреждающее действие радиации на выход антителообрзующих клеток в селезенке [125, 126].
Терапевтическое действие препаратов «Вита-Форце» и «Эра-Н» обнаружено через 24 ч после облучения лабораторных животных (белые мыши, белые крысы, кролики) и сельскохозяйственных животных (овцы) в дозах от 6 до 11 Гр. Препараты обеспечили 80 - 100% защиту облученных животных при гибели 80% в группах контроля. Активизирующее влияние «Вита -Форце» и «Эра -Н» на клеточное звено иммунитета проявилось усилением реакции Т- лимфоцитов на ФГА, повышением поглотительной способности моноцитов в отношении частиц лактекса [121].
Стимулирующее действие на пострадиационное восстановление показателей кроветворения, увеличение продолжительности жизни и выживаемость животных отмечено при использовании экстракта женьшеня, яда паука каракурта, масла земляного ореха, экстракта пихты, препарата мумие, перги из пчелиных сот и др. [112, 250].
Особое место в профилактике и лечении многих заболеваний, возникающих в результате воздействия на организм экстремальных факторов, принадлежит растительным препаратам, содержащим биологически активные вещества, механизм действия которых связан с регуляцией внутриклеточного уровня циклических нуклеотидов и нейромедиаторов, участвующих в формировании эндогенного фона резистентности. Растительные препараты широко используются в терапии
24 различных заболеваний, более 80% всех лекарств при болезнях сердечно -сосудистой системы составляют препараты из растений [1, 29, 97, 108, 248].
Действие растительных препаратов более мягкое и осуществляется медленнее, в значительной степени оно является более щадящим. Принимать их можно длительное время, развивающийся при этом терапевтический эффект часто более стоек, реже встречаются рецидивы заболеваний [187].
К биологически активным веществам растений относятся витамины, хлорофиллы и каратиноиды, эфирные масла, алколоиды, фитоэкдизоны, фитонциды. Одним из ранних проявлений экстремального состояния организма является активация перекисного окисления липидов (ПОЛ) [27, 202, 243]. Широко известные препараты женьшень, элеутерококк, аралия обладают выраженной антиоксидантной активностью, с которой связывают их адаптогенное действие [152].
Исходя из симптоматики лучевой болезни, ожидать благоприятный эффект можно от применения растений, обладающих бактерицидным, болеутоляющим и транквилизирующим действием, способностью стимулировать кроветворение, имеющих гепатопротекторные и дубильные свойства [148].
Такими средствами являются корни аралии маньчжурской (Aralia mangshurica pupr. et maxim), содержащие в своем составе белки, крахмал, углеводы, эфирные масла, минеральные соединения, незначительное количество алколоидов, тритерпеновые сапонины. При фармакологическом изучении настойки из корней аралии установлено, что помимо стимулирующих свойств, она оказывает антистрессорное действие, профилактическое и лечебное действие при экспериментальной лучевой болезни, аллоксановом диабете крыс [181].
Наиболее специфическими для женьшеня обыкновенного (Panax ginseng) считаются содержащиеся в корнях тритерпеновые гликозиды (панаксозиды)- А, В, С, D, Е, F. В составе корней содержатся также эфирные и жирные масла, сахара, пектиновые вещества, клетчатка, безазотистые
25 экстрактивные вещества, ферменты, витамины группы В, железо, фосфор, сера, марганец и др. Диапазон фармакологической активности растения широк. Установлено, что женьшень улучшает кровоснабжение мозга за счет расширения пинеальных сосудов, обладает антидиуретическими свойствами, активизирует кроветворение, защищает от токсического действия некоторых химических агентов [45].
Фитопродукт Мариол - МК состоит из сбалансированной композиции
масла расторопши, экстракта трав календулы и ромашки, содержит
незаменимые полинасыщенные кислоты, флавоноиды, биогенные амины,
токоферолы, каратиноиды, эфирные масла, микроэлементы, витамины.
Препарат обладает антиоксидантными, антимутагенными,
антитоксическими, противомикробными и противовирусными свойствами, нормализует работу клеток, и используется как средство защиты от воздействия токсических веществ, отрицательных воздействий окружающей среды, оказывает благоприятное влияние при заболеваниях желудочно-кишечного тракта [58].
Попытки использовать лекарственные растения и препараты, изготовленные из растительного сырья, для лечения и профилактики лучевой болезни предпринимались неоднократно, и во многих исследованиях отмечался положительный эффект [21, 22, 23].
Еще в 40-х годах были получены положительные данные о лечении лучевых поражений препаратами из растений. Показано, что флавоноиды (рутин, цитрин, лейкодельфинидин), эскулетин, танин, меланин в определенных условиях увеличивают выживание животных даже после абсолютно смертельной дозы (ЛДюо) радиации [9, 224, 241].
