Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 8-26
Глава 2. Материалы и методы исследования 25-39
Глава 3.Результаты исследований 39-86
3.1. Противоопухолевая активность пектина на некоторых перевиваемых опухолевых штаммах 39-50
3.2. Острая токсичность низкомолекулярного пектина и патоморфология органов крыс при воздействии разных доз пектина .51-57
3.3. Противоопухолевый эффект пектина в условиях цитостатической терапии 58-66
3.4. Патоморфологические изменения в перевиваемой опухоли при воздействии пектина, циклофосфана и при их сочетанном применении 66-86
Заключение 86-92
Список литературы 94
- Противоопухолевая активность пектина на некоторых перевиваемых опухолевых штаммах
- Острая токсичность низкомолекулярного пектина и патоморфология органов крыс при воздействии разных доз пектина
- Противоопухолевый эффект пектина в условиях цитостатической терапии
- Патоморфологические изменения в перевиваемой опухоли при воздействии пектина, циклофосфана и при их сочетанном применении
Введение к работе
Актуальность темы. Злокачественные новообразования являются одной из самых серьезных медико-биологических и социально-экономических проблем. По прогнозам ВОЗ (World Cancer Report, 2003) онкологическая заболеваемость в 2050 г. составит 24 млн., а смертность - 16 млн. регистрируемых случаев.
Лекарственная терапия (химиотерапия) опухолей является одной из важных составляющих любой антираковая программы. В настоящее время в клинической практике используется более сотни противоопухолевых препаратов. Однако общая эффективность химиотерапии все еще недостаточно результативна, а спектр онкологических заболеваний, чувствительных к химиотерапии, ограничен. Создание новых активных противоопухолевых препаратов или препаратов - модификаторов биологических реакций, (Дыгай А.М. и др., 2010) позволит расширить спектр опухолей, при которых результаты химиотерапии пока еще не столь значимы (Трещалина Е.М., 2009).
Природные полисахариды представляют определенный интерес для
практической онкологии, как соединения, обладающие противоопухолевым потенциалом. Полисахариды способны не только тормозить рост экспериментальных опухолей (Шилова Н.В., 2004), но и потенцировать противоопухолевую активность конвенциальных цитостатиков (Лопатина К.А., 2007, Сафонова Е. А., 2011)
Полисахариды используются в качестве полимерной стабилизирующей оболочки при создании наноразмерных металлокомпозитов со свойствами легко растворимых биоактивных материалов полифункционального назначения (Брусенцов Н.А. и др., 2000; Помогайло А.Д. и др., 2000). Установлено, что противоопухолевые свойства платиносодержащих нанокомпози-тов стали более выраженными за счет стабилизации наночастиц полисахаридами (Эстрела-Льопис В.Р. и др., 2010). Такое предположение вполне обосновано, так как химико-биологические свойства пары: синтон-фармакон достаточно точно прогнозируются.
В качестве синтона для синтеза и формирования наноразмерных компо
зитов используется декстран (Суздалев И.П., 2005), карбоксиметил-
декстран, карбоксиметилцеллюлоза, арабиногалактан (Грищенко Л.А., 2007).
Значительно реже для создания нанокомпозитов применяется растительный
полисахарид - пектин
Пектины – это широкий класс природных соединений, обладающих полифункциональными свойствами. Важнейшими из них являются: высокая биодоступность, хорошая растворимость и низкая токсичность. Спектр фармакологических эффектов в эксперименте весьма широк и охватывает практически все значимые направления лекарственной терапии, как таковой (Оводов Ю. С., 2009; Хотимченко М. Ю., 2011; Попов С.В. и др.,2013).
Пектины исследуются в качестве потенциальных противоопухолевых препаратов. Однако результаты этих исследований не однозначны. Так, пектины ольхи клейкой у одних исследователей тормозили рост экспериментальных опухолей, ингибируя процессы метастазирования (Трещалина Е.М., 2009), у других - они же стимулировали этот рост, снижая противометастатическое действие циклофосфана (Разина Т. Г., 2006).
