Содержание к диссертации
Введение
1. Обзор литературы 9
1.1. Антигельминтные свойства альбендазола и его метаболита сульфоксида
1.2. Токсические свойства альбендазола и его метаболита сульфоксида
2. Собственные исследования 32
2.1. Материалы и методы 32
2.2. Результаты исследований 46
2.2.1. Эффективность риказола при гельминтозах овец 46
2.2.1.1. Эффективность риказола при нематодирозе и других стронгилятозах пищеварительного тракта 46
2.2.1.2. Испытание риказола при диктиокаулезе и других легочных стронгилятозах 46
2.2.1.3. Титрация терапевтической дозы риказола при мониезиозе 49
2.2.1.4. Овоцидные свойства риказола 51
2.2.1.5. Эффективность риказола при авителлинозе и тизаниезиозе 51
2.2.1.6. Испытание риказола при дикроцелиозе 54
2.2.1.7. Испытание риказола при трихоцефалезе 54
2.2.1.8. Эффективность риказола против половозрелых и личинок стронгилят сычуга овец 57
2.2.2. Токсикологические свойства риказола 59
2.2.2.1. Параметры острой токсичности риказола при пероральном введении лабораторным животным 59
2.2.2.2. Показатели острой токсичности риказола при парентеральном введении 62
2.2.2.3. Острая накожная токсичность риказола 65
2.2.2.4. Раздражающее действие риказола 67
2.2.2.5. Подострая токсичность риказола 67
2.2.2.6. Эмбриотоксические и тератогенные свойства риказола
2.2.3. Влияние риказола на организм овец 83
2.2.4. Разработка метода ВЭЖХ для определения содержания альбендазола и его метаболитов (сульфоксида и сульфона) в сыворотке крови и тканях овец
2.2.4.1. Фармакокинетика веществ группы альбендазола (альбендазол сульфоксида, альбендазол сульфона) в сыворотке крови овец 107
2.2.4.2. Содержание остаточных количеств веществ группы альбендазола (альбендазол сульфоксида, альбендазол сульфона) в органах и тканях овец после введения риказола
2.2.5. Комиссионные испытания риказола при смешанной инвазии овец, вызванной мониезиями и стронгилятами 111
2.2.6. Производственные испытания риказола при гельминтозах овец 112
3. Обсуждение 113
Заключение 120
Практические предложения 123
Список использованной литературы
- Токсические свойства альбендазола и его метаболита сульфоксида
- Эффективность риказола при гельминтозах овец
- Токсикологические свойства риказола
- Фармакокинетика веществ группы альбендазола (альбендазол сульфоксида, альбендазол сульфона) в сыворотке крови овец
Введение к работе
Актуальность темы. Гельминтозы овец распространены повсеместно в разных климатических зонах Российской Федерации и стран СНГ. (Р.Т. Сафиуллин, 1997; М.В. Арисов, 2002; Р.С.Кармалиев, 2006; М.М. Бочарова, С.М. Кокоев, 2007; Х.Х. Гадаев, 2008; С.О. Мовсесян с соавт., 2009; Е.Е.Белова, 2011; Г.М. Лазарев с соавт., 2012; В.М.Шамхалов с соавт., 2013; В.А. Марченко, Ю.А. Василенко, 2015).
В отдельных регионах, зараженность молодняка овец стронгилятами и цестодами достигает 90% и более, легочными нематодами – до 80% и трематодами до 60%. (В.П Кротенков, 2005; З. Ш.Насирханова с соавт, 2006; А.З. Джамалова с соавт., 2007; М.Г. Газимагомедов., А.М.Атаев., 2011; А.М. Биттиров с соавт., 2015).
Болезни, вызванные этими паразитами, как правило, протекают в форме смешанных инвазий и являются причиной массовых заболеваний не только молодняка, но и взрослых животных (А.М.Атаев с соавт 2003; О.А. Магомедов с соавт 2007; А.Н.Сусаев, Х.Х. Гадаев, 2011; В.М. Соколова, М.Д. Новак, 2013). Мигрируя в тканях и паразитируя в легких, печени и пищеварительном тракте животных гельминты вызывают механические повреждения, воспалительные инфильтраты, дистрофические изменения в органах, нарушения иммунологической реактивности и гемопоэза. (У.Г. Кадыров, Г.Р. Шакирова, 2000; Е.А. Кузнецова, 2004; Д.А. Соловьев, Н.С. Беспалов, 2005; Н.В.Чебышев, Т.Ю. Дегтяревская, 2006).
