Содержание к диссертации
Введение
1.Обзор литературы 14
1.1. Историческая справка о висцеральных микозах: кандидозе, нокардиозе, аспергиллезе, мукорозе и смешанных глубоких микозах 14
1.2. Факторы, предрасполагающие к возникновению глубоких микозов 24
1.3. Клинические признаки и патологоанатомические изменения у некоторых видов животных при глубоких микозах 38
1.4. Возбудители глубоких микозов и ареал их распространения 58
1.5. Патогенные свойства возбудителей и экспериментальные глубокие микозы 64
2. Собственные исследования 74
2.1. Материал и методы 74
3. Результаты собственных исследований 80
3.1. Клинико-морфологические изменения у животных при аспергиллезе...81
3.2. Клинико-морфологическая картина мукорозов у животных 97
3.3. Клинико-морфологическая характеристика кандидозов у животных... 105
3.4. Клинико-морфологические показатели нокардиоза у животных 116
3.5. Клинико-морфологические изменения у животных при смешанных микозах 126
3.6. Диагностика висцеральных микозов, вызванных патогенными грибами (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) 133
3.7. Дифференциальная диагностика висцеральных микозов, вызванных патогенными грибами (Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia) 142
3.8. Экспериментально вызванные микозы животных и их характеристика 159
3.9. Иммунологические аспекты висцеральных микозов 213
3.10. Изучение кариотипа клеток костного мозга опытных и контрольных кроликов 225
4. Обсуждение собственных результатов 327
Выводы 341
Практические предложения и рекомендации 344
Список литературы 345
- Факторы, предрасполагающие к возникновению глубоких микозов
- Возбудители глубоких микозов и ареал их распространения
- Клинико-морфологическая картина мукорозов у животных
- Иммунологические аспекты висцеральных микозов
Введение к работе
Разведение и содержание животных и кур в субъектах различной формы собственности характеризуется высокой эффективностью производства за счет использования современных технологий и получением максимального количества продукции при минимальных затратах. Но этот результат может быть достигнут только при рациональном и своевременном проведении специальных мероприятий: диагностических, профилактических, лечебных и т.д.
Ветеринарные специалисты активно участвуют в сохранении и увеличении поголовья животных и кур, в росте эффективности производства за счет планомерного осуществления профилактических мероприятий, в основу которых положено создание необходимых зоогигиенических и ветеринарно-санитарных условий.
Успешное разведение продуктивных и непродуктивных животных и кур невозможно без полноценного и своевременного финансирования ветеринарного дела в стране, научных исследований и, как следствие, надежной ветеринарной защиты животных от болезней, в том числе общих и для людей.
С учетом современного состояния ветеринарной науки и практики, новых лечебно-профилактических препаратов, приборов и оборудования, способов лечения и профилактики болезней, можно говорить о стабильной эпизоотической обстановке в стране по отношению ряда инфекционных заболеваний.
Тем не менее, известно значительное количество болезней, среди которых немало особо опасных, представляющих серьезную потенциальную угрозу как для продуктивных и непродуктивных животных, так и для людей.
Грибы занимают на Земле одно из важнейших мест (Соболев А.В., 1997). Одни из них распространены повсеместно (многие аспергиллы, пенициллы), другие — в меньшей степени. Они размножаются в различных
средах биосферы, составной частью которой являются животные и человек, часто вступая- с ними во взаимодействие. Одни виды грибов являются нормальными обитателями тела животных и человека, а другие - вызывают соответствующие заболевания — микозы. Третья группа может сенсибилизировать макроорганизм и вызывать аллергические состояния — микоаллергозы.
Размножение грибов связано с фазами их развития. Различают вегетативное размножение и репродукционное - с помощью специальных органов, когда закладавается способность воспроизводить значительное количество специализированных клеток размножения - спор или конидий. Споры (конидии) являются теми грибными факторами, которые, обычно, вызывают микогенную сенсибилизацию и развитие микоаллергии. Важное значение имеют размеры спор; что обусловливает их способность переноситься на дальние расстояния и длительность переживания при неблагоприятных условиях. Размеры спор варьируют от 1-2 ц до 20-40 ц и поэтому скорость их оседания из воздуха, достигает 50 мкм/с и более. Для миграции спор с воздушными потоками, достаточна скорость движения воздуха до 0,05м/с и несколько более для крупных спор некоторых грибов (Hawksworth D.L., Kirk P.M., Sutton B.C. and Pegler D.N., 1996). Споры грибов распространяются с воздушными потоками (анемохория), с помощью воды - гидрохория, почвы - геохория, животных - зоофория и человека -антропохория. Наименьшую зону охватывает геохория, кроме случаев попадания мелких частиц почвы (пыли) в воздух в ветреную погоду, и тогда они могут распространяться на дальние расстояния. При развитии в почве грибков образуются большое количество спор. Они могут мигрировать различнымиспособами, но, основными являются воздушные потоки, насекомые и другие животные.
В благоприятных климатических условиях споры грибов привлекает птиц и насекомых, которые их переносят на поверхности тела или поглощают с кормом, после чего в пищеварительном тракте они
подвергаются разнообразным воздействиям, что обусловливает ускоренное прорастание и вегетацию спор в дальнейшем. Примером антропохории являются значительные скопления бытовых отходов, где плесневые грибы размножаются в больших количествах. Так, одна головка Aspergillus fumigatus дает около 65 тыс.конидий, а из одной конидии за 24 часа может произойти 1000 головок аспергилла. Из выше сказанного понятно, что число спор грибов в м атмосферного воздуха обычно значительно превышает количество зерен пыльцы растений.
Грибы хорошо приспособлены к синтрофии с бактериями, грибами иных видов и родов, а также с более высоко организованными существами и, как правило, обитают в ассоциациях с ними.