Исследованиями растений, входящих в состав кормового рациона монгольских песчанок (солянки холмовой - Salsola collina), кохии простертой (Kochia prostrata), ковыля байкальского (Stipa baikalensis), коры солянки древцовидной, боялыча (Salsola arbucula), а также их смесей установлено, что они в течение длительного времени способствуют сохранению повышенной
26 радиорезистентности у лабораторных животных. Это состояние сохранялось у' белых крыс и песчанок в течение двух недель после прекращения скармливания им трав. Радиозащитный эффект исчезал, когда промежуток между скармливанием и облучением достигал 19 суток, и был более выраженным при применении растений до и после облучения. Авторы предположили, что исследованные растения способны оказывать не только профилактическое, но и терапевтическое действие. Фактор уменьшения дозы (ФУД) колебался от 1,25 до 1,45 при действии -различных растений. Обнаружено, что в организме радиорезистентных грызунов содержалось повышенное количество эндогенных радиопротекторов (биогенных аминов) и был понижен уровень биогенных радиосенсибилизаторов (продуктов окисления высших ненасыщенных жирных кислот) [162].
Интерес представляют соединения фенольной группы растений, противолучевой эффект которых проявляется при введении через рот [84]. Растительные фенолы проявляют общеукрепляющее, бактерицидное и бактериостатическое действие. Особенно интересна антиоксидантная способность фенолов, благодаря чему они оказываются эффективными и как радиопротекторы, и как радиотерапевтические средства [174, 210, 237].
Растительные фенолы повышают прочность стенки кровеносных сосудов и уменьшают их проницаемость (Р-витаминное действие). Различные Р-витаминные препараты обладают собственным симпатомимитическим действием [10], стабилизируют адреналин в крови, оказывают спазмолитическое действие, стимулируют секрецию желудочно -кишечного тракта и желчи. За счет действия флавоноидов сосудистая и тканевая проницаемость уменьшаются. Антиокислительная активность биофлавоноидов может объясняться способностью многих из них образовывать комплексные соединения с ионами тяжелых металлов, а также способностью действовать в качестве акцепторов, образующихся при аутоокислении свободных радикалов. К числу высокоэффективных соединений относятся и полифенолы - флавоноиды и хиноиды, которым
27 присущи радиомодифицирующие свойства [84]. Полифенольные комплексы увеличивают образование антител и количество клеток, секретирующих иммуноглобулины I, G, М, в результате чего возрастает устойчивость организма к различным инфекционным заболеваниям, возникающим при ОЛБ [223].
Сведения, полученные А.Х. Ахмадиевой и др. (1993), свидетельствуют о выраженной противолучевой эффективности одной из групп биофлавоноидов- антоцианов. Флавоноиды как антиоксиданты обладают антимутагенным эффектом при действии ионизурующего излучения [218, 220, 231, 239]. Засухиной Г.Д. и др. (1997) обнаружена антиоксидантная активность чесночного экстракта, показана его выраженная способность защищать ДНК клеток человека от действия радиации и некоторых химических мутагенов.
Введение с помощью зонда внутрь облученным в дозе 6,72 Гр мышам сухого экстракта травы гречихи (СЭТГ), обладающего Р- витаминной активностью, содержащего рутин (10,3%), микроэлементы (марганец, хром, никель, медь, цинк) и антоциановые производные, в сочетании с олететрином, с конца 1-х по 18-е сутки приводило к достоверному повышению выживаемости животных на 20%. При добавлении к этому комплексу аскорбиновой кислоты выживаемость животных возрастала до 60%. Исследования показали, что СЭТГ обладает антигеморрагической активностью и в комбинации с антибиотиком является более действенным препаратом. Авторы предположили, что это связано с более высоким содержанием в комплексном препарате микроэлементов, способных вместе с витаминами оказывать благоприятный эффект на некоторые обменные процессы в организме при лучевой болезни [131].
Терапевтическое применение препарата серпистена, выделенного из наземной части серпухи венценосной (Serratula coronata L.), в дозе 50 мг/кг массы тела в течение 10 дней после низкоинтенсивного пролонгированного
28 у- облучения мышей привело к частичной нормализации состава фосфолипидов эритроцитов в крови, печени, селезенки [149, 201].
Применение белым крысам в течение 15 суток до и 30 суток после облучения дозами 7, 8, 9 Гр водных настоев из плодов барбариса амурского, корейского и обыкновенного, плодов боярышника обыкновенного, корня солодки уральской, сока черноплодной рябины, настойки корня женьшеня, а также чайного напитка «Карагод» из расчета 25 мг/кг массы тела увеличивало продолжительность жизни облученных животных до 30% [ПО].
Пролонгированное применение провитаминного концентрата и хлорофилл - каротиновой пасты, полученных из зелени низкосортной древесины (ель, сосна), применяемых в количестве 0,2 мг/кг массы тела облученных в дозе 7,2 Гр животных, показало наличие профилактических и лечебных свойств. Так, при применении вышеуказанных препаратов до и после облучения, к 60-м суткам выживаемость животных составила 60%, в то время как контрольная группа погибла на 10-14-е сутки. Изученные БАВ обладали стимулирующим действием на кроветворную функцию организма (восстанавливали уровень лейкоцитов, эритроцитов, уровень гемоглобина к 30-60-м суткам) и иммунобиологические процессы. [103].
Экстракт лапчатки кустарниковой (Potentilla fruticosa) увеличивал среднюю продолжительность жизни (СПЖ) облученных дозой 7 Гр крыс на 32-40%, повышал выживаемость животных в 2,7 раза. При использовании лапчатки гусиной (Potentilla anserina L.) СПЖ достоверно увеличивалась на 28,15%о, выживаемость возрастала в 2 раза. При использовании препарата пихты сибирской (Abies sibirica) до и после облучения дозой 7.5 Гр, выживаемость крыс составила 37%о при абсолютной летальности в контроле [148]. Предполагается, что противолучевое действие растений заключалось в высоком содержании в них биофлавоноидов, а также других природных веществ, обладающих высокой антиоксидантной активностью, что
29 проявилось выраженным иммуностимулирующим и гемостимулирующим действием.