Экономический ущерб, причиняемый овцеводству гельминтами, складывается из задержки роста и развития молодняка, снижения мясной и шерстной продуктивности, качества мяса, воспроизводительной функции и резистентности организма к другим заболеваниям, падежа, вынужденного убоя, выбраковки пораженных органов и др. (К.С. Кутбагалеев, 2000; В.З. Галимова, 2000; А.Х. Цолоев 2002; М.Г.Хуклаева с соавт., 2006; Р.С. Шахтамирова с соавт., 2006; Р.Т Сафиуллин, 2009; С.Ш. Абдулмагомедов с соавт., 2012).
В качестве средств борьбы с нематодозами, цестодозами и
трематодозами животных в ветеринарной практике, большим спросом
пользуются лекарственные формы альбендазола в виде порошка, гранул,
таблеток, болюсов, суспензии (И.А. Архипов, 2009). При всем его
положительном действии на гельминтов, он имеет и свои недостатки. В повышенных дозах препарат обладает эмбриотропной активностью, а при пероральном применении угнетает процесс пищеварения, нарушает естественный биоценоз, ферментативную активность, вызывая при этом снижение количества простейших и бактерий (P. Delatour et al.,1981,1983; J. H. Arundel 1985; Е. Р. Басанов, 1994; И.З. Арсланова, 2007).
Следует подчеркнуть, что сама молекула альбендазола не эффективна как в отношении антигельминтного, так и эмбриотропного действия, но альбендазол в организме животных быстро метаболизируется до сульфоксида
и сульфона и, по мнению ученых, именно альбендазол сульфоксид играет определяющую роль в механизме изгнания паразитов из организма животных.
В литературе имеется много сведений о высокой антигельминтной эффективности альбендазола - сульфоксида (рикобендазола) (В.Е.Абрамов с соавт., 2005; В.А. Оробец с соавт., 2005; В.А.Сидоркин с соавт., 2005; Н.А. Чемоданкина, В.А. Сидоркин, 2006; S. Ahmadnia et al., 2013).
Это вещество в качестве антигельминтика стали использовать зарубежные компании в форме 10% раствора для инъекции, а в нашей стране такой антигельминтный препарат не зарегистрирован для ветеринарного применения. Это дало основание фирме ЗАО «НИТА-ФАРМ» разработать состав 10%-ого раствора альбендазола-сульфоксида, а нам провести доклинические и клинические исследования на лабораторных животных и овцах с целью внедрения препарата в ветеринарную практику под названием риказол.
Таким образом, широкое распространение гельминтозов овец, большой экономический ущерб, причиняемый ими и необходимость внедрения в ветеринарную практику нового эффективного препарата для борьбы с гельминтами овец, стали основанием для выбора направления исследований.
Цель и задачи исследований. Цель диссертационной работы заключалась в изучении антигельминтной активности препарата риказол при гельминтозах овец и его фармако-токсикологических свойств.
Для выполнения указанной цели были поставлены следующие задачи:
установить оптимальные дозы риказола при основных нематодозах,
цестодозах и трематодозах овец;
определить параметры острой токсичности риказола на лабораторных
животных при разных способах применения;
исследовать подострую токсичность риказола и его эмбриотропные свойства;
установить степень влияния разных доз риказола на клинические, гематологические и биохимические показатели овец при многократном его применении;
разработать метод ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной
хроматографии) для определения веществ группы альбендазола (альбендазола,
альбендазол сульфоксида и сульфона) в сыворотке крови и тканях овец;
изучить фармакокинетику и установить сроки выведения веществ группы альбендазола (альбендазол сульфоксида и альбендазол сульфона) из организма овец;
провести комиссионные и производственные испытания препарата при гельминтозах овец.
Научная новизна. В результате проведенной работы научно обоснованы и экспериментально определены терапевтические дозы риказола при основных гельминтозах овец. Установлены параметры острой и подострой токсичности риказола, изучено влияние различных доз препарата
на эмбриональное развитие, гематологические и биохимические показатели лабораторных животных и овец. Разработан метод ВЭЖХ, с помощью которого изучена фармакокинетика и определены сроки выведения веществ группы альбендазола (суммарного содержания альбендазола сульфоксида и сульфона) из организма овец после однократного применения риказола.
Практическая значимость работы. Полученные результаты
исследований использованы при разработке Инструкции по применению риказола, утвержденной Россельхознадзором с последующей выдачей регистрационного удостоверения 44-3-15.14-2443№ПВР-3-15.14/03096 от 16.01.2015 года.
Положения, выносимые на защиту:
результаты испытаний эффективности риказола при основных нематодозах, цестодозах и трематодозах овец;
параметры острой токсичности риказола на белых мышах и крысах при пероральном, парентеральном и накожном применении;
результаты изучения подострой токсичности риказола и его эмбриотропных свойств;
влияния разных доз риказола на клинические, гематологические и биохимические показатели овец при многократном его применении;
результаты разработки метода ВЭЖХ для определения веществ группы альбендазола в сыворотке крови и тканях овец;
результаты изучения фармакокинетики и сроков выведения веществ группы альбендазола из организма овец;
эффективность риказола в комиссионном и производственном опытах при гельминтозах овец.
