Содержание к диссертации
Введение
2.Обзор литературы с. 8
2.1. Распространение патологии печени у животных с. 8
2.2. Этиология с. 8
2.3. Классификация с. 9
2.4. Экспериментальное моделирование и патогенез с. 12
2.5. Диагностика с. 18
2.5.1. Клиническое обследование животных с. 19
2.5.2. Гематологичекое исследование крови .с. 20
2.5.3. Биохимические исследования сыворотки крови с. 21
2.5.4. Ультразвуковая диагностика с. 24
2.5.5. Лапароскопическая (эндоскопическая) диагностика с.25
2.5.6. Пункционная биопсия и морфологическое исследование биопсийного материала с. 25
2.6. Регенерация печени и ее стимуляция с. 27
2.6.1. Современные представления о регуляции восстановительного роста поврежденной паренхимы печени с. 28
2.6.2. Некоторые факторы, участвующие в регенерации печени с. 31
2.6.3. Методы восстановления биорегуляции и стимуляции репаративных процессов в паренхиме печени при лечении печеночной недостаточности с. 37
2.6.4. Другие виды применения плодных и неонатальных тканей с. 44
2.7. Заключение с. 46
3. Собственные исследования с. 48
3.1.Материалы и методы исследования с. 48
3.2. Результаты собственных исследований с. 59
3.2.1. Результаты изучения клинического состояния животных с. 59
3.2.1. Результаты гематологических исследований с. 62
3.2.2. Результаты биохимических исследований с. 84
3.2.3. Результаты лапароскопических исследований; с. 101
3.2.4. Результаты морфологических исследований с. 102
4. Обсуждение результатов исследований с. 119
5.Выводы с. 130
6.Предложения и рекомендации с. 132
7.Список использованной литературы с. 134
- Экспериментальное моделирование и патогенез
- Пункционная биопсия и морфологическое исследование биопсийного материала
- Методы восстановления биорегуляции и стимуляции репаративных процессов в паренхиме печени при лечении печеночной недостаточности
- Результаты изучения клинического состояния животных
Введение к работе
Актуальность работы. Несмотря на значительное внимание, уделяемое патологии печени в гуманной и в ветеринарной медицине в последние десятилетия, поиск новых методов стимуляции репаративных процессов в печени при различной патологии по-прежнему актуален. И если оперативному стимулированию репарации в гуманной медицине уделяется большое внимание, то в ветеринарной медицине как в отечественных, так и в зарубежных публикациях подобные методы мало описываются. Поэтому восполнить указанный пробел представляется крайне необходимым. Для лечения различных видов патологии некоторые авторы используют нативные ткани плодов. Данная методика получила название брефопластика (brephos - плод, plastic - формирую) (Беляев B.C., 1988). Так были получены данные о положительном влиянии плодных тканей при циррозе печени, но использование плодных тканей приводит к необходимости воздействия (как минимум терапевтического) на организм матери. Вместе с тем анализ литературы (Скалецкий Н.Н.,1999) показывает, что разница между печенью плодов в завершающий период беременности и печенью новорожденных животных незначительна. Поэтому изучение влияния печени новорожденных на патологически измененную печень будет весьма перспективно, так как при положительном эффекте ткани новорожденных животных можно будет получать в достаточно большом количестве без ущерба для здоровья матери, особенно если учесть, что подавляющая часть животных многоплодна. Это приобретает важное значение при внедрении методики в клиническую практику. Применение трансплантации тканей новорожденных животных по нашему мнению будет уместно называть -неонатопластикой (neonatus - новорожденный, plastic - формирую). Следует отметить отсутствие описания подобных исследований в доступной литературе.
Цель работы: Изучить влияние неонатопластики на течение экспериментального цирроза печени у крыс. Задачи исследования:
1. Разработать и апробировать в эксперименте методику визуальной малоинвазивной оценки состояния печени крыс в норме и при патологии.
2. Разработать и апробировать в эксперименте методику трансплантации печени новорожденных животных — неонатопластику.
3. Исследовать клинические, гематологические и биохимические показатели крови крыс в норме и при экспериментальной патологии печени под влиянием неонатопластики.
4. Исследовать патоморфологические изменения в печени крыс под влиянием неонатопластики.
Положения выносимые на защиту.