Плесневые грибы практически растут повсеместно. Их разновидности
и количество в воздухе в различное время зависят от преобладай ия« ветров,
температуры, степени, осаждения, сезонных климатических факторов,
циклических изменений продолжительности светового периода и темноты, а
так же влажности атмосферы. Эволюционный успех плесневых грибов в
природе и их роль как источника аллергии объясняет их способность быстро
размножаться в подходящих экологических нишах, продуцировать и
рассеивать большое количество спор, как в закрытых помещениях, так и на
открытом воздухе. Грибы и фрагменты их распада всегда в различном
количестве присутствуют в окружающей среде. Животные и люди
подвергаются воздействию различных концентраций элементов плесневых
s грибов, что нередко сопровождается их сенсибилизацией. Таким образом,
важное значение имеет возможность определять и прогнозировать концентрацию частиц плесневых грибов в любой промежуток времени. Необходимо учитывать действие плесневых грибов, растущих в опавших листьях, а так же в закрытых помещениях, где споры грибов присутствуют постоянно.
За последние годы во многих странах мира помимо бактериальной и вирусной инфекции существенно участились случаи регистрации микозов -
заболеваний, вызываемых патогенными грибами (Grigul L., Pulver N., Goudeva L., 2006; Steinmetz H. Т., Comely O. A., 2001).
Часть паразитарных грибов избирательно поражает кожу и её производные. Эти заболевания относят к дерматомикозам. Следует учитывать, что наряду с поражением кожного покрова возбудители дерматомикозов могут иногда поражать глубокие ткани и внутренние органы.
Другая часть паразитарных грибов поражает внутренние органы и реже — кожу. Такие микозы именуются как глубокие, висцеральные или системные. Висцеральные микозы во многих отношениях значительно труднее для диагностики и требуют более углубленного обследования.
По данным ВОЗ, каждый 5-й житель нашей планеты страдает каким -либо грибковым заболеванием. Число больных животных с трудом поддается учету, особенно по отдельным регионам и возбудителям. В настоящее время в список потенциальных возбудителей микозов включено около 400 видов грибов, при этом отмечается возрастание роли грибов, считавшихся ранее апатогенными. Предрасполагающими факторами для возникновения микозов, в том числе висцеральных, является длительное применение кортикостероидов, цитостатиков, антибиотиков широкого спектра действия, снижения иммунной защиты различной этиологии, опухоли, сахарный диабет, туберкулез, плохое питание (недоедание), почечную недостаточность и другие (Krcmery V. Jr, Kunova Е., Jesenska Z., 1996).
Поражения, вызываемые висцеральными микозами, могут быть гнойными или гранулематозными или теми и другими вместе, что делает гистопатологические проявления их очень вариабельными, причем чаще ответ организма может быть смешанным.
Необходимо учитывать, что не все грибы имеют одинаковое строение в культурах и при своем паразитировании в организме животного (O.K. Хмельницкиий, 1973). Различие в особенностях строения гриба в культуре и при паразитировании в тканях называемой диморфизмом, который выражен
тем резче, чем более патогенным является возбудитель. При этом характер строения гриба тесно связан с характером его жизнедеятельности. Так, тканевая форма гриба, в отличие от культуральной, значительно требовательней в потреблении питательных веществ и витаминов, а также более устойчива к воздействию различных неблагоприятных факторов, в том числе защитных реакций макроорганизма (O.K. Хмельницкиий, 1973).
В связи с многообразием возбудителей висцеральных микозов, их
диморфизмом, диагностика заболеваний достаточно затруднена.
Клиническая картина' в немалой степени зависит от различных факторов,
поэтому ветеринарная практика настойчиво требует научной
обоснованности по диагностике и дифференциальному диагнозу этой группы, заболеваний.
Известно; что ранняя диагностика является важным моментом в
организации мер борьбы и.профилактики. Одним из необходимых звеньев в
системе ветеринарно-санитарных мероприятий является
патоморфологическая диагностика.
До последнего времени диагностика висцеральных микозов была сложной и не достаточно обоснованной. Одной из основных причин этого явилось отсутствие должного финансирования большинства хозяйств, которые не могли направлять материал в лабораторию для исследования (оплата за работу, транспортные расходы). Немаловажным фактором было отсутствие четких критериев патоморфологических изменений при висцеральных микозах и дифференциального диагноза от сходных болезней.
Проводимые нами исследования объясняются необходимостью борьбы с висцеральными микозами, в том числе и в Поволжском регионе.
Несмотря на то, что висцеральные микозы изучаются достаточно давно, в вопросе освещенности этой группы болезней еще есть проблемы. В литературных источниках, как отечественных, так и зарубежных приводится много сведений по этиологии, эпизоотологии, эпидемиологии, лабораторной диагностике, лечению и профилактике.
В тоже время, недостаточно освещены критерии
патоморфологических изменений ряда висцеральных микозов в различных условиях с учетом дифференциального диагноза от сходных болезней.
Мы не приводим во введении состояние изученности висцеральных микозов, так как в разделе «Обзор литературы» достаточно подробно освещены эти данные.
Таким образом, изучение критериев патоморфологических изменений висцеральных микозов и разработку на основании этого дифференциального диагноза, необходимо считать научной стороной решения актуальной задачи современного животноводства и птицеводства.
Цель исследования. Выявить особенности клинико-
эпизоотологической, патоморфологической диагностики висцеральных микозов животных, вызываемых патогенными, грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia в Поволжском регионе.
Объект исследований. Спонтанно заболевшие и экспериментально зараженные животные различных видов и возрастных групп.
Предмет исследований. Патоморфологические изменения в органах у животных при спонтанном и экспериментальном поражении грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia и воздействие грибов Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia на хромосомный аппарат подопытных животных
Задачи исследования.