Апробация работы. Основные положения диссертационной работы были доложены и обсуждены на научной конференции Всероссийского общества гельминтологов РАН «Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями», Москва, 2014 г.; III Международном конгрессе ветеринарных фармакологов и токсикологов. Санкт-Петербург, 2014 г.; заседаниях ученого совета ВНИИ фундаментальной и прикладной паразитологии животных и растений, Москва, 2014, 2015, 2016 гг.
Публикации результатов исследований. По материалам
диссертационной работы опубликовано 7 работ, в том числе 3 статьи в журналах, которые внесены в перечень рекомендуемых Министерством образования и науки изданий для опубликования основных результатов исследований.
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 152 страницах компьютерного текста, включает в себя: введение, обзор литературы, основную часть, обсуждение результатов, заключение, список использованной литературы и приложение. Работа содержит 47 таблиц, 26 рисунков. Список использованной литературы включает 195 источников, из них 90 иностранных. Приложение на 4-х страницах.
Токсические свойства альбендазола и его метаболита сульфоксида
Первые эксперименты на овцах показали, что альбендазол обладает широким спектром действия против желудочно-кишечных и легочных нематод, цестод и фасциол. Назначение препарата животным в дозе 3,8 мг/кг показало 90%-ную эффективность против имагинальных и преимагинальных нематод пищеварительного тракта. Несколько ниже эффективность альбендазола в этой дозе наблюдалась против нематодир, буностом, стронгилоидов и трихоцефал. В дозе 10 мг/кг препарат показал 100%-ную эффективность против взрослых фасциол [180].
В дальнейшем, альбендазол в дозах 3,5-15 мг/кг и выше был испытан на многих видах животных и его эффективность против гельминтов подтвердили многие отечественные и зарубежные исследователи [3, 14, 15, 42, 57, 70, 100, 112, 122, 141, 156, 166, 182, 183, 187, 191].
Среди лекарственных форм альбендазола наибольшее признание получили порошки, гранулы, таблетки, болюсы для перорального применения животным [18].
В нашей стране высокую антигельминтную эффективность различных лекарственных форм альбендазола против гельминтозов овец отмечали в своих исследованиях многие ученые.
Была установлена высокая антигельминтная эффективность вальбазена (альбендазола) в форме 1,9%-ной суспензии при диктиокаулезе, мониезиозе, фасциолезе и стронгилятозах желудочно-кишечного тракта овец [17]. Препарат в дозе 4,75 мг/кг (по действующему веществу) показал против взрослых Fasciola hepatica ИЭ (интенсэффективность), равную 94,5+3,1%; в дозе 3,8 мг/кг против Dictyocaulus filaria, Nematodirus spp. и стронгилят других видов ИЭ составила соответственно 98,7+0,8; 100 и 98,8%; в дозе 2,6 мг/кг получена 100%-ная эффективность препарата против Moniezia expansa.
Были испытаны болюсы профтрил-каптек пролонгированного действия фирмы SmithKline Beecham (США), содержащие 3,8 г альбендазола для лечения овец, инвазированных желудочно-кишечными нематодами [16]. При введении в рубец болюсы с альбендазолом резко подавляли развитие кишечных стронгилят у зараженных овец, а у овцематок обеспечивали снижение интенсивности инвазии в течение 2,5-4 месяцев в 3-6 раз.
В опытах, проведенных на овцах, инвазированных мониезиями, альбендазол в форме 2,5%-ной суспензии в дозах 0,1 и 0,15 мл/кг массы животного проявил 87,5%-ную эффективность, а в дозе 0,2 мл/кг – эффективность составила 100% [102].
Хороший терапевтический эффект получен при пероральном применении 10%-ной и 2,5%-ной суспензии альбендазола (альвета) в дозах соответственно 1,5 мл/10 кг и 6,0 мл/10 кг на спонтанно инвазированных Dicrocoelium lanceatum овцах. Было установлено, что ИЭ дегельминтизации 10%-ной суспензией составила 91,4%, а 2,5%-ной – 88,6% [66].
В двух овцеводческих хозяйствах были испытаны препараты альбен (альбендазол) и альбен супер при нематодозах, цестодозах и трематодозах овец при однократном пероральном применении в дозах соответственно 7,5 и 7,0 мг/кг массы животного [23]. Препарат альбен показал 100% эффективность против гемонхов и хабертий, трихостронгил – 80%, до 60% против нематодир и буностом. ЭЭ альбена супер составила при фасциолезе 80%, мониезиозе 85%, нематодирозе, буностомозе, трихостронгилезе – 65-75%, гемонхозе и хабертиозе - 100%. Препараты оказались неэффективными против дикроцелий и трихоцефал.
