Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Общие сведения об интерфероне 15
Глава 2. Антиканцерогенные и противоопухолевые эффекты интерферона 21
2.1. Ингибирование вирус-индуцированного канцерогенеза 21
2.2. Ингибирование роста трансплантированных опухолей 23
2.3. Ингибирование химически индуцированного канцерогенеза 26
2.4. Испытание интерферона в онкологической клинике 27
Глава 3. Механизмы антиканцерогенного и противоопухолевою действия интерферона 39
А. Влияние интерферона на опухолевые клетки 39
3.1. Антипролиферативное действие 39
3.2. Модификация клеточной поверхности 47
3.3. Йнгибирование онкогенности опухолевых клеток 57
Б. Влияние интерферона на организм 62
3.4. Жшуномодулирующее действие интерферона 62
3.4.1. Влияние интерферона на Т-клетки 62
3.4.2. Влияние интерферона на естественные киллеры 69
3.4.3. Влияние интерферона на антителозавииимую цитотоксичность 75
3.4.4. Влияние интерферона на макрфаги 78
3.4.5. Влияние интерферона на В-клетки и антителообра-зование 83
3.4.6. Мембранно-опосредованные механизмы иммуномодули-рующего действия интерферона 86
Глава 4. Материалы и методы исследования 93
4.1. Объект исследований 93
4.1.1. Подопытные животные 93
4.1.2. Вирусы 93
4.1.3. Куриные эмбрионы 96
4.1.4. Культуры тканей 96
4.2. Методы исследования 97
4.2.1. Получение интерферона 97
4.2.2. Получение "ложного" интерферона 100
4.2.3. Интерфероновая реакция лейкоцитов 100
4.2.4. Индукция опухолей 101
4.2.5. Хирургическое удаление опухолей 103
4.2.6. Изучение кинетики клеточного роста 103
4.2.7. Реакция трансплантат против хозяина /РТПХ/ 103
4.2.8. Определение киллерной активности лейкоцитов 104
4.2.9. Исследование супероксидгенерирущей активности макрофагов 105
4.2.10. Изготовление гистологических препаратов 107
4.2.11. Статистическая обработка результатов 108
Глава 5. Антиканцерогенное и противоопухолевое действие интерферона 109
5.1. Ингибирование химически индуцировэнного канцерогенеза 110
5.2. Ингибирование перевивных опухолей 132
Глава 6. Ингибирующее влияние ряда факторов на систему интерферона 154
6.1 Влияние химических канцерогенов на индуцибельность интерферона 157
6.2 Влияние операционного стресса на индуцибельность интерферона 170
6.3. Исследование индуцибельности интерферона в лейкоцитах крови и регионарных лимфоузлов онкогинекологических больных, подвергшихся хирургическому, лучевому и лекарственному лечению 183
Глава 7. Антипролиферативное действие интерферона 194
7.1. Ингибирование деления клеток меланомы BI6 в культуре 196
7.2. Ингибирование деления клеток карциномы Льюис в культуре 207
7.3. Сравнительное изучение ростингибирующего действия интерферона на трансформированные и нетрансформированные клетки 212
7.4. Влияние интерферона на уровень цАШ в трансформированных и нетрансформированных клетках 216
7.5. Исследование зависимости антипролиферативного действия интерферона от посадочной плотности клеток в культуре 219
Глава 8. Иммуномодулирующее действие интерферона 228
8.1. Влияние на эффектерные механизмы неспецифической естественной резистентности /макрофаги, ЕК, интерфероногенез/ 232
8.2. Влияние на эффектерные механизмы специфического противоопухолевого иммунного надзора /Т-лимфоцитов/ 247
Глава 9. Антиметастатическое действие интерферона 260
9.1. Ингибирование метастазирования карциномы Льюис и меланомы BI6 276
9.2. Исследование антиметастатических эффектов интерферона в условиях хирургического удаления первичной опухоли 284
9.3. Модификация метастатических потенций клеток меланомы ВІ6 путем их обработки интерфероном in vitro 289
Глава 10. Сочетанное применение интерферона и цитостатиков Б противоопухолевой терапии 299
10.1. Исследование эффективности сочетанного применения интерферона и циклофоофана в терапии карциномы Льюис в норме и в условиях хирургического удаления первичной опухоли 302
10.2. Влияние ингерферона на токсичность и противоопухолевую активность винбластина при комбинированной терапии метастазирующей карциномы Льюис 322
Заключение 340
Выводы 358
Указатель литературы 363
- Испытание интерферона в онкологической клинике
- Ингибирование химически индуцировэнного канцерогенеза
- Ингибирование деления клеток карциномы Льюис в культуре
- Исследование эффективности сочетанного применения интерферона и циклофоофана в терапии карциномы Льюис в норме и в условиях хирургического удаления первичной опухоли
Испытание интерферона в онкологической клинике
Установленное в эксперименте антиканцерогенное и антибластомное действие интерферона явилось основанием для испытания противоопухолевой активности этого белка в онкологической клинике.