1.Изучить эпизоотическую ситуацию по висцеральным микозам животных, вызываемых патогенными грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia в Поволжском регионе в современных экономических и экологических условиях хозяйствования.
2.Определить клинико-морфологические изменения у разных видов и возрастных групп спонтанно заболевших животных при висцеральных микозах, вызываемых патогенными грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia.
3.Определить клинико-морфологические изменения при
висцеральных микозах, вызываемых патогенными грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia у животных при экспериментальном заражении.
4.Сформулировать принципы дифференциальной
патоморфологической диагностики висцеральных микозов животных, вызываемых патогенными грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia в современных экономических и экологических условиях хозяйствования.
5.Изучить возможность мутагенной активности грибов Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia при проведении кариологических исследований.
Научная новизна.
- выявлены и подробно описаны патоморфологические и клинико-эпизоотологические особенности висцеральных микозов, вызываемых патогенными грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia в Поволжском регионе, их этиология и патогенез;
- установлены патогистологические изменения в органах и тканях спонтанно заболевших и экспериментально зараженных животных разных видов и возрастных групп и доказана их взаимосвязь с патогномоничными признаками при висцеральных микозах;
доказано угнетающее воздействие висцеральных микозов, вызываемых патогенными грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia на клетки костного мозга в стадии метафазы и снижение иммунного статуса при проведении кариологических исследований у животных.
Теоретическая и практическая значимость. Полученные новые данные по патоморфологическим и клинико-эпизоотологическим особенностям висцеральных микозов в Поволжском регионе, по динамике патогистологических изменений в органах и тканях животных разных видов и возрастных групп и их взаимосвязи с основными симптомами при висцеральных микозах могут быть использованы ветеринарными специалистами:
в системе диагностических и лечебно-профилактических мероприятий по борьбе с висцеральными микозами, вызываемыми патогенными грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia;
в учебном процессе факультетов ветеринарной медицины на кафедрах анатомии и патологической анатомии, гистологии, физиологии, патофизиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы продуктов животноводства, на курсах по повышению квалификации практикующих ветеринарных врачей, а также при написании учебников, учебных и справочных пособий;
в научно-исследовательской работе научных учреждений соответствующего профиля.
Реализация результатов исследования. Внедрение материалов диссертационной работы осуществлялось:
- при издании методических рекомендаций по лабораторной диагностике висцеральных микозов, одобренных Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства России;
- в диагностической работе Управления ветеринарии Правительства
Саратовской области;
- в диагностической работе ФГУ «Саратовская межобластная
ветеринарная лаборатория»;
- в диагностической работе ГНУ «Саратовская НИВС РАСХН»;
А так же в форме выпуска методических и учебных пособий, карт обратной связи, а именно:
- при издании монографии «Нозологические основы висцеральных
микозов» Саратов, 2007 - 242 с. (Рекомендовано Учебно-методическим
объединением высших учебных заведений Российской Федерации по
образованию в области зоотехнии и ветеринарии в качестве учебного
пособия для студентов высших учебных заведений, обучающихся по
специальности 110400 - Зоотехния и 111201 -Ветеринария);
при издании раздела в справочнике ветеринарного врача - Москва, 2006 — 31 с. (Допущено Министерством сельского хозяйства Российской Федерации в качестве учебного пособия для студентов высших учебных заведений, обучающихся по специальности 111201 — «Ветеринария»);
в учебных и научных целях на кафедрах анатомии и патанатомии, гистологии, физиологии, патофизиологии и ветеринарно-санитарной экспертизы продуктов животноводства Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, Ставропольского ГАУ, Самарской ГСА, Омского ГАУ, Алтайского ГАУ, Уральской ГСХА, Ивановской ГСХА, Ижевской ГСХА, Саратовского ГАУ.
Апробация работы Основные материалы НИР доложены, обсуждены
и одобрены на: I Международной научной практической конференции,
Витебск, 1996; Ветеринария и зоотехния: Юбилейный сборник научных
работ, посвященный 150-летию ИВМиБ, 1999; В сб. проблемы
инфекционных и инвазионных болезней в животноводстве на современном
этапе, Москва, 1999; Всероссийской научно-методической конференции
патологоанатомов ветеринарной медицины, Омск, 2000; научно-
практических конференциях ИВМиБ, Саратов 2001-2007; Всероссийской
научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной
медицины, Уфа, 2003; 2-4 Региональных научно-практических конференциях 2002-2004, Саратов, 2004; Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития. VI Всероссийской научно-практической конференции, Саратов, 2006.; Международной научно-производственной конференции, посвященной 100 - летию со дня рождения профессора Авророва А.А. Воронеж, 2006.; международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарии в современных условиях», посвященной 60-летию ГНУ Краснодарского НИВИ, Краснодар,2006.; Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных. Современные технологии переработки сельскохозяйственной продукции»,
Саратов, 2007; 7-й Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная* медицина. Современные проблемы и перспективы развития», Саратов, 2007; 16-й Всероссийской научно-практической конференции патологоанатомов, Ставрополь, 2007; Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии, биотехнологии, селекции животных. Современные технологии переработки сельскохозяйственной продукции», Саратов, 2008; 8-й Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития», Саратов, 2008; Всероссийской научно-практической конференции, посвященной памяти профессора Зыкина Л.Ф. «Актуальные1 проблемы ветеринарной патологии сельскохозяйственных животных и птиц», Саратов, 2008, Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной патологии, физиологии и морфологии», посвященной 90-летию факультета (института) ветеринарной медицины.
Основные положения, выносимые на защиту.