При исследовании персистентного действия препаратов альбендазола против стронгилоидоза овец были испытаны альвет порошок групповым методом в смеси с небольшим количеством корма в дозе 5,0 мг/кг массы животного по ДВ (1,0 мг препарата/10 кг); альвет суспензия 10% индивидуально, перорально в дозе 5,0 мг/кг массы животного по ДВ (0,5 мл препарата/10 кг); рикобендазол–индивидуально, внутримышечно, в дозе 2,5 мг/кг массы животного по ДВ (0,5 мл препарата на 10 кг) [96]. Полученные результаты опытов позволили установить высокую степень персистентного действия всех испытанных лекарственных форм альбендазола – 4 месяца для порошка и суспензии и 5 месяцев для инъекционного раствора.
Влияние разных лекарственных форм альбендазола на прирост массы тела ягнят было изучено при стронгилоидозе [95]. Альвет применяли перорально в смеси комбикормом в дозе 5,0 мг/кг по ДВ, альвет суспензию 2,5% – перорально индивидуально в дозе 5,0 мг/кг, альвет суспензию 10% в дозе 5,0 мг/кг – перорально, индивидуально и рикобендазол 5% – внутримышечно в дозе 2,5 мг/кг. Было установлено, что дегельминтизация разными лекарственными формами оказала положительное влияние на среднесуточный прирост массы тела ягнят при спонтанном заражении их Strongyloides рapillosus. Однократная дегельминтизация п о з в о л и л а з а 4 м е с я ц а получить дополнительный прирост от 1,74 до 2,70 кг, причем наиболее существенный прирост у ягнят наблюдали после применения рикобендазола.
При спонтанном мониезиозе овец разного возраста была испытана 10%-ная суспензия альбендазола в дозе 0,5 мл/10 кг массы животного в сравнении с препаратом фебтал, содержащим 22% фенбендазола [79]. Проведенные исследования показали, что экстенсэффективность лечения овец разного возраста суспензией альбендазола колебалась от 33 до 100%.
Альбендазол (альбен таблетки) был испытан на ягнятах в возрасте 4–7 месяцев, естественно инвазированных буностомами, нематодирами, трихостронгилюсами, хабертиями, гемонхами, мониезиями и частично тизаниезиями и авителлинами [41]. Таблетки применяли в дозах 5,0 и 7,0 мг/кг массы животного, внутрь, без голодной диеты. В результате проведенных исследований экстенс- и интенсэффективность (ЭЭ и ИЭ) таблеток в дозе 5 мг/кг против стронгилят пищеварительного тракта составили 90,0 и 96,0%; против аноплоцефалят – 94,0 и 98,0%; в дозе 7,0 мг/кг соответственно 98,0; 100 и 98,0; 100%. Терапевтическая эффективность микрокапсулированного 15% альбендазола плюс в сравнении с базовым 99% альбендазолом была определена при нематодозах желудочно-кишечного тракта овец [2]. Микрокапсулированный альбендазол применяли в дозах 15,0 и 20,0 мг/кг, а базовый препарат – в дозах 3,0 и 3,5 мг/кг по ДВ. Проведенные опыты показали, что микрокапсулированный альбендазол в дозе 15,0 и 20,0 мг/кг показал ЭЭ против стронгилят, равную 86,6–100%, а против нематодир соответственно – 73,3 и 93,3%. ЭЭ базового препарата в дозе 3,0 мг/кг против стронгилят и нематодир составила соответственно 70–80%, в дозе 3,5 мг/кг – 100%.
На овцах, спонтанно инвазированных гастроинтестинальными нематодами, испытана эффективность препаратов на основе альбендазола и фенбендазола, приготовленных по нанотехнологии с использованием адресной доставки Drug Delivery System [19]. Полученные результаты испытаний комплексов альбендазола 1 и 2 при нематодозах овец в дозе 1,0 мг/кг массы животного (по ДВ) при однократном, пероральном применении показали соответственно ЭЭ, равную 77,8 и 100%. Базовый препарат (альбендазол) в дозе 10 м/кг массы животного (по ДВ) проявил эффективность против нематодирусов, равную 99,2 % и 100% против других желудочно-кишечных стронгилят.
Параметры эффективности композиции в форме микропорошка альбендазола и фенбендазола в смеси с мелкодисперстным цеолитом–пегасином (алфен и пановерм) в дозах соответственно 15 и 30 мг/кг при однократном назначении ягнятам, инвазированным эзофагостомами, нематодирами, буностомами, мониезиями, показали ЭЭ, равную 100% [28].