Одно из наиболее ранних исследований в этой области было проведено в начале 70-ых годов и было связано с применением интерферона для терапии остеогенных сарком /613/. Человеческий лейкоцитарный интерферон вводили внутримышечно, ежедневно в дозе 3 10 единиц в течение месяца, а затем три раза в неделю в течение 17 месяцев. Существенно, что лечение интерфероном сочетали с хирургическим удалением опухоли, причем интерферон начинали вводить до операции и продолжали после нее в течение 18 месяцев. Исследования показали, что через 3 года у 60% больных, получавших интерферон, отсутствовали метастазы в легких в то время как в контрольной группе метастазы отсутствовали лишь у 35% пациентов. Сведения о продолжительности жизни указанных больных также свидетельствуют в пользу интерфероне терапии: к трехлетнему сроку в контрольной группе умерло 65% больных, а в группе, получавшей интерферон, - 28 . Помимо противоопухолевого эффекта, приведенные наблюдения, равно как и другие исследования тех же авторов /612/ продемонстрировали что онкологические больные хорошо переносят длительное введение интерферона в указанной дозе. Более того, наблюдения показали /381/, что больные, не имевшие к трехлетнему сроку метастазов остеосаркомы в легких, были резистентны к заражению вирусными инфекциями в течение интерферонетерапии в отличие от пациентов контрольной группы, у которых вирусные инфекции очень часто сопутствовали злокачественному росту.
Забегая вперед, уместно заметить, что в клинических исследованиях последующих лет больным вводили значительно большие дозы высокоечищеиных препаратов интерферона, не наблюдая при этом существенных побочных эффектов /614/. Исследователи применяли оС -интерферон и для лечения больных с другими формами злокачественных новообразований. Ими, в частности, описано исчезновение клинических симптомов и уменьшение размеров пораженных лимфоузлов и легочных инфильтратов у больного лимфомой Ходжкина 1У стадии, получавшего интенсивный курс лечения интерфероном: 5 10 ед ежедневно в течение полугода; к сожалению, вскоре после окончания лечения наступил рецидив /612, 614/.
У ряда пациентов с множественной миеломой также наблюдалось снижение концентрации моноклепальных антител в крови и экскреции протеина Бенс-Джонса с мочой в процессе интенсивного лечения интерфероном /6-Ю ед ежедневно/. Авторы наблюдали достоверное снижение содержания опухолевых клеток в костном мозге и стойкие ремиссии, длившиеся иногда до трех лет /609, 614/. Хотя у этих пациентов, как и у больного лимфомой Ходжкина, через определенный период времени наступал рецидив болезни, подобные примеры представляют несомненный интерес, ибо свидетельствуют об эффективности oi -интерферона даже в случаях генерализации процесса /609, 322/.
Любопытные сведения содержатся в сообщении исследователей /192/, предпринявших лечение интерфероном 10 больных злокачественными новообразованиями различных локализаций. Авторы, в частности, описали случай, где применениеоС-интерферона в дозе от 2 до 4 10 единиц чередующимися курсами в течение года в сочетании с периодическим применением цитостатика позволило вывести в стойкую /свыше 17 мес/ ремиссию больного остеосаркомой с метастазами в легкие. Положительный терапевтический эффект был также получен ими при лечении больной раком шейки матки П-В стадии, больных саркомой Юинга, синовиальной саркомой, остеосар-комами и рецидивирующими папилломами мочевого пузыря где интерферон применяли в комплексе с цитостатиками хирургическим.