Л.А. Русяевым и В.А. Федоровичем (2001) проведено исследование влияния препарата из плодов облепихи на облученный организм. Препарат включали в стандартный рацион питания из расчета 125 мг/кг массы тела крыс ежедневно в течение 30 дней до или после облучения. Установлено, что применение препарата облепихи после облучения способствовало нормализации деятельности сердечно-сосудистой системы и механизмов ее экстракардиальной регуляции.
Фитосиропы, состоящие из натуральных плодов, ягод, лекарственных пищевых растений, высококомплементарны к биоструктурам организма человека и существенно повышали адаптацию природных защитных систем. Лечебное применение фитосиропа, созданного на основе флавоноидов облепихи, смородины и крапивы, улучшало общее состояние больных лучевой болезнью, показатели периферической крови, вызывало благоприятный иммуномодулирующий эффект [154].
Препарат «Ткис - Нобати», получаемый из растительного сырья, содержащий комплекс танинов, липидов, хлорофиллов, ненасыщенные жирные кислоты, применялся с целью реабилитации больных, подвергающихся воздействию вредных факторов среды, в частности, для ликвидаторов последствий аварии на Чернобыльской АЭС. Препарат повышал работоспособность организма, улучшал структуру кровеносных сосудов, способствовал выводу токсичных веществ [130].
Однако, не у всех растений, обладающих благоприятным влиянием на резистентность животных изучены противолучевые свойства. К их числу относятся кипрей узколистный (Chamaenerion angustifolium) и звездчатка средняя (Stellaria media).
Ch. angustifolium в своем составе содержит дубильные вещества (10-20%), алкалоиды неизученного строения (до 0,1%), флавоноиды (кверцетин и кемпферол), слизь (до 15%>), витамин С и др. В цветах идентифицированы
флавоноиды, танины, фитогемагглютенины, микроэлементы (медь, цинк,
марганец). Из соцветий кипрея узколистного получен новый препарат
ханерол, испытываемый в клиниках как высокоактивное противоопухолевое
средство. Среди флавоноидов нашли гиперозид, положительно влияющий на
работу сердца. В опытах на животных, проводимых фармакологами,
установлено седативное и противосудорожное действие отвара растения,
сходное с влиянием аминазина. Свежий чай из листьев растения является
хорошим противовоспалительным средством, оказывает благотворное
действие при язвенной болезни, воспалительных явлениях и боли,
нормализует деятельность кишечника. Применяется как
противовоспалительное средство при гастритах, колитах. Улучшает процесс кроветворения и повышает защитные функции организма [104].
St. media применяется в свежем виде и в виде сока. Химический состав изучен недостаточно. Однако известно, что растение содержит витамины. Количество витамина С в зеленых частях растения достигает 65%, каротина -более 23%. Прием растения улучшает сердечную деятельность, уменьшает и снимает болевые ощущения, размягчает и рассасывает опухоли, останавливает кровотечения и заживляет гнойные раны. Растение обладает также противоцинготным, противовоспалительным и антисептическим действием. Настой или сок травы применяют при болезнях печени и легких, грудных болях, кровохарканьи, кровавой рвоте, зобе. Считают, что капли настоя травы помогают при начальных стадиях помутнения роговой оболочки глаз [73].
1.3. Заключение по обзору литературы
В последние годы накапливается все больше фактов о противолучевых свойствах веществ природного происхождения с разнообразными фармакологическими свойствами (гемо- и иммуностимулирующими, адаптогенными, антиоксидантными, антимутагенными, витаминными и др.).
Из анализа литературных данных видно, что проведено большое число исследований препаратов растительного и животного происхождения, имеющих схожие гемо- и радиомодифицирующие свойства.
Главными преимуществами растительных препаратов в качестве противолучевых средств являются эффективность, отсутствие побочных эффектов при введении в организм, доступность сырьевой базы, возможность группового перорального способа применения. Биологически активные вещества, входящие в состав растений, обладают бактерицидными, болеутоляющими, дубильными свойствами, способны стимулировать кроветворение.
Результаты, полученные многими авторами на различных животных, указывают на необходимость и перспективность дальнейшего более углубленного изучения противолучевой эффективности и разработки оптимальных условий применения препаратов растительного происхождения в качестве средств лечения ОЛБ.
Исходя из данных литературы о химическом составе растений и их положительному влиянию на течение патологий нерадиационного характера, растения St. media и Ch. angustifolium перспективны для исследования в качестве противолучевых средств.
В связи с этим, целью наших исследований являлось изучение возможности применения растений Ch. angustifolium и St. media для терапии острой лучевой болезни.
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Материалы
3.1.1. Животные
В экспериментах использовано 6 овец породы прекос массой 20-25 кг, 5 свиней породы белая крупная массой 15-20 кг, 9 кроликов породы шиншилла массой 3-4 кг, 125 белых крыс линии Вистар массой 180-220 г, 703 белых беспородных мышей массой 20-22 г, 79 белых мышей линии Balb/C массой 20-22 г и 20 цыплят СВМБ породы белый леггорн 28-дневного возраста массой 250-300 г. Кормление животных осуществляли по рационам, установленным во ВНИИВВиМ. Перед началом экспериментов животных выдерживали на карантине в течение 14 дней. Отбор животных проводили без учета половых различий.