На овцах, спонтанно инвазированных мониезиями, при однократном пероральном назначении супрамолекулярных коплексов альбендазола 1 и 2 в дозе 1,0 мг/кг массы животного (по ДВ) в сравнении с субстанцией альбендазола в дозе 10 мг/кг получена ЭЭ, равная 80 и 100%, т. е. эффективность супрамолекулярных комплексов альбендазола была в 7-10 раз выше эффективности базового препарата альбендазола [21].
Эффективность риказола при гельминтозах овец
Полученные результаты испытания риказола при легочных стронгилятозах овец представлены в таблице 2 и свидетельствуют о высокой эффективности испытанного препарата в дозе 4,0 мг/кг по ДВ (2,0 мл на 50 кг массы животного) при диктиокаулезе овец.
Антигельминтная эффективность риказола при нематодирозе и других стронгилятозах пищеварительного тракта ягнят
Препарат Число животных Освободилось от инвазии, голов Среднее число личинок нематод в 1 г фекалий, экз. Снижениечисла личинок в фекалиях,% до лечения после лечения Диктиокаулез Риказол Контрольная группа 12 12 12 0 78,6±6,877,2±6,9 079,2±7,8 100 0 Мюллериоз Риказол Контрольная группа 87 5 96,7±8,6 93,8±7,6 13,7±2,6 96,6±8,3 85,82 0 Протостронгилез Риказол Контрольная группа 5 4 2 79,6±7,7 81,4±8,0 12,9±2,7 84,3±8,3 84,70 Через 15 суток после введения препарата овцы опытной группы полностью освободились от диктиокаул, о чем свидетельствует отсутствие личинок нематод в фекалиях животных. Зараженность животных контрольной группы в период опыта существенно не изменялась. Следовательно, риказол в дозе 4,0 мг/кг по ДВ (2,0 мл на 50 кг массы животного) показал 100%-ную эффективность при диктиокаулезе овец.
Эффективность препарата в испытанной дозе при мюллериозе овец составила 85,82%, а при протостронгилезе 84,70%, что указывает на высокую устойчивость мюллерий и протостронгил к действию препарата и необходимости повышения дозы риказола при этих гельминтозах.
Следует отметить, что после лечения у овец не отмечали клинических признаков диктиокаулеза. Результаты исследований эффективности риказола против мониезий ягнят представлены в таблице 3 и указывают, что эффективность препарата зависит от дозы. С увеличением дозы препарата его эффективность повышалась. Так, риказол в дозе 5,0 мг/кг по ДВ (2,5 мл на 50 кг массы животного) показал 100%-ную эффективность против мониезий. Эффективность препарата в дозах 3,0 и 4,0 мг/кг по ДВ (1,5 и 2,0 мл на 50 кг массы животного) составила соответственно 93,59 и 99,93% (таблица 3). Зараженность животных контрольной группы в период опыта существенно не изменялась. Следовательно, дозу препарата 5,0 мг/кг по ДВ (2,5 мл на 50 кг массы животного) при мониезиозе овец можно считать терапевтической.
Группа животных Препарат Числоживотныхв опыте Дозапрепарата,мг/кг по ДВ Освободилось от инвазии после лечения, голов Среднее число яиц мониезий в 1 г фекалий, экз. Снижение числа яиц мониезий,% до опыта после лечения Опытная Опытная Опытная Контрольная Риказол Риказол Риказол 10 10 10 10 3,0 4,0 5,0 7 9 10 0 191,4±17,3 192,0±16,8 189,6±17,4 190,5±17,0 12,4±2,5 1,5±0,4 0 193,4±17,2 93,5999,93100 2.2.1.4. Овоцидные свойства риказола
Полученные результаты исследований овоцидных свойств риказола в дозе 4,0 мг/кг по ДВ (2,0 мл на 50 кг массы животного) показали, что после дегельминтизации животных яйца мониезий претерпевают определенные изменения (таблица 4).
Так, на первые сутки после введения препарата в фекалиях овец 43,45% яиц мониезий были нежизнеспособными, что подтверждено результатами исследований морфологии и структуры яиц и в тесте с раствором йода.
Через двое суток после лечения животных 65,97% яиц цестод были нежизнеспособными. Это явление более интенсивно наблюдали на 3-е сутки после его применения. На этот срок 76,35% яиц мониезий в фекалиях леченых овец оказались нежизнеспособными. В последующие сроки после лечения яиц мониезий в фекалиях овец не обнаруживали.