- особенность эпизоотологии микотической инфекции у животных и
ее связь с эпидемическим процессом;
характеристика клинико-морфологических особенностей висцеральных микозов, вызываемых патогенными грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia спонтанно заболевших и экспериментально зараженных животных с целью разработки и дачи рекомендаций по диагностике и профилактике висцеральных микозов в хозяйствах;
- оценка критериев клинико-морфологической дифференциальной диагностики висцеральных микозов, вызываемых патогенными грибами Aspergillus, Candida, Mucor и Nocardia животных от сходных болезней.
- изучение возможного воздействия патогенных грибов Aspergillus,
Candida, Mucor и Nocardia на хромосомный аппарат экспериментально
зараженных животных.
Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 28 научных работ, в том числе 7 из них в изданиях, рекомендованных перечнем ВАК РФ, в которых изложены основные положения и выводы проведенных исследований, а также в учебных пособиях с грифом Министерства сельского хозяйства и УМО РФ.
Объём и структура диссертации. Общий объём диссертации составляет 379 страниц компьютерной верстки. Работа иллюстрирована 199 фотографиями с макро- и микропрепаратов, 12 таблицами и 7 диаграммами. Список литературы включает 330 работ, в том числе 111 иностранных авторов.
Факторы, предрасполагающие к возникновению глубоких микозов
Вопрос причинности болезни, фона на котором она возникает, факторов, способствующих её возникновению и развитию - вот те основные вопросы, касающиеся расшифровки этиопатогенеза любой болезни, в том числе и глубоких микозов, патогенетическая сущность которых выяснена не полностью.
При выяснении причин возникновения глубоких микозов, в том числе аспергиллеза, кандидоза, мукороза, нокардиоза и смешанных микозов, исследователи детально анализируют и обычно пытаются получить ответ на главный вопрос: является ли данное заболевание первичным или вторичным? Выясняя вопросы патогенеза болезни, многие авторы отмечают самые различные причины, которые на их взгляд могли быть предрасполагающими для аспергиллеза. Когда рассматриваются, так называемые, экзогенные факторы, то к ним у людей в первую очередь относят особенности условий быта, характер работы. А у животных - условия содержания, возможные травмы слизистой оболочки пищеварительного тракта, когда высокая загрязненность окружающей среды грибами, их повышенная вирулентность, массивные дозы возбудителя, проникающие в организм, могут быть первичной причиной возникновения болезни. В медицинской практике отмечено возникновение плесневых микозов у лиц определенных профессий, связанных по характеру работы с растительной пылью, у пекарей, садовников, лиц, работающих при первичной обработке шерсти животных, откормщиков голубей и т.д. В ветеринарной практике такой контакт бывает частым, когда в корм или подстилку используют пораженные плесневыми грибами сено, солому, зерно.
Экзогенно возникающий аспергиллез животных и кур описан многими авторами. Так массовая вспышка аспергиллезной бронхопневмонии в откормочной группе крупного рогатого скота, возникшая в результате скармливания животным сена, сильно пораженного грибами из рода Aspergillus, описана В.Т. Котовым с соавторами (1970), а также в совхозе «Караваево» Костромской области среди молодняка крупного рогатого скота 4 —х месячного возраста.
Массовые заболевания и падеж крупного рогатого скота от скармливания пораженной грибами соломы были описаны в 1960 году. Заболевания и падеж свиней были зарегистрированы в 1960, и причиной явились комбикорма и ржаная дерть, пораженные грибами Aspergillus. Эти и многие другие примеры говорят о первичности аспергиллезной инфекции у животных и кур, протекающей с поражением легких и пищеварительного тракта.
Однако, значительно больше работ, особенно медицинских авторов, указывают на аспергиллез, как на вторичную, наслаивающуюся инфекцию, возникшую на фоне других заболеваний или причин, снижающих резистентность организма и делающих его менее устойчивым к внедрению и паразитированию в организме этих видов грибов. То есть, в этом случае, аспергиллез считается эндогенной инфекцией.
Касаясь такого важного предрасполагающего фактора в возникновении аспергиллеза пищеварительного тракта, как нарушение целостности слизистой оболочки желудка, следует остановиться на некоторых работах доказывающих, что данный фактор занимает одно из ведущих мест в объяснении причины возникновения аспергиллезных гастроэнтеритов и внедрения гриба в места дефекта слизистой оболочки.
Ряд ученых объясняет причину возникновения плесневых микозов желудка наличием предрасполагающих условий. Наибольшее значение, по его мнению, имеет не общее ослабление организма, а местные тканевые повреждения, способствующие инвазии спор гриба в стенку желудка. Дефекты эпителиального покрова слизистой оболочки, развивающиеся в местах эрозий, служат входными воротами для плесневого гриба. Автор приводит один из примеров, когда у больного, погибшего от сепсиса, на поверхность многочисленных эрозий желудка осел плесневый гриб из рода Aspergillus, развились язвенные дефекты, дном которых служил подслизистый слой.
Микозы, развивавшиеся в желудке у животных, по данным некоторых авторов в 1974 году, были причиной предварительного воздействия на слизистую оболочку токсина другого гриба. О том, что вирусы, вызывая воспалительный процесс слизистой оболочки желудка, способствуют врастанию грибов, указывают результаты исследований некоторых ученых, проведенные в 1973 году. Язвенные поражения сычуга у телят могут быть вызваны и резким переходом на грубые корма (Спиричев А.А., 1971).
При изучении роли подстилочной соломы в возникновении язв в сычуге у телят в 1971 году получили чрезвычайно интересные данные. По их наблюдениям оказалось, что более 14% опытных телят, содержавшихся на подстилочной соломе, имели по 2 и более повреждений слизистой оболочки (язвы, эрозии), в то время как у контрольных телят, содержавшихся без подстилки, таких повреждений было только у 2,8%. Язвы локализовались преимущественно в пилорической части сычуга.