3.1.2. Препараты растительного и животного происхождения
С целью приготовления экстракта Ch. angustifolium заготавливали листья и цветки растения во время цветения (июнь - июль), подвяливали их в течение одних суток, скручивали ладонями, пока не выступит сок, затем раскладывали на противень, накрывали мокрой тканью, выдерживали 6-10 ч при температуре 25С (в это время происходил процесс ферментизации) и сушили 40 мин в духовке при температуре 100С. Хранили сырье в стеклянной таре в темном месте при комнатной температуре. Отвар Ch. angustifolium готовили на каждый прием из высушенных соцветий растения путем экстракции 2 г в 100 мл воды при 100С в течение 20 мин.
Лекарственным сырьем в растении St. media является наземная часть. Собирали растение в осеннее время года. Сок St. media получали на бытовой соковыжималке типа СВА - 2. Сок осветляли центрифугированием при 15 тыс. об/мин в течение 30 мин при температуре 4-10С, сок разливали по 300 мл во флаконы объемом 500 см, хранили замороженным в стеклянной таре при минус 20-40С.
Животным растительные препараты в виде сока и экстракта задавали перорально с помощью зонда или автопоилок.
Нами по технологии Зенкина С.А. (2001) в стерильных условиях получен препарат из тканей облученных овец и свиней — селезенки, печени, сыворотки крови, а также тканей легких (СПСЛ), который нормировали по белку с концентрацией 10 мг/мл и применяли для сравнительной оценки противолучевого действия растительных средств.
3.2. Методы
Внешнее гамма-облучение овец, свиней и кроликов в дозе 5,4 Гр осуществляли на установке ГУС-4000, заряженной Cs-137, при мощности излучения 1,4 Гр/час. Равномерность облучения животных достигалась путем возвратно-поступательного движения тележки, на которой находились животные. Внешнее общее у- облучение мышей и крыс в кассетах осуществляли на той же установке, в дозах от 7,2 до 10,8 Гр, при мощности дозы излучения 1,8 Гр/ч и при равномерности поля облучения животных ±10%.
Определение антиоксидантной активности веществ растительного происхождения производили амперометрическим способом по Яшину А.И. и др. (2003) в научно - производственном объединении «Химавтоматика», г. Москва [138].
Безвредность сока St. media, экстракта Ch. angustifolium и препарата СПСЛ изучали при пероральном, внутрижелудочном, подкожном введении.
Противолучевую эффективность полученных веществ оценивали по тесту 30-тидневной выживаемости облученных животных, показателю ЛДбо/зо, рассчитанного по методу Личфилда и Уилкоксона [13], фактору уменьшения дозы (ФУД) [114].
Состояние экспериментальных животных изучали по комплексу клинико-гематологических, иммунологических и физиологических показателей.
Клинико-гематологические исследования мышей проводили до начала радиационного воздействия и затем на 5-, 7-, 9-е сутки после него по общепринятым методикам [99, 120]. Динамику показателей венозной крови крыс линии Вистар изучали через 24 суток после 1 -го облучения дозой 7,2 Гр и на 5-е, 10-е и 14-е сутки после повторного облучения в дозе 10,8 Гр. Исследование изменения показателей крови у кроликов проводили до и после облучения в дозе 5,4 Гр - на 5-, 10-, 14-, 20- и 30-е сутки. Общее состояние животных изучали по отношению к корму, состоянию слизистых оболочек, шерстного покрова. В венозной крови определяли общее количество лейкоцитов, тромбоцитов, эритроцитов, лейкоцитарную формулу.
Определение опсонофагоцитарной активности нейтрофилов (ОФР) осуществляли согласно Методическим рекомендациям по оценке иммунного статуса животных в условиях радионуклидного загрязнения (2003) и Методическим рекомендациям по исследованию иммунного статуса свиней, крупного рогатого скота и кур (1988).
В качестве объекта фагоцитоза использовали полистироловый латекс, (0,8-1,5 мкм), из которого готовили суспензию, содержащую 1,0-1,5-108 частиц/мл.
В пробирках смешивали равные объемы крови, стабилизированной гепарином или жидкостью Тюрка (0,2-0,5 мл) и суспензии латекса. Содержимое пробирок перемешивали, помещали в термостат (37С) и помешивали через каждые 10 мин. Через 30 мин, после последнего помешивания, пробирки извлекали из термостата и центрифугировали в течение 5 мин при 3000 об/мин. Половину надосадочной жидкости удалаляли, осадок клеток суспензировали и готовили мазки на предметных стеклах. Мазки высушивали, фиксировали метанолом и окрашивали по методу Романовского — Гимза. Готовые препараты исследовали с помощью светового микроскопа (увеличение х 900) под иммерсией.
35 Подсчитывали не менее 100 нейтрофилов, при этом учитывали количество фагоцитировавших и интактных клеток, а также количество фагоцитированных частиц. На основании подсчета рассчитывали:
- фагоцитарный индекс - относительное количество фагоцитирующих
нейтрофилов в %;
- фагоцитарное число - среднее количество частиц, поглощенных
одним нейтрофилом;
- фагоцитарную емкость - абсолютное количество частиц, поглощенное
нейтрофилами, содержащимися в 1 мл крови (расчет производили на
основании определения количества лейкоцитов, лейкоформулы и
абсолютного количества нейтрофилов).