Известны противоопухолевые свойства пектинов, однако сведений о возможности использования их в качестве средств, повышающих эффективность химиотерапии злокачественных новообразований, ограниченное количество (Ефимова Л.А. и др., 2008). Типична оценка эффекта взаимодействия пектина с цитостатиком такого рода редких исследований в виде констатации факта кратного снижении объема опухоли или снижении числа животных с метастазами.
Тогда как, в фармакологии оценка взаимодействия давно реализуется с позиций определения характера синергии и ее вариантов. При этом возможны два вида усиления взаимодействия препаратов. Аддитивное действие – это суммарный эффект комбинации препаратов, равный сумме эффектов действующих компонентов. При потенцированном действии компоненты смеси действуют так, что одно вещество усиливает действие другого. Эффект комбинированного действия при потенцировании выше аддитивного (Кукес В.Г. и др., 2002).
Однако на практике реализация оценки характера взаимодействия препаратов вызывает серьезные затруднения в силу громоздкости расчетов (Смирнов И.В. и др.,2011; Khosit P. e.a., 2008; Chou T.C. e.a., 1983).
Таким образом, научный интерес к наноразмерным пектинам не случаен. С одной стороны у полимеров с массой в сотни килодальтон регистрируется противоопухолевый потенциал, с другой стороны, практически ничего не известно о таковом у низкомолекулярных производных массой менее 20 кДа. Кроме того, не освещены вопросы оценки характера фармакологического взаимодействия наноразмерного пектина и конвенциального цитостатика в связи с отсутствием простой и визуализируемой методики оценки.
Эти неосвещенные аспекты определили актуальность данного исследования.
Цель работы:
Экспериментальная оценка противоопухолевого потенциала низкомолекулярного, низкоэтерифицированного пектина на моделях перевиваемых опухолей.
Задачи исследования:
-
Провести первичный скрининг противоопухолевой активности пектина на некоторых моделях перевиваемых опухолей крыс;
-
Определить основные параметры острой токсичности пектина с изучением патоморфологических изменений крови и внутренних органов крыс;
-
Изучить характер взаимодействия сочетанного применения пектина и циклофосфана на высокочувствительном штамме перевиваемых опухолей;
-
Изучить патоморфологические изменения в перевиваемой опухоли при изолированном и сочетанном применении пектина и циклофосфана.
Научная новизна работы
Экспериментально установлено, что низкомолекулярный, низкоэтерифи-цированный пектин молекулярной массой 15 кДа соответствует критериям отбора веществ, перспективных для дальнейших углубленных исследований.
Низкомолекулярный, низкоэтерифицированный пектин относится к классу безопасных, нетоксичных соединений. Так как, согласно ГОСТа 12.1.007-76 и классификации Ходжа и Стернера вещества, у которых LD50 > 10-15 г/кг относятся к относительно безопасным веществам. Значения LD50 у пектина были в 5 - 7 раз выше нормативных значений. Терапевтический индекс у пектина составил внушительную величину в 115.
Совместное применение пектина и циклофосфана проявляется в форме потенцирования противоопухолевого действия, т.к. эффект их совместного применения существенно выше эффектов изолированного применения каждого из них.
Практическая значимость полученных результатов
Полученные данные являются основанием для дальнейшего углубленного исследования механизма потенцированного противоопухолевого эффекта пектина и циклофосфана с целью разработки новых способов лекарственной терапии злокачественных новообразований.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
Низкомолекулярный, низкоэтерифицированный пектин молекулярной массой 15 кДа обладает противоопухолевой активность на моделях перевиваемых опухолей и удовлетворяет критериям отбора веществ, перспективных для дальнейших углубленных исследований.
Низкомолекулярный, низкоэтерифицированный пектин относится к классу безопасных, нетоксичных соединений.
Низкомолекулярный, низкоэтерифицированный пектин при совместном применении с циклофосфаном потенцирует противоопухолевые свойства последнего на карциносаркоме Уокера 256.
