Введение к работе
Актуальность темы. Содержание и биологическая активность вторичных метаболитов изучены только в 6-7% растений, населяющих сушу (Samuelson G., 1989). В мировой практике около 45% всех лекарственных средств получают из растительного сырья (Берашви-ли Д. Т., 1988). При этом уже известные лекарственные растения продолжают глубже изучаться, ведется поиск новых, что связано с общемировой тенденцией роста цен на лекарственные препараты (Bruhn J.G., 1989). Поэтому с новой остротой встает вопрос о поиске растительных средств для нужд ветеринарии и медицины.
В настоящее время уделяется значительное внимание поиску средств, оказывающих влияние на морфо-функциональную деятельность слизистой желудка животных. Это обстоятельство- связано с широко распространенными качественными и количественными нарушениями желудочной секреции. Изучение влияния растительных препаратов на кислото- и пепсиновыделительную деятельность слизистой желудка связано с отсутствием синтетических препаратов, нормализующих функциональную деятельность желудочных желез, с одновременным регенераторным действием и отсуствием побочного эффекта. Единственными средствами такого плана остаются лекарственные растения, широко применяемые в народной медицине и ветеринарии, в частности, - различные виды крапивы (Лебедев В.В., 1978).
Актуальность изучения видов крапивы, произрастающих на территории Бурятии, связана с потерей сырьевых баз союзных республик и истощением запасов в оставшихся районах заготовки.
Листья крапивы двудомной применяются в официнальной медицине и ветеринарии в качестве гемокоагулирующего и профилактического средства при кровотечениях различной этиологии (Государственная фармакопея СССР, 1990; Липницкий С.С. с соавт., 1987, Машковский М.Д., 1993; Рабинович М.И., 1987), что обусловлено влиянием витамина К. Для оценки доброкачественности сырья крапивы проводится только качественный анализ на наличие витамина К, корреляция которого с биологической активностью не всегда однознач-
на. Так, в последние годы выявлено, что крапива двудомная обладает антиаллергическими, противоопухолевыми, адаптогенными, иммуностимулирующими свойствами, нормализует основной, липидный, углеводный обмен, улучшает физиологическое состояние организма, оказывает протекторное действие при облучениях (Конопля А.И. с соавт.,1988, Меньшикова Н.Л. с соавт., 1987, 1989; Рабинович ММ., 1990; Ратахина Л.В. с соавт., 1989, 1990, 1993} , что не может быть объяснено влиянием витамина К. Следовательно, целесообразность поиска других действующих начал, разработка методов оценки сырья крапивы и фитопрепаратов по веществам, определяющим ту или иную биологическую активность, актуальна.
Цель и задачи исследования. Целью работы являлось изучение влияния препаратов крапивы на морфо-функциональную деятельность слизистой желудка, В связи с этим мы поставили следующие задачи исследования:
-
Провести определение, сбор различных видов крапив Бурятии.
-
Провести фитохимическое изучение сырья крапивы и фитопрепаратов на содержание суммы органических кислот, витаминов, способствующих гемокоагуляции.
-
Исследовать влияние настоев различных видов крапивы на секреторно-ферментативную деятельность слизистой желудка кроликов.
-
Изучить влияние препаратов крапивы на функциональную деятельность желудка здоровых белых крыс.
-
Исследовать влияние наиболее перспективного фнтоэкстрак-ционного препарата на течение экспериментального гипоацидного гастрита у белых крыс.
-
Провести гистоморфологическое исследование фундальных желез желудка белых крыс с экспериментальным гипоацидным гастритом, определив степень воздействия изучаемого препарата на морфологическую структуру клеток.
-
Исследовать гемокоагулирующую активность препаратов крапивы.
Научная новизна. Впервые изучена стимулирующая секрецию желудочного сока активность препаратов крапивы на здоровых животных и животных с экспериментальным гипоацидным гастритом. Показано, что препараты - настои и сухие экстракты крапивы двудомной и крапивы коноплевой стимулируют секрецию, кислотность: общую, свободную, связанную, переваривающую силу желудочного сока кроликов и белых крыс, повышают функциональную активность слизистой желудка крыс и способствуют регенерации его фундальных желез при экспериментальном гипоацидном і астрите. Фитохимичес-
кий анализ крапивы двудомной, узколистной, коноплевой, жгучей показал, что наибольшее содержание суммы органических кислот в пересчете на малат, стимулирующих метаболизм гландулоцитов фун-дальных-желез, было в стеблях и траве крапивы коноплевой и крапивы двудомной в периоды конца бутонизации - начала цветения и цветения. Все местные виды содержат в достаточном количестве витамины, способствующие гемокоагуляции.