Иммунотропные свойства растений изучали на модели сока St.media. Цыплят 1-, 2- и 3-й группы заражали вирусом болезни Гамборо (ВБГ) интраназально (штамм 52/70), а на 4-е сутки после заражения вакцинировали против болезни Ньюкасла (БН) вакциной Ла-Сота. Цыплятам 2-й группы, в течение 6 дней, начиная со дня вакцинации, внутримышечно вводили В-активин (серия 2, Покровский завод биопрепаратов) в разовой дозе 500 мкг. Цыплята 3-й группы в качестве иммуностимулятора получали сок St. media перорально в разовой объемной дозе 0,5 мл ежедневно в течение 10 дней, начиная со дня вакцинации против БН. Цыплята 4-й группы были подвергнуты только вакцинации. На 14 сутки после вакцинации у всех цыплят была взята кровь, получена сыворотка и исследована на количество IgG методом радиальной иммунодиффузии и титров антител к ВБГ и ВБН по методу РТГА [127, 128].
Количество ядросодержащих клеток селезенки мышей определяли по методикам П. Дерфлинга и 3. Вихнера (1987).
Животных убивали путем декапитации. По белой линии живота делали поверхностный разрез кожи и отодвигали шкурку в стороны от разреза по направлению к конечностям. После вскрытия брюшной полости селезенку стерильно извлекали и помещали в охлажденную до 4С среду Игла налитую
36 в чашку Петри, диаметром 12 см, установленной на горизонтальной плоскости льда. На каждую селезенку расходовали 5 мл среды Игла. Селезенку измельчали в тефлоновом гомогенезаторе. Клеточную суспензию набирали в 10 мл шприц (игла №16). При этом большие скопления клеток остаются, а малые распадаются при прохождении через узкую иглу. Определение количества и жизнеспособности клеток проводили окрашиванием трипановым синим. Подсчет клеток производили в камере Горяева, с учетом разведения и общего объема суспензии рассчитывали число клеток, находящихся в селезенке.
Содержание ядросодержащих клеток в бедренной кости определяли с помощью методик И. Лефковитса, Б. Перниса (1988).
Мышей убивали декапитацией и немедленно ополаскивали в 70% этаноле. Удаляли кожу с задней части животного, в том числе с обеих лапок. Для отделения мышц от кости через бедренную мышцу проталкивали два широких пинцета так, чтобы брашни охватывали бедренную кость. Затем их осторожно двигали вверх и вниз на полную длину, отделяя от мышц. После пинцеты поворачивали, разрушая сочленения между бедренной и большеберцовой костью, а бедренную кость вытаскивали наружу и очищали. Обнаженную кость разрезали чуть ниже прикрепления к тазу и переносили в чашку Петри, содержащую охлажденную во льду среду Игла. Затем брали стерильным пинцетом за середину кости и содержимое костномозговой полости тщательно промывали 2 мл среды Игла шприцом 2 мл (иглой №25). Число ядеросодержащих клеток (клеточность) определяли подсчетом в растворе Тюрка в камере Горяева с учетом разведения и общего объема суспензии.
Оценку образования селезеночных эндоколоний проводили по методу Тилла с соавторами [253].
Белым мышам линии Bulb/C подкожно вводили испытуемый препарат, через 1 сутки подвергали внешнему гамма-облучению 5,4 Гр. Спустя 10 суток у мышей подвергнутых декапитации, извлекали селезенку,
37 фиксировали в жидкости Корнуа в течение суток. Производили подсчет поверхностных колоний с помощью увеличительного стекла. Отношение количества образовавшихся колоний у мышей, которым вводили препарат, к количеству колоний у контрольных животных является индексом колониеобразования. Достоверно значимым считали индекс не менее 1,6.
Оценку физиологического состояния выживших после облучения
животных осуществляли с использованием дополнительных
функциональных нагрузок гипоксией и плаванием. Психо-эмоциональную активность выживших после облучения крыс, исследовали с помощью ориентировочного рефлекса [180].
Для оценки состояния защитных сил организма и активности исследуемых растительных препаратов использовали метод гипоксической гиперкапнии.
Каждое животное помещали в отдельную стеклянную камеру, герметизировали притиранием крышки с использованием вазелина. При развитии картины асфиксии (положение на спине, клонические судороги, саккодированное дыхание или отсутствие дыхательных движений) фиксировали время, а животных освобождали. Для оценки влияния препаратов на процессы адаптации к недостатку кислорода состояние гипоксии повторяли дважды, через 3 и 24 часа после первого.
Для оценки динамической выносливости облученных мышей использовали методику плавания мышей с грузом в 5% от массы тела.
Стеклянный сосуд вместимостью 30 л заполняли дистиллированной водой, имеющей температуру 20±0,5С. Экспериментальным животным в области корня хвоста прикрепляли свинцовое кольцо, масса которого составляла 5% от массы тела. Одновременно по одному животному из контрольной и подопытной групп помещали в сосуд с водой и визуально по секундомеру фиксировали продолжительность плавания до полного утомления. Момент физического утомления регистрировали в том случае,
38 если мышь опускалась на дно сосуда и не могла самостоятельно подняться в течение 5 секунд.