1. Методика визуальной малоинвазивной оценки состояния печени крыс в норме и при экспериментальной патологии печени.
2. Гематологические и биохимические показатели крови крыс в норме, при экспериментальной патологии печени и под влиянием неонатопластики.
3. Методика трансплантации печени новорожденных животных -неонатопластика.
Научная новизна. Впервые получены показатели биохимического, гематологического состава крови, пато рфологических изменений печени у здоровых крыс, при экспериментальной патологии и под влиянием неонатопластики, свидетельствующие о положительном влиянии трансплантации тканей новорожденных на течение экспериментального цирроза печени у крыс. После доработки неонатопластику можно внедрить в клиническую практику, для лечения животных с патологией печени.
Впервые проведена визуальная малоинвазивная оценка состояния печени при моделировании патологии посредством отоскопа фирмы Welch Allyin (США), модели № 20000 у крыс, а также получены факты, позволяющие использовать данную методику как в клинической практике, так и в научных исследованиях.
Научно - практическое значение полученных результатов. Научно-практическая ценность диссертации состоит в том, что полученные данные расширяют и дополняют имеющиеся сведения о закономерностях изменений биохимического, гематологического состава крови и морфологии печени крыс при экспериментальной патологии и под влиянием неонатопластики.
Материалы, полученные в ходе проведения научных исследований используются при проведении учебных занятий по теме «регенерация». Апробация работы:
Метод визуальной малоинвазивной оценки состояния печени и других органов брюшной полости у мелких животных массой до 1 кг применяется в лечебной деятельности ветеринарной клиники ООО «Лада-С» г. Люберцы Московской области.
Публикации: По теме диссертации опубликовано 2 работы в научных трудах МГАВМ и Б им. К.И. Скрябина.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 161 странице машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов. Список литературы включает 204 источников, в том числе 52 иностранных источника. Работа иллюстрирована 26 таблицами, 17 графиками, 33 рисунками.
Экспериментальное моделирование и патогенез
Подавляющая масса исследований по изучению патогенеза диффузных заболеваний печени проведена на экспериментальной модели поражения, вызываемого введением в организм четыреххлористого углерода (тетрахлорметанола) (Рубецкой Л.С, Короткина Р.Н., 1962; Саркисов Д.С., Ремезов П.И., 1960; Фишер А., 1961). Установлено, что четыреххлористый углерод является мембранотропным ядом, и его токсический эффект прежде всего связан с биотрансформацией ферментами микросом гепатоцитов и сопряжен с активацией перекисного окисления липидов (Владимиров Ю.А., Арчаков А. Н., 1972; Блюгер А. Ф., Майоре А. Я., 1978). Перекисная деградация мембранных фосфолипидов гепатоцитов сопровождается изменением структуры липидной матрицы мембран и нарушением обмена веществ внутри клетки (Блюгер А.Ф., Майоре А.Я., 1978; Губский Ю.И., 1984).
Поэтому некоторые исследователи утверждают . что жировая дистрофия гепатоцитов является одним из характерных признаков гепатотоксического действия четыреххлористого углерода и может служить показателем для оценки тяжести структурно-функциональных нарушений в паренхиме печени при поражении этим ядом (Шкурупий В.А. и др., 1973; Байматов В.Н, 1991). Кроме того, выяснено, что при токсическом циррозе в печени развиваются все виды белковой дистрофии: белковая, отражающая нарастающее набухание митохондрий; гидропическая - с просветлением цитоплазмы и расширением цистерн эндоплазматической сети; баллонная - обусловленная накоплением жидкости в гиалоплазме (Карташова О.Я. и др., 1982; Блюгер А. Ф. и др., 1989). При хроническом поражении печени крыс не только угнетается митотическая активность гепатоцитов, но изменяется их популяционный состав в печеночной ткани. По данным Сакута Г.А., Кудрявцева Б.Н. (1996), репаративный рост печени при затравке четыреххлористым углеродом в течение 6 месяцев приблизительно на 50% обеспечивался пролиферацией гепатоцитов, на 30% - полиплоидизацией клеток и на 20% - гипертрофией их цитоплазмы, тогда как в контроле те же варианты восстановительного роста печени составляли 69%, 31% и 0% соответственно. Тяжесть поражения печени в значительной степени определяется состоянием стромальных структур и микроциркуляторного русла, а также степенью нарушения ритмов их взаимодействия с паренхиматозными клетками (Попова И.В., 1974, 1975; Саркисов Д.С., 1977,1993).