В последующие годы исследователи /478/ провели лечение лейкоцитарным интерфероном небольшой группы больных узловатой низкодифференцированной лимфомой; авторы показали, что трое больных, не получавших предварительной химиотерапии, вышли в стойкую /от 4 до 6 мес/ ремиссию после 30-дневного курса внутримышечного введения интерферона, в то время как трое других пациентов с диффузной гистиоцитарной лимфомой, резистентной к предварительной проведенному курсу химио— и лучевой терапии, не дали никакой реакции на аналогичные дозы интерферона. Другой группой исследователей /326/ было показано что у пяти из восьми больных лимфомой, перенесших соответствующую общепринятую терапию имел место положительный эффект от последующего лечения JL -интерфероном. Благоприятные последствия наблюдались также при лечении лейкоцитарным интерфероном больных острым лейкозом /358/ и множественной миеломой /477/, которые не получали никакой другой терапии; авторы отмечают резкое снижение количества циркулирующих бластных клеток у лейкозных больных, а также снижение клинических симптомов и улучшение состояния у больных множественной миеломой. Анализируя результаты этих и подобных им наблюдений, автор /149/, совершенно справедливо отмечает, что хотя они проведены на чрезвычайно малом количестве больных, полученные результаты в сочетании с данными экспериментальных исследований однозначно свидетельствуют об эффективности oL Lинтерферона в лечении злокачественных новообразований человека. Следует при этом заметить, что клинический опыт подтверждает также установленную в эксперименте обратную корреляцию между количеством опухолевых клеток в организме /опухолевой массой/ и противоопухолевым эффектом интерферона /307, 611/.
Значительный интерес представляют сведения последних лет, касающиеся локального применения интерферона при неопластических заболеваниях. Исследователи /511/ применяли местные аппликации о -интерферона на область новообразований кожи головы и шеи, что сопровождалось полным исчезновением или частичной регресР1ей опухолей. В случаях, когда апликации интерферона проводились до хирургического вмешательства, они блокировали диссеминацию опухолевых клеток, предотвращая тем самым рецидивирование новообразований и их метастазирование. Наряду с обильной инфильтрацией иссеченных тканей иммунокомпетентными клетками Т- и В-лимфоцитами, макрофагами/, авторы наблюдали затвердевание опухолевой ткани и пролиферацию внутри- и околоопухолевых соединительнотканных элементов, что, естественно, создавало механическую преграду инфильтративному росту бластом и их метаста-зированию. С успехом были применены местные апликации а-интерферона в гинекологической практике для лечения предопухолевых /378/ и неопластических заболеваний шейки матки /431/. Исследователями, в частности, было показано полное исчзновение злокачественных клеток Б резецированных после интерферонетерапии тканях у 30 больных и существенное снижение ростовых и инвазивных потенции опухолей у остальных пациентов.
Аналогичные результаты были получены этой же группой исследователей при лечении рака молочной железы, меланомы и диффузного папилломатоза мочевого пузыря /465/. Так, ежедневные инъекции /апликации/е -интерферона /1 10 ед/ непосредственно в опухоль в сочетании с внутримышечными инъекциями препарата в той же дозе в течение 40 дней вызвали резкое уменьшение /в 3-4 раза/ размера опухоли молочной железы и исчезновение пальпаторно определявшихся /до лечения/ метастазов в лимфатических узлах у больной с неоперабельным раком молочной железы. Последовавшее за интерферонетерапией хирургическое лечение привело к полному исчезновению клинических симптомов болезни. Местное применение интерферона /интратуморальные инъекции 1 10 ед/ вызвало полную или частичную регрессию метастатических узлов меланомы у инкурабельного больного и резкое уменьшение объема опухолевой массы и облегчение клинического состояния у двух пациентов с диффузным папилломатозом мочевого пузыря.