Испытание риказола в различных хозяйствах, неблагополучных по аноплоцефалятозам, вызванным соответственно A. centripunctata и Th. giardia, показали различную степень эффективности препарата в одной и той же дозе против разных видов аноплоцефалид (таблица 5). Десять из 12 овец, инвазированных A. сentripunctata, освободились после введения препарата в дозе 4,0 мг/кг по ДВ (2,0 мл на 50 кг массы животного). Количество яиц авителлин снизилось с 144,7±8,7 до 5,6±0,8 экз., т.е. на 96,13%.
Более высокая эффективность (99,22%) получена нами при испытании препарата в хозяйстве, неблагополучном по тизаниезиозу. Количество яиц тизаниезий в фекалиях овец через 10 суток после дегельминтизации снизилось с 127,5±7,7 до 1,0±0,3 экз.
Антигельминтная эффективность риказола в дозе 4,0 мг/кг по ДВ против аноплоцефалят разных видов в опыте «критический тест» Вид гельминта Число животных Освободилосьот инвазиипосле лечения,голов Среднее число яиц цестод в 1 г фекалий, экз. Снижение числа яиццестод в фекалияховец, % до лечения после лечения Avitellinaе centripunctataTh. giardi 12 10 10 8 144,7±8,7127,5±7,7 5,6±0,8 1,0±0,3 96,13 99,22 Таким образом, риказол в дозе 4,0 мг/кг по ДВ (2,0 мл на 50 кг массы животного) эффективен при аноплоцефалятозах овец, вызванных разными видами аноплоцефалид. Эффективность препарата составила против авителлин 96,1% и тизаниезий 99,2%. Полученные результаты испытания риказола при дикроцелиозе овец представлены в таблице 6. Так, риказол в дозе 4,0 мг/кг по ДВ (2 , 0 м л н а 5 0 к г м а с с ы животного) показал низкую эффективность против дикроцелий (63,9%). Эффективность препарата в дозах 6,0 и 8,0 мг/кг по ДВ (3,0 и 4,0 мл на 50 кг массы животного) составила против дикроцелий соответственно 70,29 и 85,96% (таблица 6).
Следовательно, риказол при дикроцелиозе овец надо применять в дозе 8,0 мг/кг по ДВ (4,0 мл на 50 кг массы животного).
Результаты испытания риказола при трихоцефалезе овец представлены в таблице 7 и свидетельствуют, что его эффективность носит дозозависимый характер. Препарат в дозах 4,0; 6,0 и 8,0 мг/кг по ДВ (2,0; 3,0 и 4,0 мл на 50 кг массы животного) при трихоцефалезе овец показал эффективность соответственно 73,98; 85,48 и 96,58% по снижению количества яиц трихоцефал в фекалиях.
Токсикологические свойства риказола
Результаты исследований, полученные при анализе образцов сыворотки крови овец, отобранных через 0,5; 1,0; 3; 5; 8; 12; 24 и 36 часа, после однократного, внутримышечного введения риказола в дозе 8,0 мг/кг по ДВ (1,0 мл на 12,5 мг/кг массы животного), представлены в таблице 44.
Сумарное содержание сульфоксида и сульфона альбендазола в сыворотке крови овец после внутримышечного применения препарата риказол (выборка из трех животных) t, ч 0 0,5 1 3 5 С1, нг/мл LOD 464,0 580,4 1040,8 1054,2 С2, нг/мл LOD 307,7 674,0 1209,4 1615,8 С3, нг/мл LOD 369,7 468,5 881,6 946,9 Сср., нг/мл LOD 380,5 574,3 1043,9 1205,6 RSD, % 0 20,7 17,9 15,7 29,8 t, ч 8 12 24 36 С1, нг/мл 1357,9 1027,3 83,3 LOD С2, нг/мл 1161,1 859,5 50,7 LOD С3, нг/мл 1208,8 804,9 86,2 LOD Сср., нг/мл 1242,6 897,2 73,4 LOD RSD, % 8,3 12,9 26,9 0 Как видно из таблицы 44, вещества группы альбендазола (альбендазол сульфоксид и альбендазол сульфона) обнаруживались в сыворотке крови животных уже через 0,5 часа после введения препарата и сохранялись в ней не менее 24 часа. Максимальная их концентрация была отмечена через 8 часов после внутримышечного введения препарата и составила в среднем 1242,6 нг/мл, а затем плавно снижалась, и к 24 часам уменьшилась в среднем до 73,4 нг/мл. При исследовании проб сывороток крови овец через 36 часов после инъекции препарата вещества группы альбендазола (альбендазол сульфоксид, альбендазол сульфон) в ней не обнаруживали.