Личный вклад соискателя. Личное участие автора диссертационной работы охватывает аналитическую обработку литературных источников и всех проведенных исследований по теме диссертации. Автором лично выполнены экспериментальная часть работы на животных и подготовка макропрепаратов для
морфологических исследований, статистическая обработка, набор экспериментального материала.
Апробация результатов диссертации: Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на межкафедральной конференции КГМА им.И.К.Ахунбаева 02.03.2016 г.
По результатам диссертационного исследования опубликовано 5 статьей и подана заявка на патент № 20150117.1 от 03.12.2015г.
Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 110 страницах машинописного текста, состоит из введения, 3 глав, выводов и списка литературы. В диссертации представлены 18 таблиц и 55 рисунков. Список литературы представлен 110 источниками.
Противоопухолевая активность пектина на некоторых перевиваемых опухолевых штаммах
Выделение пектина из растительного сырья проводится также ферментативным путем с последующим осаждением хлоридом кальция или этанолом, в результате чего частично разрушается исходная структура нативного пектина. Однако выделенный пектин в той или иной степени оказывается загрязненным балластными веществами- ионами поливалентных металлов, белками, сахарами. Дальнейшая очистка пектина может быть проведена различными физико-химическими методами - переосаждением, действием комплексонов, мембранными [18] и сорбционными методами [19]. Показано, что метод ультрафильтрации с последующей диафильтрацией позволяет снизить содержание сахаров и зольных элементов в пектине. Однако при этом, наряду с удалением балластных веществ, происходит частичная конверсия пектина в пектин-пектатные смеси за счет повышения селективности мембран к ионам водорода по сравнению с ионами натрия. Поэтому для кондиционирования пектина его переводят в кислотную форму, которое может быть осуществлено обработкой растворов Н-формой катионита. Катионитная обработка, однако, не решает проблемы удаления из пектина остатков белков [20].
Перспективность практического использования пектиновых веществ в качестве экологически безопасных природных биоматериалов определяется значительными объемами сырьевых ресурсов, к которым относятся яблочные выжимки, сердцевины корзинок подсолнечника, свекловичный жом – отходы консервной, сахарной и масложировой промышленностей. По подсчетам специалистов в России, только в рамках крупных и средних предприятий консервной отрасли в последние годы образовывались отходы в количествах, эквивалентных производству пектина до 30 тыс. тонн в год.
Одним из важнейших свойств пектинов является их желирующая способность. Желирование – процесс, при котором горячий пектиносодержащий раствор при охлаждении образует плотное тело заданной формы, связывая при этом большое количество жидкости.
Текстура образуемого геля и скорость желирования тесно связаны c показателем степени этерификации (СЭ). Высокоэтерифицированные (ВЭ) пектины желируют при более высоких температурах и быстрее, чем пектины с меньшей СЭ. Максимальная желирующая способность при минимальной скорости желирования наблюдается при СЭ в пределах 60%. Высокоэтерифицированные пектины образуют гели в присутствии сахара, кислот и при содержании сухого вещества не менее 55%. Низкоэтерифицированные пектины (НЭ) относительно независимо от присутствия сахара и кислот способны к образованию гелей с двухвалентными катионами, например, Са 2+ (ионы кальция). Способность НЭ пектинов желировать при низком содержании сухих веществ (сахара) и высоких значениях рН используют в производстве молочных и диетических продуктов, например, для страдающих сахарным диабетом[]. Комплексообразование
Комплексообразующая способность пектина основана на его взаимодействии с ионами тяжелых и радиоактивных металлов. Благодаря этому свойству пектина, его включают в рацион питания лиц, находящихся в среде, загрязненной радионуклидами, и имеющих контакт с тяжелыми металлами. Оптимальная профилактическая доза пектина составляет 4г в сутки, а в условиях радиоактивного загрязнения - не менее 15-16г.[27].