М.Генис и Р.Полковникова, (1970), изучая глубокие микозы у животных в Киргизии, пришли к выводу, что корма и подстилка являются основными источниками аспергиллеза. В 1970 году на основании наблюдений и исследований было убедительно доказано, что аспергиллез легких у ягнят был причиной их содержания, на соломенной подстилке, пораженной грибами-возбудителями.
Существенную роль в- патогенезе аспергиллезов, как и других глубоких микозов, многие авторы отводят аллергическому состоянию заболевающего организма (в результате предварительной сенсибилизации):
Кандидозы, как самостоятельные заболевания, регистрируются редко, возникают они чаще всего на фоне других острых или изнурительных хронических заболеваний, нередко протекая в виде смешанной инфекции. Термин «кандидоз» подразумевает патологический процесс, в основе которого лежит избыточный рост Candida первично в желудочно-кишечном тракте и вторично — в других областях (Златкина А.Р., 2001; Prescott R.L.,1992).. По современным представлениям, в естественных условиях основной зоной локализации Candida spp. является кишечник. В микробной популяции кишечника доля Candida spp. невелика и, отчасти, регулируется благодаря работе звеньев неспецифического иммунитета: мононуклеарных фагоцитов (моноцитов, макрофагов) и полиморфноядерных лейкоцитов. (Златкина А.Р., 2001; Prescott R.L.,1992). Существенную роль в ограничении популяции Candida играют бактерии - кишечные симбионты, которые вырабатывают вещества с антибактериальной активностью, предотвращающие внедрение патогенных микроорганизмов, избыточный рост и развитие условно-патогенной флоры. Значительный материал по кандидозам накоплен в медицинской науке и практике. Многие авторы наблюдали кандидозы: у туберкулезных больных (Глуховцев,1950; Коваленко П.Г.,1965; Лебедева Т.Г.и Топчиев Ш.Р.Д960; Алимов Ш.А., Удрит О.О., Гапоненко А.С.,1965 и др.), при бруцеллезе (Амбарцумова СМ., Дьяконова Н.И.и Шамсутдинова А.Г., 1961). При злокачественных новообразованиях (Некачалов В.Я. с соавторами,, 1959; Соколова Н.М. с соавторами, 1964), при хронических заболеваниях легких (Степанова Т.В., I960). При дифтерии и ангинах (Юнусова Х.А. с соавторами, 1958; Казарин B.C. и Гаспарян М. О., 1962), при рахите (Гаспарян М.О., 1963); при-сахарном диабете (Морозова О.В., 1966 и др.). О.К.Хмельницкий (1963) рассматривает кандидозы как аутоинфекцию, которая возникает за счет собственной- флоры вследствие нарушения регуляторных процессов, обеспечивающих нормальную форму симбиоза макро- и микроорганизма. Именно поэтому большинство авторов решающее значение в возникновении и развитии кандидозов придают предшествующему состоянию макроорганизма, при котором гриб внедряется в ткани и дает начало инфекционному процессу (Шевяков М. А., 2004).
Возбудители глубоких микозов и ареал их распространения
Возбудителями аспергиллеза являются грибы из рода Aspergillus, которые широко распространены в окружающей среде и особенно в зоне обитания животных, где их можно обнаружить на заплесневелых кормах, в стойлах помещений на кожных и слизистых покровах.; Основной же резервуар аспергиллов - почва.. Достаточно сказать,, что по данным Л.ИЖурсанова (1947) в 1 г почвы их содержится!примерно 50000 диаспор;
В настоящее время описано более 300 видов? аспергиллов, причем способных вызывать микозы или микотоксикозы, по данным одних авторов, только 78; по другим данным (ЛещенкоВ!;М;,.1973)ихнасчитывается:89.
Установлено, что аспергиллезчаще всего вызывают виды: Aspergillus fumigates, flavus, niger. Однако известно также; что заболевания могут вызывать и другие виды. Кроме названных имеют отношение к патологии: у кур - Asp:- nidulans,. A. glaucus, A. candidus; у человека - A. glaucus, А. cherbariorum;,A..nidulans; у животных — Aspergillus nidulans.
По данным ВМ.Лещенко (1973) в 88% случаев; аспергиллез; у человека вызывает вид: A. fumigatus. Жри диагностике аспергиллеза, у человека, например;, наряду с: рентгеноскопическими исследованиями и иммунными реакциямшважную роль отводят выявлению фрагментов, возбудителя? и получение культуры, гриба, из мокроты больного.. Следует отметить, что впервые плесневые грибы в мокроте больного обнаружил Bennet (1842). Зарубежные исследователи в 1977 году установили аспергиллезную бронхопневмонию у мальчика в возрасте 14 лет именно по результатам исследования мокроты, подтвердилась и положительная РП с сывороткой крови больного. В 1976 году мокрота, как объект исследования, показала на положительный результат при диагностике аспергиллеза легких у 11 человек, причем у 8 человек из мокроты выделены Aspergillus fumigatus у 3 - Aspergillus niger. Реакция преципитации также былаположительной.
По данным французских авторов, в 1977 году более чем в 95% случаев в этиологии аспергиллеза птиц;занимает гриб Aspergillus: fumigatus. Важным: в- практическом отношении; являются наблюдения ЛЕ. Richard с соавторами (1983, 1991), о том, что грибы из рода Aspergillus обнаруживают у клинически здоровых коров в легких и бронхиальных лимфоузлах, в то же время в плаценте и желудке плодов микофлора отсутствовала. J.R. Thurston (1986) считает, что одним из методов серологической диагностики аспергиллезных больных стельных или не стельных животных является обнаружение специфических преципитинов в сыворотке крови, что позволяет избегать диагностических ошибок при применении других методов исследований.