Для изучения состояния выживших после облучения крыс ,использовали нагрузки дополнительным облучением (до 4-х раз).
С целью изучения ориентировочного рефлекса, каждое животное помещали в центр белой прямоугольной площадки площадью 3600 см2 с 16-ю равноудаленными друг от друга отверстиями. В течение 5 минут визуально фиксировали количество заглядываний в отверстия - в «норки» (голова крысы полностью скрывалась в отверстии), а также динамику появления спонтанной поведенческой реакции. Полученные величины поведенческой активности (ПА) усредняли и сравнивали показатели в опытных группах (ПА0) с контрольными (ПАК), оценивая по формуле: ПА = ПА0/ ПАкхЮ0%.
Статистическую обработку цифровых данных экспериментов проводили общепринятыми методами вариационной статистики с помощью критерия Стьюдента и с применением пакета прикладных программ Microsoft Excel (2000).
Отдельные детали схем и методических приемов при постановке опытов на животных дополнительно изложены в соответствующих разделах диссертации.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Влияние экстракта Chamaenerion angustifolium на интактных и облученных животных
4.1.1. Интактные животные
4.1.1.1. Общее состояние, безвредность
Оценка безвредности экстракта Ch. angustifolium проведена на 40
белых беспородных мышах массой 20-22 г, разделенных по принципу
аналогов с учетом массы тела, общего состояния на 4 группы, по 10 голов в
каждой (табл. 1). Мышам 1-й группы в течение 10 суток вводили водный
экстракт растения с помощью зонда ежедневно внутрижелудочно (в/ж) по 0,1
мл в течение 10 суток. Животным 2-й группы препарат задавали в те же
сроки с помощью автопоилки. Мыши 3-й 4-й группы служили контролем
для первых двух групп и получали водопроводную воду по 0,1 мл ежедневно
в течение 10 суток внутрижелудочно и из автопоилки соответственно.
Наблюдали за животными в течение 10 суток.
Таблица 1 Влияние перорального введения экстракта Ch. angustifolium на
выживаемость мышей
Как видно из табл. 1, в течение срока наблюдения, из 10-и мышей не погибло ни одно животное. У подопытных животных 1- и 2-ой групп не было отмечено отклонений в общем состоянии, они выглядели клинически здоровыми, не проявляли признаков беспокойства. Состояние шерстного и кожного покрова, слизистых оболочек, характера реакции на звуковые,
40 световые, болевые раздражители, частота и характер дыхания, находились в пределах физиологической нормы, и были сопоставимы с данными контрольных групп.
4.1.1.2. Показатели белой крови и клеточности органов
кроветворения
Опыты проведены на 43-х беспородных белых мышах массой 20-22 г обоего пола, разделенных на аналогичные группы. Экстракт Ch. angustifolium вводили из автопоилок подопытным животным 2-, 3- и 4-й групп соответственно в течение 4, 6 и 8 суток. На 5-, 7-й 9-е сутки мышей убивали декапитацией по 5-10 животных из группы. Контролем служили мыши 1-й группы, не подвергавшиеся воздействию препарата, их убивали до начала эксперимента и одновременно с подопытными по 3 мыши на каждый срок. У всех животных исследовали общее число лейкоцитов, клеточность костного мозга и селезенки (табл. 2).
В связи с тем, что показатели контрольных животных, убитых в разные сроки, существенно между собой не различались, сочли возможным объединить их в одну группу, с которой и сопоставляли данные подопытных групп.
Таблица 2 Показатели общего числа лейкоцитов венозной крови, клеточности костного мозга и селезенки интактных мышей при применении экстракта Ch.
angustifolium
Примечание: * р<0,05 в сравнении с контролем (1-я группа)
Из материалов табл. 2 видно, что у мышей подопытных групп, по сравнению с контролем (1-я группа), происходило увеличение общего числа лейкоцитов на всех сроках исследования, с достоверным различием в 4-й группе. Клеточность костного мозга достоверно повышалась после 4-х и 8-й суток применения экстракта Ch. angustifolium. Показатели клеточности селезенки не имели достоверных различий по отношению к контрольной группе, однако наблюдалась тенденция к повышению показателей через 6 и 8 суток после применения препарата.
Лейкоформула крови животных, получавших экстракт Ch.
angustifolium, приведена в табл. 3.
Процент лимфоцитов во 2-й, 3-й и 4-й группах по отношению к контролю существенно не изменялся. Отмечено недостоверное увеличение процентного содержания лимфоцитов у мышей 4-й группы по сравнению с животными, не получавшими экстракт. Среди других показателей лейкоформулы обращал на себя внимание повышенный уровень эозинофилов (р<0,05) и появление клеток Тюрка у животных 3-й группы. Значения нейтрофилов находились в пределах исходного уровня.
4.1.1.3. Фагоцитарная способность нейтрофилов
Данные о влиянии препарата из Ch. angustifolium на фагоцитарную способность нейтрофилов интактных мышей приведены в табл. 4.
Как видно из материалов табл. 4, фагоцитарный индекс у животных 4-й группы по сравнению с 1-й контрольной группой был достоверно выше. Показатели фагоцитарного индекса и фагоцитарной емкости у подопытных мышей от контрольного уровня существенно не отличались.