Пектины в медицине и фармации. Пектины обладают широким спектром физиологической активности [21], в том числе иммуномодулирующим действием [22]. Хорошо известно и гастропротективное действие пектинов [23]. Пектиновые вещества оказывают гипохолестеринемический [24], антикоагулянтный [25], энтеросорбционный [26, 27], противовирусный [28] эффекты. Биоадгезивная способность пектинов использована для получения лекарственного препарата на основе лактоферрина, гликопротеина молока, который обладает бактерицидным действием в лечении хронического воспаления при стоматите [29]. При этом было показано, что НМ-пектины лучше всего подходят для получения биоадгезивных таблеток, поскольку, наряду с высокой биоадгезивной силой, обладают способностью освобождать действующее лекарственное начало.
Гелевые матрицы на основе пектиновых веществ широко используются в фармацевтической промышленности как системы инкапсулирования с последующим освобождением активных веществ. Для создания систем инкапсулирования и приготовления покрытий предлагаются биополиэлектролитные мультислои [35]. Изучено образование мультислоев при взаимодействии цитрусового пектина (СМ=36,6 %) со слабыми противоположными заряженными полиэлектролитами: поли-L-лизином и хитозаном [36]. Поли-L-лизином можно поперечно сшивать молекулярные сетки пектина и связывать хитозан с поверхностью пектиновой макромолекулы с высокой аффинностью. Пектин и хитозан в соотношении 1,2:1 при рН 5,6 образуют на твердой поверхности чередующиеся слои пектина и хитозана, при этом происходит связывание с поверхностью. Мультислойное образование наблюдается при рН 5,6, когда оба полимера несут заряд на макромолекулах. Толщина индивидуального слоя зависит от концентрации биополимера. Изменение рН, подавляющее заряд одного из полиэлектролитов, приводит к разрушению мультислойной композиции, что свидетельствует о важности электростатического взаимодействия в образовании и стабильности мультислоев [36].
Острая токсичность низкомолекулярного пектина и патоморфология органов крыс при воздействии разных доз пектина
Карциносаркома Уокера Происхождение: Произошла от перевиваемой карциномы 1928 г[]. Трансплантация: Перевивается в 80 - 100% случаев. Гистологическая характеристика: Обладает инфильтративным ростом. Опухолевые узлы в центральных частях подвергаются некрозу с геморрагиями. Опухолевые клетки с низкой степенью дифференцировки. Гиперхромные и гипохромные ядра опухолевых клеток.
Характеристика роста опухоли: Латентный период составляет 10 дней, опухоль растет быстро. Животные погибают в срок от 2 недель до 2 месяцев. Спонтанное рассасывание наблюдается очень редко. Метастазирование: Иногда дает метастазы в лимфатические узлы, реже - в легкие. Испытание препаратов: Для работы с опухолью Уокера лучше всего использовать крыс линии Wistar.
Суспензию клеток перевиваемой карциносаркомы Walker 256 вводили крысам Вистар подкожно, в паховую область бедра, в дозе 50 мг гомогената опухолевых клеток в 0,5 мл изотонического раствора NaCl. Работу с животными проводили с соблюдением принципов гуманности, изложенных в директивах Европейского сообщества (86/609/ЕЕС) и Хельсинкской декларации. Лимфосаркома Плисса (ЛСП) Рисунок 2. Лимфосаркома Плисса. Окраска гематоксилин-эозин, увеличение 400 Искусственно индуцирована в 1958 г. при содержании подопытной крысы-самки на диете с 3,3-дихлорбензидином, в рамках проекта изучения канцерогенной активности данного вещества, проводимого в НИИ онкологии им. проф. Н. Н. Петрова[33]. Настоящая лимфосаркома явилась первым созданным клоном перевиваемых крысиных лимфом в нашей стране, изучение которого продолжается более полувека и не закончено по сегодняшний день.
Гомогенат опухоли для поддержания клона трансплантируется в подкожную клетчатку крысам-самцам в дозе 0,5 см3 взвеси опухолевых клеток. При трансплантации опухолевого материала в указанной дозе, доля заболевших животных равна 75–100 %. Лимфосаркома характеризуется прогрессивным ростом с тенденцией к инвазии в окружающие ткани, прорастанием забрюшинной клетчатки, гематогенным метастазированием и некротизацией В ходе исследований были выявлены метастазы также в подмышечные и паховые лимфатические узлы животного.