Ингибирование химически индуцировэнного канцерогенеза
В первой серии опытов было использовано 520 разнополых крыс линии Wistar ; у 65 животных /самок/ с помощью 9,10-диме-тил-1,2-бензантрацена /ДМБА/ индуцировали рабдомиосаркому бедра, остальные крысы были использованы для наработки интерферона по методу, описанному в соответствующем разделе работы. В процессе проведения экспериментов животные были разделены на 3 группы:
I группа /опыт/ - 20 крыс, получившие ДМБА и подвергшиеся многократному введению селезеночного -интерферона; препарат В дозе 5 10 ед на инъекцию вводили внутрибрюшинно ежедневно в течение трех дней до инокуляции канцерогена,а затем через день на протяжении 14 недель после введения ДМБА. Объем вводимого материала, составлял 1+0,5 мл на инъекцию. /Колебания объема зависели от активности получаемых партий интерферона/.
II группа /контроль-плацебо/ - 20 крыс, получившие ДМБА и подвергшиеся многократному введению экстракта селезенок интактных животных, приготовленного, как описано выше /217/. Препарат в объеме 1+0,5 мл также вводили внутрибрюшинно, ежедневно за 3 дня до инокуляции канцерогена, а затем через день на протяжении 14 недель после введения ДМБА.
III группп аконтроль/ / 22 крыс, получившии ДМБА и подвергшиеся многократному внутрибрюшинному введению физиологического раствора в объеме 1+0,5 мл.
III-а группа - 5 крыс с ДМБА-индуцированным канцерогенезом не подвергались никаким дополнительным воздействиям и были оставлены для гистологического контроля.
В процессе канцергенеза регистрировали сроки появления пальпаторно определяемых уплотнений на месте введения ДМБА, а затем отмечали число и замеряли диаметр сформировавшихся опухолей. С этой целью обследование животных проводили вначале /до 8 недели/ один раз в 10-12 дней, а затем /до 18-22 недели/ -один раз в неделю. Кроме того, на протяжении эксперимента проводили /в выборочные сроки/ гистологическое исследование сформировавшихся новообразований у крыс III-а /контрольной/ группы, а также фиксировали продолжительность жизни всех подопытных животных.
Исследования показали, что уплотнения мышцы бедра на месте введения канцерогена возникали неравномерно, и период их формирования растянулся от 4 до 12 недель. Тем не менее, к этому периоду у интерферонобработанных крыс уплотнения пальпировались лишь в 50 случаев, в то время как в двух контрольных группах они были зарегистрированы у 90-100$ животных /таблица I/.
К 14-ой неделе с момента введения канцерогена у большинства животных контрольных групп на месте указанных уплотнений сформировались четко контурированные опухоли /табл.1, рис.1/, представлявшие собой, согласно данным гистологических исследований, рабдошосаркомы. Характерно, что у крыс, получавших регулярные инъекции -интерферона, опухоли воЗНИКЛИ только в двух случаях из 20 /табл. I, рис.1/; уплотнения же мышцы бедра на месте введения канцерогена, зарегистрированные у остальных 8 животных этой группы, резко уменьшились или полностью рассосались. Сравнение размера возникших опухолей показало, что в группе инъецированных интерфероном крыс они были существенно меньше, чем у животных двух контрольных групп /таблица 2, рис.1/: диаметр опухолей, возникших к 14 неделе у двух крыс опытной группы, не превышал 10 мм, в то время как диаметр опухолей у контрольных животных составлял 20+0,57 мм и 15нн0,3 мм.
Приведенные данные, таким образом, однозначно продемонстрировали ингибирующее влияние интерферона на химически индуцированный канцерогенез у крыс: количество опухолей, возникших у животных опытной группы, составляло всего лишь 11-12% от числа новообразований в контроле.
К сожалению, указанный эффект оставался стабильным только до тех пор, пока животным вводили интерферон; прекращение введения препарата /после 14-ой недели с момента инъекции ДМБА/ привело к интенсивному росту двух имевшихся и к появлению новых опухолей у крыс опытной группы /табл.1, рис.1/. Тем не менее, количество новообразований, возникших у этих ЖИЕОТНЫХ через 18 недель после введения канцерогена, позволило говорить о пролонгированном антиканцерогенном действии интерферона: в опытной группе опухоли в конечном итоге ЕОЗНИКЛЙ у 65% животных а в каждой из контрольных групп - у 100 .