Таким образом, экстракт Ch. angustifolium положительно влиял на показатели кроветворения интактных животных, повышая общее число лейкоцитов и процентное содержание лимфоцитов, фагоцитарный индекс после 8-й суток, клеточность костного мозга после 4-х и 6-й суток применения.
Таблица З Лейкоформула интактных мышей после применения экстракта Ch. angustifolium
*р<0,05 в сравнении с контролем
Таблица 4 Показатели опсонофагоцитарной реакции нейтрофилов интактных мышей после применения экстракта Ch.angustifolium
* р<0,05 в сравнении с контролем;
4.1.2. Облученные животные
4.1.2.1. Общее состояние, выживаемость
При облучении 90 белых беспородных мышей массой 20-22 г и 35 крыс линии Вистар массой 180-200 г в дозе 5,4 Гр возникала легкая степень острой лучевой болезни. Первичная реакция на облучение проявлялась в виде общей слабости животных, латентный период болезни был продолжительным, клинические признаки не выражены, гибели животных не отмечалось.
Облучение беспородных белых мышей и крыс линии Вистар в дозах, вызывающих лучевую болезнь тяжелой степени (7,2 Гр), в начальный период после облучения (2-3 дня) приводило к угнетению общего состояния: вялости, пониженному потреблению корма. Затем на 8-10-е сутки после облучения (фаза кажущегося благополучия) они выглядели клинически здоровыми. В третий период лучевой болезни (12-18 сутки после облучения) у животных проявлялся весь симптомокомплекс острой лучевой болезни: отсутствие аппетита, пониженная двигательная активность, гиперемия видимых слизистых оболочек, отечность в области шеи, взъерошенность шерстных покровов, иногда наблюдали самопогрызание. Перед гибелью животные отказывались от корма, были малоподвижны, не реагировали на внешние раздражители. При патологоанатомическом вскрытии погибших животных обнаруживали признаки геморрагического синдрома: гиперемию
44 сосудов внутренних органов, точечные кровоизлияния на слизистой кишечника, печени, полосчатые кровоизлияния на плевре и почках. Брыжеечные лимфоузлы были темно-вишневого цвета, увеличены в размере.
Период восстановления лучевой болезни (18-30 сутки после облучения) характеризовался постепенной нормализацией состояния организма. Происходило восстановление кожных и шерстных покровов, животные охотно принимали корм, активно реагировали на внешние раздражители.
При облучении в дозах, вызывающих лучевую болезнь крайне тяжелой степени (9,0-10,8 Гр), у мышей и крыс начальный период ОЛБ был укорочен, фаза кажущегося благополучия у некоторых животных отсутствовала и сразу переходила в стадию выраженных клинических проявлений. В течение 30 суток погибало до 100% животных. При вскрытии павших животных наблюдали геморрагические поражения внутренних органов и слизистых оболочек.
Для оценки противолучевого действия препарата из растения Ch. angustifolium при острой лучевой болезни его водный экстракт вводили мышам и крысам перорально из автопоилок в течение 4 и 8 суток после у-облучения. В каждой группе использовали по 4-10 животных, наблюдение за ними проводили в течение 30-ти суток (табл. 5). После применения экстракта Ch. angustifolium в течение 4-х суток из 5-й мышей, облученных в дозе 7,2 Гр, погибла одна, а в контроле из 5-й - три мыши. Облучение в дозе 9,0 Гр приводило к смертельным исходам соответственно 5 и 4 из 10 мышей, леченных 4 и 8 суток при гибели 7 из 10 животных контрольной группы.
Облучение крыс в дозе 7,2 Гр вызывало гибель 6 из 20 животных в группе контроля, в подопытной группе выжили все крысы, взятые в опыт.
Таким образом, наиболее высокая противолучевая эффективность экстракта Ch. angustifolium установлена после его применения в течение 4-х и 8-й суток при облучении мышей в дозе 7,2 Гр.
По данным о выживаемости леченных животных рассчитаны
показатели ЛД5о/зо и ФУД (табл. 6).
Таблица 5 Выживаемость облученных мышей и крыс после применения
экстракта Ch.angustifolium
Таблица 6
Показатели ЛД5о/зо и ФУД мышей при у - облучении и лечении экстрактом
Ch. angustifolium
46 ЛД so/зо облученных мышей составила 9,0 Гр, у мышей, леченных экстрактом Ch. angustifolium 4 суток - 9,9 Гр (ФУД -1,1).У леченых 8 суток животных ЛД so/зо была выше - 10,2 Гр (ФУД -1,13). Фактор уменьшения дозы имел диапазон от 1,1 до 1,13, что свидетельствует о радиозащитных свойствах изучаемого экстракта.
4.1.2.2. Устойчивость животных к физической нагрузке и кислородной
недостаточности
Для изучения устойчивости мышей, выживших после облучения в дозах 7,2 и 9,0 Гр, к физической нагрузке, использовали плавание животных с грузом в 5% от массы тела. Оценивали продолжительность выдерживания нагрузки подопытными мышами по сравнению с контролем облучения и здоровыми мышами (табл. 7).
Таблица 7
Влияние экстракта Ch.angustifolium на выносливость мышей при физической
нагрузке через 30 суток после облучения
Из материалов табл. 7 видно, что облучение в дозах 7,2 и 9,0 Гр приводило к снижению продолжительности плавания выживших мышей. После введения экстракта Ch. angustifolium в течение 4 и 8 суток, выносливость облученных животных по сравнению с контролем повышалась, с достоверностью различий между 4-й и 2-й группой (р<0,05).