Гистологическое изучение ЛСП определило наличие скоплений опухолевых клеток в печени и селезенке. Установлено, что трансплантация гомогената печени животного - опухоленосителя также способна вызвать рост лимфосаркомы. Показано, что опухоль состоит из лимфоидных клеток различной величины, округлой или неправильной формы; выявлено большое количество митозов. При анализе гемограмм у животных с ЛСП установлен незначительный сдвиг лейкоцитарной формулы влево и увеличение количества эритробластов. Первоначально в 1960-х гг. были созданы асцитная и тканевая формы лимфосаркомы. Г. Б. Плисс отметил, что в ряду перевивок опухоли ее асцитная форма была постепенно утрачена по необъяснимым причинам. В литературе содержатся противоречивые данные о необходимом количестве клеток, вызывающих рост ЛСП. Обычно используются высокие дозы, заведомо вызывающие рост опухоли у 100 % животных, вместе с тем 100 % прививаемость опухоли не позволяет точно оценить степень влияния на нее тех или иных факторов.
Перевиваемый штамм опухоли лимфосаркомы Плисса (ЛСП), поддерживаемый in vivo (получен из НИИ онкологии и радиологии Республики Казахстан). Веретеноклеточная саркома крыс С-45 или S – 45. Опухоль индуцирована З.Л. Байдаковой в 1949г. введением диметилбензантрацена в подкожную клетчатку беспородной крысы[48]. Саркома С-45 перевивается на беспородных крысах, самцах весом 120 г подкожно по 0,5 мл взвеси опухолевой ткани на растворе Хенкса (1:3) или физрасворе. Прививаемость на беспородных крысах составляет 95-100%.
Опухоль состоит из плотно расположенных пучков веретеновидных клеток, распространяющихся в разных направлениях. В опухоли много митозов. Ядра опухолевых клеток овально-округлые или вытянутые, хроматин в них представлен в виде зернистых скоплений. Ядрышки крупные, гиперхромные. Цитоплазма опухолевых клеток отличается повышенной базофилией. Опухоль обладает умеренным темпом роста. На 5-8 день диаметр ее достигает 8-15 мм, а на 21-25 день - 40-60 мм. Животные погибают, как правило, на 25-30 день при среднем весе опухоли 37-38 г. Саркома растет равномерно, сезонные колебания в перевиваемости и темпе роста невелики.
Пектин свекловичный получен из лаборатории НИИ прикладной биохимии и машиностроения(г.Москва)[71]. Наноразмерность испытуемого материала достигалась посредством диспергирования нативного свекловичного пектина в шаровой мельнице при 1425 оборотов в минуту (материал шаров и ячейки – карбид вольфрама) в течение 10 минут. В обработанном таким образом пектине содержание D-галактуроновой кислоты составило 83,0%, карбоксильных и метоксильных группы - 14,8 и 4,6 % соответственно, Mw = 15 кДа. (рис. 7 )
ИК-спектры пектина демонстрировали широкие пики поглощения с 3420 см-1 до 3330 см-1 в области высоких частот. Эти пики соответствовали колебанию гидроксильных групп, участвующих в образовании водородных связей. В низкочастотной области (С = О) пик 1750 см-1, пик 1730 см-1 соответствовал поглощению воды и отражал асимметричные колебания при 1630 см-1 ионизированных карбоксильных групп as (COO-). Максимальный пик 1420 см-1 относился к симметричному колебанию группы (COO-). Слабое поглощение при 955 см-1 обусловлено колебаниями (OH)-гидроксильной группы с водородными связями. Полученные ИК-спектры является типичными для пектиновых веществ.[]
Противоопухолевый эффект пектина в условиях цитостатической терапии
Определение острой токсичности пектина проводили согласно «Методическим указаниям по изучению общетоксического действия фармакологических веществ» [50,51,52] на 40 половозрелых крысах линии Wistar обоего пола массой 160-230 г, прошедших карантин в течение 14 суток. Содержание экспериментальных животных осуществлялось в стандартных условиях вивария. Исследования проводились по правилами, принятыми в Страсбурге Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург 18 марта 1986 г). Крысы содержались на обычном рационе при свободном доступе к воде и пище, в условиях нормального температурного и светового режимов.