На основании полученных экспериментальных днных рассчитывали основные фармакокинетические параметры альбендазол сульфона (суммарного содержания альбендазол сульфоксида и сульфона): Ке - константа элиминации, t1/2 - период полувыведения, Vd - объем распределения, CL – общий клиренс, Cmax – максимальная концентрация, tmax – время ее достижения, AUC – площадь под фармакокинетической кривой.
Содержание остаточных количеств веществ группы альбендазола (альбендазол сульфоксида, альбендазол сульфона) в органах и тканях овец после введения риказола Результаты исследований, полученные при анализе экстрактов ткани печени, почек, легких, мышц, сердца, жира отобранных через 25; 30 и 40 суток после однократного, внутримышечного применения препарата в дозе 8,0 мг/кг по ДВ (1,0 мл на 50 кг массы животного) представлены в таблице 46.
Определение содержания веществ группы альбендазола (альбендазол сульфоксида и альбендазол сульфона) в органах и тканях овец после однократного, внутримышечного введения препарата показало, что антигельминтик хорошо проникал в различные органы и ткани (печень, почки, легкие, мышцы, сердце, жировая ткань) и продолжительное время регистрировался в них.
Согласно полученным результатам, вещества группы альбендазола (альбендазол сульфоксид и альбендазол сульфон) обнаруживаллись во всех исследованных тканях овец через 25 суток после инъекции препарата в дозе 8,0 мг/кг по ДВ (что соответствует 1,0 мл на 12,5 кг массы животного).
Наибольшое количество их регистрировали в мышцах в месте инъекции препарата, где средняя концентрация составила 667,9 нг/г. В жировой ткани и почках содержалось в среднем, соответственно 206,1 и 188,7 нг/г, в тканях легких и сердца было обнаружено соответственно 164, и 162,5 и меньше всего найдено в скелетных мышцах - 66,1 нг/г. На 30 и 40 сутки после применения препарата вещества группы альбендазола (альбендазол сульфоксид и альбендазол сульфон) в органах и тканях не обнаруживались. Таким образом, продукты убоя овец можно рекомендовать использовать для питания спустя 30 суток после применения препарата риказол.
Результаты комиссионного испытания антигельминтной эффективности препарата в дозе 4,0 мг/кг по ДВ (2,0 мл на 50 кг массы животного) при смешанной инвазии овец, вызванной мониезиями и стронгилятами, подтвердили 100%-ную эффективность против стронгилят и 99,2%-ную эффективность против мониезий овец. Препарат хорошо переносился животными.
Результаты производственного испытания риказола при смешанной инвазии овец представлены в таблице 47 и свидетельствуют о широком спектре действия и высокой эффективности препарата.
Экстенсинвазированность овец до опыта составила нематодирусами 42,6%, другими стронгилятами пищеварительного тракта 50,8%, диктиокаулами 12,5% и трихоцефалами 7,2%. Через 16 суток после применения препарата в дозе 4,0 мг/кг по ДВ инвазированность овец значительно снизилась и оказалась равной нематодирусами 0,57%, другими видами желудочно-кишечных стронгилят 1,13% и трихоцефалами 1,13%. Таким образом, ЭЭ препарата составила при диктиокаулезе 100%, нематодирозе 98,67%, других стронгилятозах пищеварительного тракта 97,78% и трихоцефалезе 84,31%. Препарат хорошо переносился животными и не вызывал болезненности при введении.
Фармакокинетика веществ группы альбендазола (альбендазол сульфоксида, альбендазол сульфона) в сыворотке крови овец
Исследование раздражающего действия риказола показало, что однократное нанесение препарата на выстриженные участки кожи крыс в дозах 2500; 5000; 10000; 15000 и 20000 мг/кг массы животного не вызывало каких-либо реакций со стороны мягких тканей, подкожной клетчатки и кожи. Покраснения кожи, расчесов, отека, утолщения кожной складки и болезненной реакции при пальпации места обработки не наблюдали.
При нанесении одной капли риказола на конъюнктиву кроликам через 1 час было отмечено незначительное покраснение слизистой оболочки, которое оценивалось в 1 балл и полностью проходило через сутки. Других признаков раздражающего действия препарата отмечено не было.