Теоретическая значимость и практическая ценность работы. Надземная часть крапивы двудомной и крапивы коноплевой, собранных в период цветения на территории Бурятии могут служить дополнительным источником сырья для получения препаратов, стимулирующих секрецию желудочного сока. Препараты этих видов - настои и сухие экстракты могут применяться при заболеваниях желудка, сопровождающихся снижением кислотности: общей, свободной, связанной, и переваривающей силы желудочного сока, а также в качестве профилактического средства для стимуляции пищеварения. Также препараты крапивы, приготовленные на основе местного сырья, могут применяться в качестве гемокоагулирующего средства.
Внедрение результатов полученных исследований. На основании данных, полученных в комплексных исследованиях по изучению влияния препаратов крапивы на морфо-функциональное состояние слизистой желудка, по линии Бурятского Центра научно-технической информации опубликованы информационные листки: N55-95 «Методика количественного определения суммы органических кислот в пересчете на малат в траве крапивы» (1995); N56-95 «Методика зондирования кроликов» (1995); N59-95 «Влияние препарата крапивы коноплевой на восстановление функциональной активности слизистой желудка» (1995).
Основные положения, выносимые на защиту.
-
Качественный и количественный фитохимический анализ аптечных брикетированных крапивы двудомной, различных видов крапив, произрастающих на территории Бурятии - крапивы двудомной, крапивы коноплевой, крапивы узколистной, крапивы жгучей. Содержание суммы органических кислот в пересчете на малат в различных видах крапивы. Динамика их накопления в вегетативных частях изучаемых видов крапивы. Содержание суммы органических кислот в сухих фитоэкстракционных препаратах. Содержание витаминов, способствующих гемокоагуляции.
-
Особенности влияния фитопрепаратов наиболее перспективных видов крапивы на базальную секрецию желудочных желез кроликов и белых крыс.
-
Биологическая активность сухого фитоэкстракционного препа-
рата крапивы коноплевой при экспериментальном гипоацидном гастрите: влияние на функциональную деятельность слизистой желудка, морфологическую структуру эпителиоцитов, гландулоцитов фундаль-ных желез.
4. Гемокоагулирующая активность препаратов крапивы.
Апробация работы. Материалы исследования и основные положения работы были доложены на научных конференциях факультета ветеринарной медицины Бурятской государственной сельскохозяйственной академии (Улан-Удэ, 1992, 1993, 1994, 1995), на IV, V международных межвузовских научно-практических конференциях «Новые лекарственные препараты в ветеринарии» (Санкт-Петербург, 1992, 1993), на международной конференции «Актуальные проблемы в ветеринарии» (Барнаул, 1995).
Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 7 научных статей.
Объем диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, экспериментальные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения. Диссертация изложена на 131 страницах машинописного текста, включает 13 таблиц,. 8 рисунков, 5 диаграмм. Список литературы включает 208 источников, в том числе 40 на иностранных языках.
Материалом для исследования послужили брикетированные листья крапивы двудомной производства Красногорского завода по переработке растительного лекарственного сырья; виды, произрастающие на территории Бурятии: крапива двудомная - Urtica dioica L, крапива узколистная - Urtica angustitolia Fischer ex Horneman, крапива коноплевая - Urtica cannabina L, крапива жгучая - Urtica urens L, сухие фитоэкстракционные препараты травы крапивы двудомной, травы крапивы коноплевой, аптечных брикетированных листьев крапивы двудомной, приготовленные на основе разработанного нами способа получения. Виды определяли по региональным определителям (Флора Западной Сибири, 1930; Флора Сибири, 1992; Флора СССР, 1936: Флора Центральной Сибири, 1979). Качественное определение органических кислот в различных видах крапивы проводили, используя метод тонкослойной восходящей хроматографии на пластинке «Силу-фол» в системе растворителей 96% этанол - концентрированный аммиак (16:4.5) (Берашвили Д.Т., 1988; Зарипов У.М. и соавт., 1988,
Плешков Б.М., 1985). Содержание органических кислот, биофлавоно-идов, хлорофилл определяли качественно методом тонкослойной восходящей хроматографии на пластинке «Силуфол» в системе растворителей: хлороформ - этанол (8:2). Количественное определение содержания суммы органических кислот в пересчете на малат в различных видах крапивы проводили по модифицированной нами методике Бе-рашвили Д.Т. методом ионнообменной хроматографии на катионите КУ-2-8 (Николаева НА, Матафонов И.И.,1995); сорбционную емкость катионита - по общепринятой методике (Риман В., Уолтон Г., 1973).