Все животные были разделены на 4 группы по 10 крыс в каждой. Первая группа животных получала перорально через желудочный зонд однократно или повторно через 3-4-х часовые интервалы в течение суток (в технически максимально возможных дозах) водный раствор пектина в дозе 12000 мг/кг; вторая - в дозе 24000 мг/кг; третья - в дозе 48000 мг/кг; четвертая - в дозе 52000 мг/кг. Общая продолжительность наблюдения за животными после введения исследуемого препарата составила 14 дней. В первый день крысы находились под непрерывным наблюдением. Оценку общего состояния животных при введении экстракта проводили с учетом изменения поведенческих реакций, нервно-мышечной возбудимости, некоторых вегетативных функций, а также измеряли массу тела до введения изучаемого препарата и после окончания периода наблюдения [8]. Для морфологического исследования забой животных и забор биологического материала осуществляли на 7 день после введения препарата, Морфологические изменения исследовали в тканях легких, почек, печени и селезенки из которых вырезали фрагменты ткани размерами 1см х 1см х 1см, предназначенные для гистологического исследования, с последующей фиксацией в 10 % растворе нейтрального формалина. С целью обзорной окраски, гистологические срезы окрашивали гематоксилином и эозином.
Критериями оценки острой токсичности служили картина интоксикации и выживаемость животных. Полученные в результате эксперимента данные обрабатывали методом пробит анализа LD50 LD16 и LD84, а также LD100 по Литчфилду-Уилкоксону в модификации Э.Рота (М.Л.Беленький, 1963).
Полученные цифровые данные подвергнуты статистическому анализу (Лакин Г.Ф., 1980). Математические расчеты выполнены с помощью пакета статистического анализа Microsoft Excel. Вычисляли среднее арифметическое значение (х), ошибку средней (sx). Значимость различий в сравниваемых группах определяли с помощью ґ-кpитеpия Стьюдента-Фишера, F-критерия Фишера и критерия Вилкоксона-Манна-Уитни (Гублер Е.В., 1978). Достоверными считали результаты при уровне значимости/? 0,05.
Для морфологического исследования карциносаркомы Уокера при введении пектина и циклофосфана забой животных и забор биологического материала осуществляли на 2, 7, 14 день после введения препаратов. Ткани фиксировали в 10% забуференном формалине и далее обрабатывали по стандартной методике. Морфологические изменения исследовали на гистологических препаратах опухоли, легких, почек, желудка, печени и селезенки крыс, окрашенных гематоксилин-эозином.
Для морфологического исследования острой токсичности забой животных и забор биологического материала осуществляли на 7 день после введения препарата. Морфологические изменения исследовали на гистологических препаратах тканей легких, почек, печени и селезенки, окрашенных гематоксилин-эозином.
Патоморфологические изменения в перевиваемой опухоли при воздействии пектина, циклофосфана и при их сочетанном применении
В таблице 18 представлены данные повторной серии опытов по торможению роста опухоли в разных группах. Если при совместном применении двух препаратов этот показатель только нарастал, достигая максимума в 100% к 19-му дню наблюдения, то в других группах он убывал. При этом в группе циклофосфан скорость убывания была выше, чем в группе «пектин», что собственно было видно при оценке кинетики роста опухоли, представленной ранее.
Таким образом, данные таблицы 24, рисунка 20 свидетельствуют о том, что комбинация пектина и циклофосфана синергична, т.к. эффект усиления очевиден. Однако определить характер синергии по этим данным весьма сложно.