Гипоксию вызывали двукратным последовательным, через сутки,
помещением мышей в герметически закрытый сосуд. Дважды определяли
время развития асфиксии и, в заключении, среднюю продолжительность
жизни животных по сравнению с контролем (табл. 8).
Таблица 8 Влияние экстракта Ch. angustifolium на продолжительность жизни облученных мышей при гипоксической гиперкапнии через 30 суток
после облучения
Установлено, что по времени развития асфиксии подопытные мыши от контрольных существенно не отличались. На всех сроках исследования обращала на себя внимание тенденция к повышению устойчивости мышей к повторному воздействию гипоксией, наиболее выраженная во всех подопытных группах (за исключением 7-й группы). Однако достоверных различий между подопытными и контрольными группами не выявлено.
48 Таким образом, при использовании препарата из Ch. angustifolium отмечено увеличение выносливости облученных животных к физической нагрузке и тенденция к повышению устойчивости к воздействию гипоксии.
4.1.2.3. Показатели белой крови и клеточности
органов кроветворения
Изучение влияния экстракта Ch. angustifolium на изменения общего
числа лейкоцитов, лейкоцитарной формулы, клеточности костного мозга и
селезенки облученных мышей проведено на 70 животных обоего пола до
начала облучения, на 5-, 7- и 9-е сутки после введения препарата внутрь из
автопоилок. На каждый срок исследовано по 10 мышей (табл. 9).
Установлено, что с 5-х по 9-е сутки после у-облучения наблюдали
резко выраженную убыль клеток в радиочувствительных органах. По
сравнению с интактными животными, на 5-е сутки в контроле облучения
отмечено снижение общего числа лейкоцитов в 28,8 раз, в подопытной - в
5.8 раз. На всех сроках исследования, у животных, получавших экстракт,
общее количество лейкоцитов в венозной крови, клеточность костного мозга
и селезенки находились на достоверно более высоком уровне, и темп их
восстановления был существенно выше, чем у контрольно облученных
мышей.
Таблица 9 Показатели общего числа лейкоцитов венозной крови, клеточности костного мозга и селезенки облученных в дозе 9,0 Гр мышей после применения
экстракта Ch. angustifolium
* р<0,05 в сравнении с облученным контролем
Лейкоформула мышей, подвергнутых у- облучению в дозе 9,0 Гр и лечению экстрактом Ch. angustifolium, приведена в табл. 10.
Облучение мышей приводило к изменениям процентного содержания, как лимфоцитов, так и нейтрофилов. У мышей, леченных препаратом из Ch. angustifolium, процентное содержание лимфоцитов в крови снижалось в меньшей степени, чем в контроле облучения, с достоверностью различия между подопытными и контрольными группами на 7-е и 9-е сутки исследования. В эти же сроки процентное содержание нейтрофилов исследования у подопытных животных было достоверно ниже, чем в контроле. Содержание моноцитов и эозинофилов существенно не изменялось.
Таблица 10 Лейкоформула облученных в дозе 9,0 Гр мышей при лечении экстрактом Ch. angustifolium
*р<0,05 в сравнении с контролем облучения;
51 4.1.2.4. Фагоцитарная способность нейтрофилов
Данные о фагоцитарной способности нейтрофилов мышей представлены в табл. 11.
Таблица 11 Влияние экстракта Ch. angistifolium на показатели опсонофагоцитарной реакции нейтрофилов облученных в дозе 9,0 Гр мышей
*р<0,05 в сравнении с контролем облучения;
У облученных животных, не получавших растительный экстракт, наблюдали снижение показателей фагоцитарного индекса, фагоцитарного числа и фагоцитарной емкости с 5-х по 9-е сутки. В подопытных группах фагоцитарный индекс и фагоцитарная емкость были достоверно выше контрольных показателей на всех сроках исследования. Фагоцитарное число у подопытных мышей по сравнению с контролем были повышены на 7 и 9-е сутки (р<0,05).
4.2. Влияние сока Stellaria media на интактных и облученных
животных
4.2.1. Интактные животные
4.2.1.1. Общее состояние, безвредность
Оценку безвредности сока проводили на 70 белых беспородных мышах
массой 20-22 г, разделенных по принципу аналогов на 7 групп, по 10
животных в каждой. Осветленный сок растения St. media вводили в течение
4-х суток животным внутрижелудочно (с помощью зонда) и
внутрибрюшинно в дозах от 0,1 до 1,5 мл/мышь (табл. 12). В качестве
контроля интактным животным вводили воду. Наблюдение за животными
осуществляли в течение 10 суток.
Таблица 12 Влияние сока St. media на мышей при пероральном и внутрибрюшинном
введении
При внутрибрюшинном введении 0,1 мл сока St. media выжило 8 мышей из 10-и, при введении 0,5 мл препарата из 10-и погибли 4 мыши, а введение 1,0 мл препарата привело к гибели всех мышей, взятых в опыт.
Внутрижелудочное введение мышам через зонд сока St. media в дозах от ОД до 1,5 мл не вызывало их гибели.
Изучение безвредности осветленного сока при пероральном введении было проведено на 20 белых беспородных мышах массой 20-22 г,