Аналогичная картина наблюдалась и при сравнении размеров новообразований: у крыс, получавших интерферон, диаметр опухолей к 18-й неделе составлял 18+0,7 мм, в то время как у животных, получавших селезеночный экстракт или физраствор, он составлял 40+0,9 мм и 36+0,7 мм соответственно /табл.2, рис.1/.
В свете приведенных данных не удивительно, что наблюдение за выживаемостью крыс с ДМБА-индуцировэнными опухолями продемонстрировало статистически достоверное увеличение продолжительности жизни животных, получавших интерферон, по сравнению с продолжительностью жизни крыс контрольных групп /таблица 3/.
Поскольку установленный нами феномен антиканцерогенного действия интерферона никем ранее описан не был, а полученные результаты представляли несомненный интерес с точки зрения понимания участия интерферона в противоопухолевой резистентности, представлялось целесообразным провести дополнительные серии экспериментов для выяснения степени воспроизводимости полученного эффекта. С этой целью было проведено 3 серии опытов на мышах линий BAIB/c, C57W и AKRе использованием гомологичного интерферона, полученного из мозговой ткани мышей, инфицированных вирусом Западного Нила.
Следует заметить, что небольшое число мышей линий С57 и AKR было взято в эксперимент для получения информации о мере зависимости /или независимости/ антиканцерогенного действия интерферона от генетических особенностей подопытных животных.
Всего Б экспериментах было использовано около тысячи мышей обоего пола; у 150 животных /самок/ с помощью 3-мегилхолантрена /MX/ индуцировали канцерогенез, остальные мыши были использованы для наработки интерферона по методу, описанному в соответствующем разделе работы.
Подопытные животные были разделены на 3 группы:
I группа /опыт/ - мыши ВА1В/с /30/, c57W /Ю/ и АКЕ /ID// получившие 3-метилхолантрен и подвергшиеся многократному введению мозгового d -интерферона; препарат в дозе 3 Ю ед на инъекцию вводили внутрибрюшинно ежедневно в течение недели до инокулящи канцерогена, а затем через день на протяжении 18-25 недель после введения MX. Объем вводимого материала составлял 0,3-0,6 мл на инъекцию, в зависимости от активности получаемых партий интерферона.
II группа./контроль-плацебо/ - мыши ВА1В/с /30/, c$7W /10/ и AKR /10/, получившие Ж и подвергшиеся многократному введению экстракта из мозговой ткани мышей, приготовленного, как описано выше /217/. Препарат в объеме 0,3- 0,6 мл также вводили внутрибркшинно ежедневно в течение недели до инокуляции канцерогена, а затем через день на протяжении 18-25 недель после введения MX.
III группа контроль/ / ммыш иА1В/с с300/ ,C7W /10/ / жн /10/, получившие ДМБА А подвергшиеся однократному внутрибрюшинному введению физиологического раствора в объеме 0,3-0,6 мл.
В процессе канцерогенеза, так же как и в серии экспериментов, проведенных на крысах, отмечали сроки появления новообразований, а также подсчитывали число и замеряли диаметр сформировавшихся опухолей. С этой целью обследование животных проводили еженедельно, начиная с 5 недели после введения Ж.
Введение интерферона не прекращали после появления новообразований, а продолжали до конца эксперимента. В каждой группе регистрировали продолжительность жизни подопытных животных.
Исследования показали, что у мышей, получавших в процессе канцерогенеза интерферон, опухоли возникли на 4-5 недель позже, чем у животных контрольных групп, и общий выходи их снизился на 74,5, 69,7 и 64,8 соответственно /таблица 4, рис.2,3,4/. Указанный эффект наблюдался у мышей всех трех групп и однозначно подтвердил результаты экспериментов, проведенных на крысах.