Исследования подострой токсичности показали, что при однократном внутримышечном введении риказола крысам в течение 7 суток в дозах 250, 125 и 50 мг/кг (1/10, 1/20 и 1/50 от ЛД50), получившим суммарные дозы препарата 1750; 875 и 350 мг/кг, внешние признаки токсикоза наблюдали только в дозе 1750 мг/кг. Динамика прироста массы тела В таблицах 19 и 20 приведены результаты исследований динамики прироста массы тела и массовых коэфициентов у крыс опытных и контрольной групп. Таблица 19. Динамика прироста массы тела у крыс при введении риказола в трех дозах в течение 7 суток подряд (п = 10)
Как показали результаты исследований, динамика прироста массы к исходной массе тела крыс была достоверно снижена против контроля и составила 84,10% только у особей, которым вводили препарат в дозе 250 мг/кг и получившие суммарную дозу 1750 мг/кг. Дозы 1/20 и 1/50 от ЛД50 достоверно не изменяли приростов животных. Массовые коэффициенты Таблица 20. Влияние риказола на массовые коэффициенты органов белых крыс (п=10)
Значения относительной массы органов крыс, получивших суммарную дозу препарата 350 мг/кг, не подвергались достоверным изменениям. Разница достоверных изменений массовых коэффициентов серца, легких и селезенки наблюдалась от суммарной дозы 1750 мг/кг и составляла соответственно 13,7; 60,2 и 45,0%, в то время как введение суммарной дозы 750 мг/кг обусловливало снижение массовых коэффициетов только легких и селезенки соответственно на 13,5% и 31,0% по отношению к контролю.
Гематологические показатели крови Результаты определения гематологических показателей белых крыс обобщены в таблице 21 и на рисунках 3–6. Таблица 21. Влияние риказола на гематологические показатели крови крыс при однократном внутримышечном введении препарата в течение 7 суток подряд (п=10) Показатель Значение показателя при введении препарата в дозах, мг/кг (по препарату) Контроль
Введение препарата в дозе 250 мг/кг привело к уменьшению числа эритроцитов на 3,8%, гематокрита на 15,4%, гемоглобина на 16,5% и лейкоцитов на 76,2% по сравнению с показателями крыс контрольной группы. В лейкограмме наблюдали увеличение числа моноцитов и лимфоцитов соответственно на 80,9 и 36,2% и уменьшение числа сегментоядерных нейтрофилов на 88,4% по сравнению с показателями контрольных животных.
При внутримышечном введении препарата в дозе 125 мг/кг в периферической крови крыс отмечали уменьшение содержания эритроцитов на 10,7%, лейкоцитов на 38%. В лейкограмме у этих животных наблюдали уменьшение числа сегментоядерных нейтрофилов на 75,1% по сравнению с показателями контрольных крыс.
В тоже время доза препарата 50 мг/кг достоверных изменений в крови крыс не вызывала. Биохимические показатели крови В таблице 22 приведены результаты определения биохимических показателей сыворотки крови крыс при внутримышечном введении препарата в течение 7 суток. введении риказола в течение 7 суток подряд Показатель Значение показателя при введении препарата в дозах, мг/кг (по препарату) Контроль
Однократное внутримышечное введение препарата крысам в дозах 250 г и 125 мг/кг в течение 7 суток подряд привело к статистически достоверному снижению уровней общего билирубина на 58,4 и 30,6%, прямого билирубина на 58,8%, АЛТ на 39,6 и 36,5%, мочевины на 17,9 и 4,8%, общего белка на 12,8 и 8,3%, щелочной фосфатазы на 70,4 и 19%, амилазы на 87,9 и 76,3%, лактатдегидрогеназы 9,3 и 11, 5% и повышению глюкозы на 96,7 и 36,4% по сравнению с показателями контрольной группы животных. Изменения в картине крови у крыс свидетельствуют о прямом угнетаюшем действии препарата в дозах 250 и 125 мг/кг на кроветворную функцию костного мозга. От дозы 250 мг/кг одна крыса пала, еще у одной регистрировали угнетение и тремор. При патологоанатомическом вскрытии погибшей особи были выявлены точечные кровоизлияния на сердце и в легких.
Макро- и микроскопическое исследование тканей При макроскопическом исследовании печени, селезенки, сердца, легких, почек, мышц бедра после введения риказола крысам в трех дозах не было замечено каких-либо отличий во внешнем виде органов.
Печень во всех группах крыс была молочно-шоколадного цвета с выраженным рисунком дольчатого строения, более темные участки ткани соответствовали центральным зонам долек, кровеносные сосуды не были видны. Легкие по внешнему виду воздушные, покрыты тонкой плеврой, имели вид пористой, губчатой структуры бело-розового цвета. Почки не имели ярко выраженых отличий, они были бобовидной формы, имели характерный темно-красный цвет, плотного на ощупь строения. Сердце крыс имело темно-красный цвет и форму неправильного конуса. Хорошо были видны протоки артериальных и венозных вен. Наружная поверхность селезенки была выпуклой, имела блестящую гладкую поверхность темно-красного цвета с сероватым оттенком. Мышцы бедра при визуальном наблюдении не имели выраженной патологии. Рисунок мышечных волокон, саркоплазма и сарколемма хорошо просматривались. При микроскопическом исследовании печени, легких, почек, сердца, селезенки и мышцы бедра от крыс, отмечено следующее (рис 7).