К возбудителям кандидозов относят грибы из рода Candida, который по данным одних авторов (Кассирский И.А., Милевская Ю.Л., 1966; Блинов Н.П.,1964; Васильев В.Н., 1971) включает в себя 60 видов, по данным же других (Кашкин П.Н. и Шеклаков Н.Д.,1978) их насчитывается 80.
Из большого количества видов практический интерес, как способных вызывать заболевание, представляют лишь несколько. Одним из самых патогенных признан вид Candida albicans. В то же время, как указывает Н.А.Спесивцева (I960), от больных животных наряду с Candida albicans выделяют и такие виды, как Candida tropicalis, Candida pseudotropicalis, Candida krusei, Candida parakrusei. Эти же виды грибов Candida иногда выделяют и от больных людей. Среди возбудителей кандидозной инфекции доминирует Candida albicans, хотя в последние годы отмечается неуклонный рост других видов Candida, так называемых Candida non-albicans. По сообщениям EORTC на основных представителей Candida non-albicans (Candida krusei, Candida tropicalis и Candida parapsilosis) приходится 30%, (Багирова H.C., Дмитриева H.B., 2001; Дмитриева Н.В., Петухова И.Н., Иванова Л.Ф., 2001; Ричардсон М.Д., Кокки М, 1999; Walsh Т.J., 1997).
Проведенные В.Ю. Сельчук, И.Н. Петуховой, Н.С. Багировой, Е.В. Кулага, Н.В. Дмитриевой в 2001 г. исследования спектра дрожжевых грибов, выделяемых у больных, выявили, что Candida albicans составляет 70,3%, С. glabrata - 7,9%, С. inconspicua - 4,8%, С. kefyr - 3,5%, С. tropicalis -3,2%, С. parapsilosis - 2,9%, С. krusei - 1,3%, прочие виды Candida - 1% каждый. В небольшом проценте также выделяются Geotrichum spp. (2,5%) и Saccharomyces cerevisiae (2,2%). По мнению большинства авторов, как медицинских, так и ветери \ нарных, виды Candida albicans и Candida tropicalis являются наиболее частыми возбудителями кандидозов. Наиболее серьезными инфекциями, вызываемыми дрожжеподобными грибами рода Candida, являются кандидозные перитонит, пневмония, эндофтальмит и, конечно, кандидемия (Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В., 2000).
Грибы Candida являются явно вездесущими. Они встречаются в почве огородов и фруктовых садов, на овощах, молочных продуктах и т.д. (Саркисов А.Х., Акулова Н.С.,1951; Спесивцева Н.А.,1964; Сатмари Ш., 1966). А.П.Крупина (1960), обследуя молочные продукты, пришла к выводу, что наибольшее количество грибов Candida содержится в сыром молоке. Грибы Candida постоянно обнаруживаются на коже, в органах дыхания, в мокроте, пищеварительном тракте (Грачева Н.М.,1958; Ахмедова К.Х., 1962; Цинзерлинг А.В.,1960). Е.Я.Мороз (1960) при обследовании 290 детей, у 137 (47%) выделила грибы Candida, из которых 46% были отнесены к виду Candida albicans, и 62% - к виду Candida tropicalis. Ш.Сатмари (1966) обнаружил виды Candida у 300 сельских лиц, причем подавляющее большинство грибов выделяли у детей в возрасте от одного года до 5 лет. О выделении грибов Candida из верхних дыхательных путей здоровых кроликов сообщил Н.П.Елинов (1964), a W. Bisping (1963) при исследовании 4167 проб различных материалов (внутренние органы, влагалищная слизь коров, кобыл, семенная жидкость быков, молоко коров и т.д.) от крупного рогатого скота, лошадей, свиней, собак и кур установил, что 18,3%) материала заражено дрожжевидными грибами Candida. И.Ф. Щелокова (1965), изучая дрожжевидную флору некоторых 1 кормовых растений и силоса, также выделяла Candida. Из силоса, наряду с другими видами, были выделены С. krusei и С. tropicaliss. і Вид Candida tropicalis довольно часто выделяют из молока коров, больных маститами (Sipka М., 1957; Скрыпник Е.И. Семенчук К.Л., 1956). Этот вид гриба является наиболее частым представителем сапрофитирующей микрофлоры в организме крупного рогатого скота и может быть причиной не только маститов, но и абортов, о чем известно из работ F. Schulte, H.D. Scholz,. 1962; В.Н.Баринова, 1968; Лысенко, Милорадовича, 1966 и др. Дрожжевидные микроорганизмы по частоте встречаемости у некоторых видов животных находятся в такой последовательности: у крупного рогатого скота- 46,8%, лошадей - 52,7%,,коз - 6,4%, овец - 6,8%, у свиней - 88 8%; Наиболее патогенный вид Candida albicans чаще встречается у людей и кур (33,3 % микрофлоры рубца у 29 телят 10-дневного возраста и старше, обнаружили этот вид гриба только у 9 телят);
Таким, образом, грибы Candida» широко распространены как в окружающей среде, так и в организме животных. Следовательно, микроорганизмы, являясь средой.обитания гриба, существенно влияют на его патогенность. Однако, как считает ряд авторов; не исключается возможность, и экзогенного заражения, если возбудитель обладает высокой вирулентностью и попадает в организм в больших количествах вместе с кормом. Например, в 1959 году наблюдали кандидоз у телят, возникший после скармливания корма, загрязненного высоковирулентным штаммом этого гриба. Изучая причину вспышки кандидоза у индюшат, пришли к выводу, что молодняк заболевал с первых дней жизни по причине ослабления их организма, а потому что концентрация возбудителя в комбикорме была весьма значительной.
Клинико-морфологическая картина мукорозов у животных
Заболевание у взрослых животных может протекать без каких-либо признаков и диагностируется лишь при убое (Спесивцева Н.А., I960, 1964), но иногда мукорозы сопровождаются стойкой атонией или остро протекающей диареей. Следует отметить, что симптомология системных микозов, в том числе и мукорозов, описана недостаточно подробно, поэтому говорить об этом микозе можно только после комплексного изучения при обязательном исследовании результатов вскрытия.