Наличие витамина К1 изучали качественно методом восходящей тонкослойной хроматографии на пластинке «Силуфол» (Государственная фармакопея СССР, 1987). Количественное определение витамина А в форме провитамина А - В-каротина проводили по общепринятой методике (Ермаков А.И., 1972; Определение витаминов..., 1978; Плешков Б.М., 1985) с использованием спектрофотометра СФ-24. Содержание витамина С определяли методом титрования 2,6-дихлор-фенолиндофенолятом (Ермаков А.И., 1972; Плешков Б.М., 1985; Грин-кевич Н.И., Сафронич Л.Н., 1983). Качественное определение содержания флавоноидов проводили методом двумерной бумажной хроматографии в системах: 1 направление - БУВ (бутанол-уксусная кислота-вода 4:1:2) и 2 направление - уксусная кислота 15 % на хро-матографической бумаге марки «Ленинградская средняя» (Георгиевский В.П. с соавт., 1990, Клышев Л.К., 1978; Минаева В.Г., 1991).
Изучение биологической активности настоев и сухих фитоэкстрак-ционных препаратов, полученных с учетом выхода суммы органических кислот в пересчете на малат, проводили на 60 кроликах, 200 белых крысах, 60 белых мышах.
Для оценки влияния сухого экстракта крапивы коноплевой на восстановительные процессы поврежденных гландулоцитов, эпителио-цитов фундального отдела желудка использовалась экспериментальная модель гипоацидного гастрита, полученная путем перорального введения медицинской желчи однократно в объеме 0.5 мл/кг массы белым крысам.
Желудочный сок у кроликов получали зондированием по методике проф.Матафонова И.И., Николаевой Н.А.,(Матафонов И.И., Николае - ва Н.А., 1995) у белых крыс - в остром опыте с наложением лигатуры на пилорический отдел желудка по методике Shay Н. в модификации Meyer R.T. и соавторов (Андреева Н.И., Шарова С.А.,1978; Николаев СМ. с соавт., 1986; ShayH. et all, 1945). Центрифугировали
желудочное содержимое при 3000 об/мин. Общую, свободную, связанную кислотность определяли по Михаэлису методом титрования 0.1 NaOH, переваривающую силупоБоасу (Антонов В.Я., Блинов П.Н., 1974).
Влияние препаратов крапивы на содержание гемоглобина и скорость свертывания крови изучали используя гемоглобинометр Сали и тестДьюка (Балуда В.П. и соавт. 1980; Кудрявцев А.А., 1953).
Гистоморфологические исследования фундального отдела желудка белых крыс проводили с использованием общепринятых гистологических методов (Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1971; Лилли Р., 1969; Меркулов Г.А., 1969 ). Желудочную ткань фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина при температуре +4С с последующей заливкой в парафин (Давлетова Л.В. и соавт., 1986). Депарафиниро-ванные срезы окрашивали гематоксилин-зозином (Волкова О.В., Елецкий Ю.К., 1971; Меркулов Г.А., 1969).
Фотографирование микропрепаратов проводили с использованием микрофотонасадки МФ*Н-11, окуляр х 8, объектив х 10.
Данные, полученные в экспериментах, были обработаны маюма-тически в ВЦ БГСХАс использованием метрологического, дисперсионного, биометрического, корреляционного методов статистического анализа (Государственная фармакопея СССР, 1987; Доспехов Б.А.,1985; Плохинский Н.А., 1961), на IBM PC .