Показано, что частота введения гепатотоксичных веществ выявляет высокую лабильность клеточных реакций стромы с формированием инфильтратов по ходу портальных трактов (скопления ретикулярных клеток, малых и средних лимфоцитов, сегментоядерных лейкоцитов, моноцитов, плазматических клеток, гистиоцитов, фибробластов). Присутствие в инфильтрате портальных трактов большого количества иммунокомпетентных клеток указывает на участие иммунной системы в формировании взаимоотношений между паренхиматозными и стромальными структурами печени при ее повреждении (Сукерник Р.И., 1971). Об активации местных иммунных реакций в печени при затравке животных тетрахлорметаном свидетельствует также увеличение сегментоядерных лейкоцитов. Накопление гранулоцитов в инфильтратах перипортальных трактов обусловлено не только некрозом гепатоцитов, но и появлением в зонах повреждения у-глобулина и комплемента, которые, как известно, обладают хемотаксическим действием на эти клетки (Попова И.В., 1975). По современным данным, в развитии цирротических изменений паренхимы печени немаловажную роль играют пептидные ростовые факторы и цитокины. Известна способность гепатоцитов мышей, подвергнутых хронической интоксикации терахлорметаном, образовывать и секретировать в среду (кровь) фактор, стимулирующий пролиферативную активность клеток мезенхимного происхождения (Сетков Н.А. и др., 1991). Экспрессия трансформирующего фактора роста - бета 1 (ТФР) является одной из предпосылок, а возможно и основной причиной токсического цирроза. Известно, что ТФР - бета 1 усиливает депонирование элементов внеклеточного матрикса в разных типах клеток (включая клетки Ито) и в синусоидах. С другой стороны, ТФР - бета 1 является ингибитором роста гепатоцитов, более того супрессором гена фактора роста гепатоцитов. Поэтому при хронических повреждениях печени повышенное количество ТФР - бета 1, ингибируя экспрессию фактора роста гепатоцитов, подавляет рост гепатоцитов и стимулирует накопление элементов внеклеточного матрикса. Все это приводит к изменению соотношения между паренхиматозными и соеденительнотканными элементами в пользу последних (Муслимов С.А., 2000). Появление в паренхиме толстых соединительнотканных прослоек обусловливает регенерацию гепатоцитов не в форме нормальных по строению долек, а в виде так называемых регенераторных гепатом, ложных долек, узлов-регенератов. Тяжи соединительной ткани препятствуют полноценной регенерации паренхимы, и она постепенно превращается в комплекс атипически построенных островков. (Рубецкой Л.С, 1961; Саркисов Д.С., Рубецкой Л.С., 1965; Блюгер А.Ф., Карташова О.Я., 1977; Popper Н., Schaffher F., 1961). В ряде работ показано, что в ложных дольках центральные вены располагаются эксцентрично или совсем незаметны (Вакулин Г.М., 1993). Склероз печеночных синусоидов, сопровождающий их капилляризацию, указывает на значительную перестройку сосудистой системы печени и является морфологическим маркером цирротической трансформации (Серов В.В., Лапиш К., 1989). В печени резко сокращается число функционирующих синусоидов, замедляется и извращается кровоток с включением шунтирующих сосудов, образующихся в соединительнотканных септах (Гранов А.И. и др., 1977; Вакулин Г.М., 1993). Нарушение микроциркуляции при циррозе печени ведет к функциональной недостаточности органа и портальной гипертензии, а она в свою очередь может привести к развитию асцита.
Пункционная биопсия и морфологическое исследование биопсийного материала
Большие компенсаторые возможности печени приводят к тому, что соответствующая клиническая симптоматика и нарушения функциональных показателей появляются лишь при далеко зашедших морфологических изменениях в органе. В связи с этим прижизненное морфологическое исследование печени часто служит методом ранней клинической диагностики. К важнейшим задачам морфологического исследования в гепатологии, относится установление характера гепатопатии, активности и тяжести поражения печени; контроль за динамикой течения и эффективностью терапии, а также диагностика системных заболеваний с поражением печени (Шишков В.П., Жаров А.В., 1973).