Наблюдая мукороз у коровы Y.A. Kamau, Y.M. Maribei (1972), отмечали, что через неделю после аборта (на 5-ом месяце) у нее развилась диарея с выделением зловонных каловых масс. У больного животного отсутствовал аппетит, температура тела - 37,7С, предлопаточные лимфатические узлы были увеличены. Ректальным исследованием выявлялись узелки на слизистой оболочке прямой кишки. Симптоматическое лечение оказалось безрезультатным, а из кормов был выделен гриб рода Mucor.
Описывая мукороз у телят раннего возраста, D.O. Cordes (1964), К. Shimizu (1972), отмечали изменения в органах, которые характеризовались диареей с примесью крови в испражнениях, слабостью и отсутствием аппетита. Объективные материалы по изучению фикомикозов у телят 4-х недельного возраста были представлены в 1974 году. За один год было проведено обследование 308 телят, в результате чего у 12 из них был диагностирован микотический гастрит. При этом было отмечено, что большая часть телят, в том числе и те, у которых были диагностированы микозы, подвергались антибиотикотерапии, направленной против диареи. При изучении мукорозов у свиней и быков с клиническими признаками язвенных гастритов в 1955 году, пришли к выводу, что при мукорозе поражаются либо пищеварительный тракт, либо дыхательная система.
Особенностью мукорозов, в отличие от других глубоких микозов, была редко наблюдаемая воспалительная реакция в пораженных тканях. Если воспаление и имеет . место, то оно, по данным 0;К.Хмельницкого (1973) проявляется слабой лейкоцитарной и лимфоцитарной инфильтрацией с некротическими изменениями. При этом возникновение абсцессов отмечается редко и почти не обнаруживается очагов гнойного воспаления. Наблюдаемый некроз тканей, который является характерным для мукорозных поражений, связан; по мнению О.К.Хмельницкого, не только с непосредственным действием гриба на ткань, но и с постоянно встречающимися при мукорозах расстройствами кровообращения. Мукоровые грибы, как и другие представители этого семейства, обладают особым свойством; врастать в стенки сосудов, образовывать в их просвете тромбы из- сплетения? нитей; что приводит к нарушению- кровообращения, образованию некрозов и инфарктов. Излюбленная; локализация мукоровых грибов это кровеносные сосуды. В 1973-1976 годах публикуютсяматериалыисследований по изучению; фикомикоза,у лошадей, который,протекал как острый системный микоз. При вскрытии отмечали гранулемы, во всех органах (сердце, печень, селезенка, головной мозг, легкие). Гифы гриба выявлялись гистологически, как правило, в сосудах и очагах инфарктов. Особенно большое скопление гифов наблюдалось в очагах поражения легких. О фикомикозе лёгких у свиней, поражении кожи у лошади, головного мозга коровы и абортированного плода, поражении пищеварительного тракта овец, вызванного мукорозами, сообщал ряд авторов в 1961-1974 годах.
Описывая характер патоморфологических изменений при мукорозах у коров и телят, в 1973 году, исследователи обратили внимание, что во всех наблюдавшихся ими случаях отмечалась патогномоничная картина, не вызывавшая сомнений в воздействии именно одного возбудителя. Эти изменения клинически характеризуются кровавым поносом и отеком гортани. При вскрытии из брюшной полости вытекала красно-желтая, мутноватая жидкость, а серозные оболочки были покрыты нитями фибрина и отмечались множественные петехиальные кровоизлияния. Стенка преджелудков, при этом, была пропитана кровью. У отдельных животных можно было видеть перфорацию стенки сычуга диаметром 3-5 см, особенно на месте язв в пилорической части. Стенки преджелудков при легком к ним прикосновении разрывались. Слизистая оболочка преджелудков была сине-фиолетового цвета. В тонком отделе кишечника обнаруживались сгустки крови и изъязвления слизистой оболочки. Лимфатические узлы были увеличены, отечны, с кровоизлияниями. В печени, почти у всех животных выявлялись мелкие некротические очаги.
О том, что язвы и некрозы, как правило, сопутствуют мукорозам у взрослых животных в пищеварительном тракте и печени отмечают практически все авторы, работы которых мы изучали. Разница заключается только в том, что по-разному даются морфологические характеристики язв. Так, Y. A. Kamau, Maribei (1972), наблюдая язвы в сычуге и толстом кишечнике, описывают их так: они имели пуговчатую форму, основание их было бледно-розового цвета и относительно свободно от экссудата. Другие исследователи, детально не описывая язвы, отмечали, что центр их состоял из некротических масс, глубоко проникавших в толщу стенки органа, гриб обнаруживали, как в стенке и дне язв, так и в подслизистом слое, который был в состоянии отека, расширен и инфильтрирован клеточными элементами. При обнаружении язв в пищеварительном тракте в 1963 году, отмечали казеозные или кальцифицированные очаги в лимфатических узлах, а в гистологических срезах пораженных тканей - интенсивную инфильтрацию лимфоцитов и гигантских клеток, фагоцитирующих гриб.
О гранулематозных поражениях легких и лимфоузлов у двух буйволов сообщили индийские исследователи в 1976 году. Авторы акцентируют внимание на то, что гриб Mucor обнаруживался только в очагах поражения. Наблюдая остро протекавший гастроэнтерит у буйволят 7-13 дневного возраста, обнаруживали в сычуге множественные язвы различных размеров. Язвы были преимущественно округлой формы с приподнятыми краями, а в их дне выявлялись беловатые массы. Наряду с фикомицетами из язв выделяли грибы из рода Candida. В очагах язвенных поражений гистологически обнаруживали тромбозы сосудов гифами гриба и некрозы тканей.
