Введение к работе
Актуальность проблемы. Предстательная железа (ПЖ, простата) у животных, также как и у человека, является основной вспомогательной половой железой у животных, также как и у человека, и влияние её на жизнедеятельность мужского организма многогранно (Grahack J.T, Kozlowski J.M., 1991).
Экстракт простаты половозрелых бычков в течение последних 20 лет успешно используется в качестве сырья для производства медицинских препаратов (Хавинсон В.Х. с соавт., 1997). Однако известно, что экстракты органов и тканей представляют собой сложные комплексы биологически активных молекул, которым свойственны различная функциональная направленность и сложный до конца неизученный механизм действия (Хавинсон В.Х. с соавт., 1997).
Можно предположить, что далеко не все функциональные особенности экстракта простаты на организм изучены и применение в исследованиях новых функциональных тестов (влияние на гормонообразование, рост шерсти, клеточный рост, оплодотворение и т.д.) сможет выявить возможности его использования в новых перспективных направлениях, в частности в животноводстве.
Цель исследования. Оценка морфофункциональных изменений во внутренних органах и периферической крови экспериментальных животных после введения им очищенного экстракта из предстательной железы быков.
Задачи исследования. Для достижения цели исследования необходимо решить следующие задачи:
1. С помощью клинических, патологоморфологических и лабораторных
методов исследования провести анализ морфологических и функциональных
изменений во внутренних органах и периферической крови экспериментальных
животных после 20-ти дневного внутрижелудочного введения им жидкого
очищенного экстракта из ткани простаты быков.
2. С помощью биохимических методов исследования провести ко
личественное определение общих пептидов и фрагментированных нуклеиновых
кислот в составе экстракта из ткани простаты быков и установить влияние
криопротектора глицина на снижение их концентрации в экстракте после
лиофильного высушивания.
-
Изучить с помощью жидкостной гель-хроматографии фракционный состав экстракта из ткани простаты быков и, используя набор стандартных весовых маркеров, определить относительную молекулярную массу компонентов этих фракций.
-
С помощью реакции восстановления активности щелочной фосфатазы, ингибированной цистеином, изучить влияние криопротектора глицина на биологическую активность экстракта простаты и его отдельных пулов компонентов.
I тс НАЦИОНАЛЫ^!
J БИБЛИОТЕКА ]
! 2WW9
"""" >« J»
5. Провести изучение влияния экстракта простаты быков и его отдельных пулов компонентов:
на содержание тестостерона в периферической крови половозрелых мышей-самцов при внутрибрюшинном способе введения с помощью иммунофермент-ного анализа;
на рост шерсти у кроликов и морских свинок при введении исследуемых образцов способами: аппликация, per os и внутримышечная инъекция;
на сократительную активность гладкой мускулатуры подвздошной кишки морской свинки в тестах «прямого» влияния и отмены торможения глад-комышечных сокращений, вызванной хлористым лантаном;
на артериальное давление у петухов породы «Белый Леггорн» биологическим методом, основанном на способности окситоцина снижать кровяное давление у птиц.
Научная новизна настоящей работы заключается в том, что впервые, с помощью комплекса клинических, патологоанатомических, морфометрических, гистологических, биохимических, биологических и хроматографических методов дана характеристика полифункционального действия экстракта простаты быков на организм экспериментальных животных, обусловленного многокомпонентностью его состава.
Впервые в экспериментах на белых мышах показано, что однократное парентеральное введение экстракта из ткани простаты быков приводит к волновому повышению содержания тестостерона в периферической крови: через 1, 3,6 и 72 часа. Ответственными за этот эффект являются нуклеиновопептидные компоненты с относительной молекулярной массой (о.м.м.): от 0,075 до 17 кДа. Установлено, что они регулируют уровень эндогенного тестостерона в крови в различные промежутки времени с различной интенсивностью, что может свидетельствовать о различных механизмах, лежащих в основе наблюдаемого эффекта.
Впервые разработан и предложен метод контроля этой активности в экстрактах из ткани простаты (патент РФ № 2000113922 «Способ определения биологической активности препаратов из ткани предстательной железы», 2002 г).
Впервые выделены методом жидкостной гель-хроматографии и охарактеризованы по относительной молекулярной массе компоненты, стимулирующие рост шерсти у животных и не содержащие в своем составе свободный тестостерон. Экспериментальным путем определены эффективные дозы этих компонентов при. различных способах их введения.
Хроматографически выделены и охарактеризованы по о.м.м. компоненты экстракта простаты быков, оказывающие влияние на сократительную способность гладкой мускулатуры и артериальное давление. Биологическим методом оказано, что одним из них, является окситоциноподобный пептид.
Впервые предложен стабилизатор, обеспечивающий сохранение изученных морфофункциональных характеристик экстракта при хранении
(Уведомление о положительном результате формальной экспертизы № 2004112873/15(013845)). Раствор для инъекций «Простакор», восстанавливающий функцию предстательной железы, 2004).
Практическая значимость и реализация результатов исследования
Дано научно-методическое обоснование возможности применения жидкого очищенного экстракта простаты или его отдельных компонентов в некоторых областях животноводства (повышение потенции и оплодотворяющей функции у самцов-производителей, улучшения качества шерсти у пушных зверей).
С помощью разработанного метода контроля можно количественно охарактеризовать эффективность препаратов, содержащих в своем составе экстракт простаты быков в тесте повышение уровня тестостерона в крови самцов -производителей.
Разработанный стабилизатор обеспечивает сохранение изученных свойств жидкого экстракта при хранении в течение 3-х лет.
Разработаны три новых лечебных препарата для нужд здравоохранения, содержащих жидкий экстракт из ткани простаты КРС, позволяющие максимально сохранить исходную биологическую активность.
Результаты проведенных исследований оформлены в виде научно-технической документации на субстанцию «Экстракт из ткани простаты крупного рогатого скота очищенный концентрированный жидкий» и «Простакор раствор для внутримышечного введения».
Образцы новых препаратов переданы:
в осеменительную станцию для изучения возможности его применения с целью
улучшения качества спермы (объем, количество, жизнеспособность, отсутствие
патологических форм сперматозоидов) у быков-производителей для
искусственного осеменения; - в Улу-Телякское звероводческое хозяйство для изучения возможности
улучшения качества меха (качество подшерстка, густота и т.д.) черно-бурых
лисиц.
Апробация работы
Основные материалы диссертации доложены на Всероссийской научной конференции, посвященной- 95-летию НИИВС им И.И. Мечникова (Уфа, 2000 г.) и Всероссийской научной конференции с международным участием, посвященной: 100-летию со дня основания филиала «Иммунопрепараї» ФГУП «НПО «Микроген» МЗ и СР РФ (Уфа, 2005 г.).
Диссертация апробирована на заседании ученого совета Башкирского госу
дарственного аграрного университета (протокол № от 13.05.05 г.).
Публикации. Основные положения диссертационной работы изложены в 5 научных статьях, опубликованных в материалах научно-практических конференций, тематических сборниках вузов. По материалам диссертации получено 3 патента РФ и одна приоритетная справка на патентование.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 150 страницах