Классическое представление о варианте синергии – аддитивности гласит, что эффект от одновременного применения препаратов равен сумме эффектов каждого. При потенцировании эффект от одновременного применения должен быть больше, чем сумма эффектов каждого. Иначе говоря, суждение о потенцировании справедливо, если соблюдается условие: (ТРОпектин+циклофосфан ТРОпектин + ТРОциклофосфан), где ТРО -торможение роста опухоли. При аддитивном эффекте должно соблюдаться условие: (ТРОпектин+циклофосфан = ТРОпектин + ТРОциклофосфан). Соблюдение условия: (ТРОпектин+циклофосфан ТРОпектин + ТРОциклофосфан) сидетельствует об антогонизме препаратов. Разумеется, основанием для утверждения о наличии эффекта потенцирования является предварительная проверка нулевой гипотезы. В качестве объектов сравнения были использованы значения ТРОпектин+циклофосфан и ТРОпектин + ТРОциклофосфан на 19, 21, 25 и 28-ые дни наблюдения. В качестве критерия оценки уровня значимости использовался F-критерий Фишера:
На рис. 22 представлена графическая оценка типа синергии при совместном применении пектина и циклофосфана. В качестве сравнения представлены данные аддитивного торможения роста опухоли при изолированном применении этих препаратов. Начиная с 19-го дня, разница в величине торможения роста опухоли между группами ТРОпектин+циклофосфан и ТРОпектин + ТРОциклофосфан нарастает с 2,7% до 14,9% на 21-й день, до 31,3% на 25-й и до 57,1% на 28-й, хотя только с 21-го дня эта разница становится статистически достоверной (р 0,01). Это значит, что с 21-го дня отмечается достоверный эффект потенцирования при совместном применении пектина и циклофосфана. Поскольку животные, получавшие пектин в сочетании с циклофосфаном все выжили, а по правилам скрининга наблюдение за ними продолжается 90 дней, эта величина была принята в качестве средней продолжительности жизни данной группы. Увеличение продолжительности жизни в группе «пектин+циклофосфан» против группы «циклофосфан» составило 200%. Таким образом, пектин, обладая определенным противоопухолевым потенциалом, способен потенцировать действие конвенциальных цитостатиков при их комбинированном применении.
Сочетанное применение пектина и циклофосфана вызвало эффект усиления при дозе циклофосфана в 4-5 раз меньше терапевтической. Появившаяся опухоль в группе «пектин+циклофосфан» в итоге регрессировала и все животные были полностью излечены. У части животных выведенных из эксперимента в последующем появилось вполне нормальное по внешнему виду потомство.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что сочетанное воздействие циклофосфана и пектина демонстрирует синергию препаратов в форме потенцирования и оказывает выраженное цитостатическое и противоопухолевое действие на рост карциносаркомы W- 256 in vivo.
Уокера) и органах крыс при воздействии пектина, циклофосфана (ЦФ) и при их сочетанном применении. Через 5-6 суток после перевивки опухолевых клеток в бедро опухоль была представлена уже сформированным узлом (2,5±0,3 см3). Морфологически, W-256 относится к опухолям молочной железы и является смешанной опухолью, образованной как саркоматозными, так и эпителиоидными компонентами; характеризуется инфильтративным ростом. Опухолевые клетки образовывали солидные комплексы, пласты и тяжи, врастающие в мышечную ткань вдоль мышечных волокон и кровеносных сосудов. Эпителиоидные клетки отличались умеренным полиморфизмом, содержали преимущественно гипохромные ядра, часто подвергались митотическому делению. Некоторые эпителиоидные клетки были перстневидными и характеризовались смещением ядер к периферии. Эпителиоидные клетки - преобладающая клеточная популяция W-256. (рис.22,23,24) Кроме апоптотической гибели в опухолевых узлах регистрировались разных размеров очаги некроза опухолевых клеток, которые располагались преимущественно в центральных зонах и были инфильтрированы нейтрофилами и моноцитами. Между клетками Рис.22 Карциносаркома Уокера-256, 7 сутки после перевивки., ув.200 формировались кровеносные сосуды.