Иммунологические аспекты висцеральных микозов
Актуальность проблемы кандидоза обусловлена распространенностью этой грибковой инфекции, на долю которой приходится подавляющее большинство случаев грибковых поражений. Вызывает кандидоз около 20 видов Candida и наиболее изученным из них является Candida albicans.
Кандидоз, являясь оппортунистической инфекцией, поражает только иммунокомпрометированные макроорганизмы. Из множества состояний, предрасполагающих к кандидозу, превалируют расстройства иммунной системы. В последнее время утвердилось мнение о том, что расстройства клеточного иммунитета предрасполагают к поверхностным формам кандидоза, а поражения внутренних органов обусловлены тяжелыми нарушениями фагоцитоза. Даже при использовании современных противогрибковых средств, высокоактивных в отношении Candida spp., лечение висцеральных форм кандидоза на фоне тяжелого иммунодефицита и нейтропении бывает безуспешным и животное нередко погибает. По этой причине, не касаясь вопросов вариабельной чувствительности разных видов и штаммов Candida к антимикотикам, необходимо рассмотреть проблему иммунного ответа при кандидозе для воздействия на определённые звенья иммунной защиты организма, опираясь на информацию об эффективных средствах иммунной реконституции при висцеральном кандидозе.
Важным компонентом защиты желудочно-кишечного тракта является иммунная система, ассоциированная с кишечником. Клеточная часть этой системы включает в себя интраэпителиальные лимфоциты, которые препятствуют дисперсии возбудителя и агрегации в пейеровых бляшках. В-лимфоциты кишечника участвуют в продукции секреторных IgA и IgM, которые уменьшают способность грибов к адгезии.
Т-клетки здорового организма продуцируют защитный интерферон, усиливают фагоцитоз, активируют Т-цитотоксические лимфоциты, укрепляют местный иммунитет в ЖКТ. Причем оказалось, что их цитотоксичность играет более существенную роль в предотвращении заболевания, чем предполагали раньше (Бурова С. А., 2003).
Реакция макроорганизма на кандидоз базируется на неспецифических, или естественных факторах, присутствующих постоянно, и специфических факторах иммунитета, которые вырабатываются в ответ на его появление. К первым следует отнести неблагоприятную для грибов разницу в физиологических условиях, а так же конкуренцию с клетками микрофлоры и тканями макроорганизма, барьерную функцию кожи и слизистых оболочек. Нормальные биохимические, гистохимические и физиологические процессы в ЖКТ, своевременная регенерация эпителиоцитов, кислотно-ферментативный барьер, полноценная перистальтическая активность также являются защитными факторами, которые препятствуют проникновению грибковой и бактериальной флоры (Лазебник, Л.Б., 2004). Помимо этого, в макроорганизме циркулирует в крови и секретируется на поверхность кожи и слизистых оболочек ряд противомикробных и противогрибковых факторов. Дефицит некоторых из этих факторов предрасполагает развитие кандидоза. Но основным условием эффективной защиты организма являются специфические факторы иммунной системы, в том числе макрофаги и нейтрофилы, которые выполняют основную работу по избавлению макроорганизма от Candida spp. При этом фагоциты играют не только пассивную роль в иммунном ответе, но и неспособны к его регуляции. Адгезия клеток гриба к фагоцитам может осуществляться опосредованно, как у нейтрофилов и других клеток или непосредственно как у макрофагов за счет рецепторов на их поверхности, но этот процесс иногда сталкивается с трудностями, отчасти обусловленными размерами грибковой клетки.
Осуществлять прямую адгезию Candida spp. могут только макрофаги, при этом тканевые макрофаги являются более профессиональными фагоцитами, чем моноциты, клетки микроглии и эндотелия. Среди них наиболее активными считаются альвеолярные макрофаги. По-видимому, этим объясняется редкое поражение легких при глубоком кандидозе у взрослых животных. Облигатные микроорганизмы желудка и кишечника также играют защитную роль. Применение антибиотиков убивает, наряду с патогенными, и эти «полезные» бактерии, открывая на слизистой оболочке рецепторы адгезии для грибов (Бурова С. А., 2003). В свою очередь, лечение в том числе, хеликобактериоза антибиотиками приводит к активации грибов Candida и кандидозу желудка (Баженов, Л. Г., 2003).
Макрофаги, несмотря на высокую активность, специализацию и регуляторные способности, из всех фагоцитов являются наиболее зависимыми от Т-клеточной регуляции, что обусловливает значительную степень их чувствительности к ее нарушениям. Деятельность Т-лимфоцитов формирует регуляцию иммунного ответа при кандидозе. Помимо этого, многие группы Т-клеток оказывают прямое фунгицидное действие. При кандидозе вырабатываются антитела в виде иммуноглобулинов всех классов. Антимикотическая роль некоторых из этих антител доказана, а для других она оспаривается или отвергается, но при этом необходимо признать, что специфический гуморальный иммунитет имеет важное значение в борьбе с кандидозной инфекцией. Защита макроорганизма при глубоком кандидозе непосредственно связана с комплементом, но конкретные механизмы действия комплементарной системы и взаимодействие между ней и другими факторами иммунитета недостаточно изучены. Несмотря на активное влияние сложной многоуровневой системы защиты макроорганизма, грибам Candida spp. часто удается противостоять этому влиянию и вызывать инфекцию. В этом преуспевает вид С. albicans, во многом благодаря своей изменчивости и широким адаптационным способностям. Смена фаз роста, способность к существованию при разной температуре и кислотности, изменчивость фенотипов позволяют С. albicans и некоторым другим видам Candida успешно приспосабливаться к воздействию естественных защитных факторов организма животных.