Выдающееся техническое усовершенствование иглы для пункции печени G. Mengini (1957), позволило выполнять манипуляцию «секундным методом» с малой травматичностью и без риска для больного.
Биопсия печени позволяет не только подтвердить или уточнить диагноз при диффузных паренхиматозных поражениях печени, но и нередко установить его. Пункционная биопсия показана, когда анамнез, непосредственное исследование, биохимические и иммунологические параметры и методы, позволяющие получить изображение печени, не позволяют прийти к достоверному диагнозу.
Слепая биопсия показана при диффузных, охватывающих всю печень морфологических изменениях. В случаях неоднородности поражения различных отделов печени показана биопсия под контролем лапароскопии. При очаговых процессах, при которых необходимо цитологическое исследование, производится прицельная биопсия тонкой иглой под контролем ультразвука. Пункционная биопсия является методом выбора при подозрении на активное прогрессирующее диффузное заболевание печени, особенно в начальной стадии. По данным Рорр Y.-P. (1993), достоверный диагноз при поражении печени у мелких животных можно поставить после биохимического исследования крови, ультразвукового исследования, эндоскопической диагностики и прицельной биопсии не менее чем из 3-х точек. 2.6. Регенерация печени и ее стимуляция. По современным представлениям регенерация печени является сложным и многокомпонентным процессом, участие в ней, как в нормальной, так и патологически измененной, принимают все структурные компоненты. Гепатоциты (около 90% массы печени и более 60% клеточной популяции), синусоидальные клетки (5-10% массы печени и приблизительно 35% всего клеточного состава), а также клетки соединительной ткани (фибробласты, тучные клетки) и ее внеклеточные стромальные структуры (1-5% массы органа) (Маянский Д.Н., 1988). Синусоидальные клетки представлены четырьмя основными разновидностями клеток: звездчатыми ретикуло-эндотелиоцитами - Купферовы клетки - 20-25%, эндотелиоцитами - 50-60%, липоцитами (предшественники фибробластов) -5% и pit-клетками - 5%. В составе пула синусоидальных клеток обнаруживается также до 20-25% лейкоцитов (Щеглов А.И., Мишнев О.Д., 1991).
Следует заметить, однако, что в печени некоторых здоровых взрослых животных-грызунов обнаружены не только высокодифференцированные гепатоциты, но и стволовые клетки, которые находятся в состоянии покоя (не более 5% по Сухих Г.Т., 1998). Эти клетки локализуются в каналах Геринга и только в экстремальных условиях при обширном повреждении печени способны дифференцироваться либо в гепатоциты, либо в клетки желчных ходов. Урываева И.В. и Фактор В.М. еще в 1988 году методом авторадиографии доказали возможность формирования новой паренхимы печени из стволовых клеток в условиях постепенной гибели гепатоцитов.
Все указанные типы клеток, принадлежащие к различным системам организма, постоянно взаимодействуют между собой и с гепатоцитами, составляя единую структурно-функциональную систему, которая обеспечивает гомеостаз печеночной дольки (координирует соотношение клеток различных популяций, их дифференцировку и пролиферацию) и подчинена выполнению сложной специализированной функции гепатоцитов в организме (Секамова СМ., Бекетова Т.П., 1989).
Именно поэтому в целостном организме функционирование печеночной ткани не ограничивается включением только тканевых (внутриклеточных и межклеточных) механизмов взаимодействия, но осуществляется с помощью медиаторов нервной, гормональной и иммунной систем, а также медиаторов межорганного взаимодействия (Арцимович Н.А. и др., 1991; Морозов В.Г., Хавинсон В.Х., 1996).
Методы восстановления биорегуляции и стимуляции репаративных процессов в паренхиме печени при лечении печеночной недостаточности
Среди методов, используемых для стимуляции репаративных процессов в паренхиме печени - медикаментозные средства остаются наиболее доступными для широкого применения. Были предложены и используются в клинической практике такие медикаментозные препараты, как: пиримидиновые производные (дигидротимин, тимин, метацил, пентоксил), гормоны (тироксин, преднизолон, пролактин, хориогонин, инсулин, глюкагон, соматотропный гормон, кортикостероиды, простагландины), препарат "регенератор", у - глобулин, АТФ, фосфолипиды типа эссенциале, фосфатидилхолина и др. (Карагюлян СР., Сванадзе Н.Л., 1985; Солопаев Б.П., 1990; Абакумова О.Ю. и др., 1996). Показано, что наиболее выраженной способностью стимулировать регенерацию печени в опытах с поражением четыреххлористым углеродом с обширными зонами некроза и дистрофии гепатоцитов обладали хориогонин, пентоксил и "регенератор"; в клинике применение хориогонина в комплексе с препаратом "регенератор" для лечения персистирующего гепатита у детей дало выраженный клинический эффект. По данным Косых А.А. (1992), хорионический гонадотропин способствует нормализации структуры печени путем нормализации взаимоотношения ее паренхиматозных и стромальных элементов за счет восстановления их деятельности.
В последнее время получены данные, свидетельствующие об эффективности использования регуляторных пептидов донорской печени и селезенки (в форме препарата Спленопид) для коррекции восстановительных процессов в поврежденной печени на стадиях развития патологии, когда еще не полностью разрушена система биорегуляции органа (Копатикова И. И., . 1999). 2.6.3.2. Оперативная стимуляция. Основным методом оперативной стимуляции репаративных процессов при циррозе печени на протяжении последних сорока лет остается частичная гепатэктомия. Данная операция проводится в разных вариантах отличающихся друг от друга долей резецированной паренхимы. В разных работах показано, что удаление различного количества печеночной ткани, от значительных - 50% паренхимы (Лиознер Л.Д. и др., 1963; Сидорова В.Ф. и др., 1966), до совсем небольших участков - 7 % органа (Моносзон Н.А., 1965) приводит к стимуляции восстановительных процессов в патологически измененной печени животных. Б.П. Солопаев и др. (1981) показали, что одним из основных компонентов лечебного действия резекции печени на ликвидацию цирроза . является усиление иммуннологическои реактивности организма вслед за операцией, идет усиление миграционной способности стволовых и кроветворных клеток. Положительный стимулирующий эффект с частичной обратимостью цирротических изменений получен в эксперименте и клинике при использовании электро- и термокоагуляции печени (Дунаевым П.В. и др., 1998; Алимовым В.А., 1969,1970). 2.6.3.3. Применение трансплантационных методик терапии. Трансплантация тканей как биологический метод стимуляции репаративной регенерации в последние годы получает все большее признание (Лебедева Ю.Н., 1996; Мамхегова Т.Р., 1998.; Репин B.C., 1998; Муслимов С.А.,2000). Анализ доступной литературы показывает условное разделение авторов по использованию материалов для трансплантации. Часть авторов (Мулдашев Э.Р., 1994; Нигматулин Р.Т., 1996; Муслимов С.А., 2000) рекомендует в качестве стимуляторов трансплантировать специальным способом консервированные аллотрансплантаты, представляющие собой фиброзные структуры свободные от клеток. Вышеуказанные авторы рекомендуют называть аллотрансплантаты биоматериалами.
В данный момент у нас в стране эти материалы производят под маркой «Аллоплант». В своих работах С. А. Муслимов (2000) показал эффективность внутрипеченочных инъекций суспензии диспергированного биоматериала Аллоплант (ДБМА) при экспериментальном циррозе печени у кроликов. Основным преимуществом данной методики авторы считают отсутствие антигенных свойств у данной группы трансплантатов, и как следствие, отсутствие тканевой реакции на их введение. В результате чего происходит их замещение новообразованной тканью по структуре идентичной структуре биоматериала. Другая часть, представленная значительно большим числом авторов, рекомендует использовать для трансплантации клеточные элементы, что позволяет увеличить массу действующей паренхимы в организме, так как возникающие нарушения регенерации связываются со снижением массы печени ниже критического уровня. Примером этого является внедрение в клиническую практику метода экстракорпоральной культивации донорских гепатоцитов в системах биоискусственной поддержки печени (БПП) - так называемой "гибридной печени" (Маргулис М.С. и др., 1987; Бельков А.В., Писаревский А. А., 1991; Базиева Ф.Х., 1992; Бельков А.В., 1992, Шиманко И.И., Мусселиус С.Г., 1993; Онищенко Н.А. и др., 1995) и метода трансплантации аллогенных донорских гепатоцитов (Matas A.J. et al., 1976; Gupta S. et al., 1992; Mito M., Kusano M., 1993; Habibullah C.-M. et al.,1994). Вероятно клинический эффект в этих наблюдениях связан со стимуляцией процессов репаративной регенерации в пораженной печени больных теми факторами регенерации, которые выделяют донорские гепатоциты в процессе культивации. В пользу этой точки зрения говорят многие факты.
Результаты изучения клинического состояния животных
Первым клиническим признаком патологии (животные опытных групп) было изменение фекалий, они становились менее оформленные и приобретали белесоватый цвет (в норме темно-серый). Изменение стула начинало регистрироваться через три месяца после начала затравки тетрахлорметаном. Однако эти явления не были постоянными и через некоторое время исчезали. Корреляции между введениями тетрахлорметана и появлением размягченных фекалий выявлено не было. По мере продолжения затравки эти явления нарастали и к шестому месяцу их отмечали у большинства животных. Начиная с пятого месяца у животных отмечалось ухудшение качества шерсти, она тускнела, редела и становилась более ломкая, хуже удерживалась в коже. В дальнейшем появлялись струпьевидные поражения кожи, локализовавшиеся преимущественно в области носа, за ушами, на затылке и в области холки. В связи с отсутствием выраженных признаков цирроза по истечении семи месяцев нами было увеличено количество вводимого тетрахлорметана до 1мл на кг массы тела. Через 3-6 дней после этого у 7 из 17 животных появилось порыжение кончиков шерсти преимущественно на голове и холке. У всех стало прогрессировать истощение. После прекращения введения тетрахлорметана и наблюдения за животными в течение 30 дней общее состояние можно охарактеризовать: в 1-ой интактной контрольной группе - без видимых изменений; во 2-ой опытной группе - продолжение ухудшения общего состояния, но менее прогрессирующими темпами, продолжали нарастать явления кахексии и ухудшение качества шерсти, однако новых поражений кожи за данный период отмечено не было, у некоторых животных наметилась тенденция к нормализации стула; в 3 - 4-ых опытных групп - некоторое улучшение общего состояния, с нормализацией стула, улучшение качества шерсти, заживление пораженных участков кожи.
Несмотря на отсутствие существенной разницы в общем состоянии между животными 3-ей и 4-ой опытных групп, процессы восстановления у животных 4-ой опытной группы были выражены в большей степени, а улучшение общего состояния происходило в более активной форме. 3.2.1.1. Результаты изучения динамики массы тела животных. В ходе проведения эксперимента взвешивание проводили 1-2 раза в неделю. Снижение прироста массы тела животных опытных групп (по сравнению с контрольными) нами зарегистрировано начиная с четвертого месяца затравки. К концу шестого и в течение седьмого месяца прирост массы тела чередовался со снижением, а к концу восьмого и началу девятого месяца (после увеличения вводимого тетрахлорметана) было отмечено стабильное снижение массы тела. После проведенных манипуляций получены следующие данные: Из таб. 1 видно, что на начало эксперимента масса тела у животных всех групп практически одинакова. После развития экспериментального цирроза печени отмечается значительная разница в массе тела интактных и подвергнутых затравке животных. Так масса тела интактных животных на момент оперативного вмешательства составила 524,8 ± 27,4 г, что на 11,4 — 18,2 % выше, чем в группах с экспериментальным поражением печени. Разница между показателями статистически достоверна (Р 0,05).
После проведения оперативного вмешательства у интактных животных отмечено снижение массы тела до 496,8 ± 16,0 г, т.е. на 5,3 %, однако разница статистически недостоверна. Во второй группе также отмечается снижение массы с 459,6 ± 7,4 до 451,0 ± 14,8 г, т.е. на 1,7 %, разница статистически недостоверна. У животных 3-ей группы (подвергнутых частичной гепатэктомии) отмечено повышение массы тела с 461,6 ± 11,0 до 463,2 ± 14,2 г, т.е. на 0,4 %, разница статистически недостоверна. В 4 - ой. группе (животные подвергнутые частичной Изучение гематокрита проводили на момент оперативного вмешательства и через месяц после него. На основании промежуточных данных можно предположить, что снижение гематокрита начиналось с 4 - 5-го месяца затравки с достижением минимальных значений к 9-му месяцу. У отдельных животных на третьем месяце затравки гематокрит был выше, чем у контрольных животных на момент оперативного вмешательства (42,0 %).