Ингибирование деления клеток карциномы Льюис в культуре
Третья серия экспериментов была посвящена исследованию чувствительности к антипролиферативному действию интерферона клеток K-I, полученных В.А.Фадеевым /90/ из мышиной карциномы Льюис. Получение указанной информации представляло интерес, поскольку карцинома Льюис, равно как и меланома BI6, широко использовалась в качестве экспериментальной модели дальнейших исследований. В этой серии опытов также использовали нативныи о f/h интерферон, полученный в системе I 929м - NBV ; активность используемого препарата составляла 1,2 104 ед/мл.
В процессе проведения эксперимента клетки высаживали в культуральные флаконы с площадью боковой поверхности в 20 см ; посадочная плотность составляла 4 105 клеток на флакон. В качестве ростовой среды использовали среду Игла с 10% бычьей сыворотки. Интерферон вносили в опытные флаконы до концентрации 5, 50 и 500 ед/мл, причем делали это, в отличие от предыдущей серии экспериментов, одновременно с посадкой клеток.
Основанием для такого изменения в схеме опыта явились наши наблюдения и сведения, представленные к этому времени в литературе /456/ о максимальной чувствительности клеток к рост-ингибирующему действию интерферона на этапе инициации клеточного роста, соответствующего фазам GQ/G,, клеточного цикла. Всего- было высажено 40 флаконов; длительность эксперимента составляла 5 суток, в течение которых проводили ежедневную смену среды с восстановлением в опытных флаконах соответствующих концентраций интерферона. Подсчет клеток проводили, как и в предыдущем опыте, ежедневно в двух парных флаконах из каждой группы; снимали клетки двумя миллилитрами 0,02 раствора Версена.
Как показали проведенные исследования /таблица 21,рис.14/, клетки карциномы Льюис /линия K-I/ проявляют высокую чувствительность к рост-ингибирующему действию интерферона, причем антипролиферативный эффект последнего в отношении линии K-I также является дозозависимым: в дозе 5 ед/мл интерферон тормозил клеточное деление, увеличивая время удвоения клеток в культура до 21,8 ч по сравнению с 14,1 ч в контроле; 50 ед. интерферона в I мл среды стабилизировали количество клеток в культуре, а 500 ед/мл прогрессивно снижали их число. При окраске снятых с опытных флаконов клеток трипановым синим была? установлено, что в присутствии 5 и 50 ед/мл интерферона 85-88 клеток остаются живыми, а в присутствии 500 ед/мл процент живых клеток снижается до 72.
Эти наблюдения, подобно таковым, проведенным на меланоме ВІ6 /клетки ММ--/, также свидетельствуют о цитотоксическом /наряду с цитостатическим/ действии относительно больших доз интерферона. Тем не менее, как видно из представленных данных, антипролиферативный эффект интерферона в отношении клеток K-I осуществляется, в основном, за счет регуляторных /а не токсических/ механизмов; об этом свидетельствует, с одной стороны, явное преобладание живых клеток в снятой с опытных флаконов суспензии, а во-вторых, характер кривой доза - эффект для интерферона и клеток K-I.
Действительно, как видно из рис.15, эта кривая имеет вид гиперболы, типичной для многих физиологических процессов, характеризующихся эффектом насыщения в отличив от прямолинейной кривой доза-эгфрект, отражающей токсическое действие на клетки некоторых цитостатиков.
Исследование эффективности сочетанного применения интерферона и циклофоофана в терапии карциномы Льюис в норме и в условиях хирургического удаления первичной опухоли
Первая серия экспериментов была посвящена изучению эффективности применения интерферона с циклофосфаном в терапии мышей с карциномой Льюис; опыты состояли из двух групп:
1 изучение влияния интерферона и циклофосфана на развитие первичной опухоли и метастазов в легких у мышей с подкожными трансплантатами карциномы Льюис;
2 изучение влияния интерферона и циклофосфана на развитие метастазов в легких у мышей в условиях хирургического удаления первичной опухоли.
Все эксперименты были проведены на мышах ; линии и57BI/6 обоего пола возрастом 7-8 недель.
При исследовании эффективности применения интерферона и циклофосфана для терапии мышей с карциномой Льюис, не подвергавшихся хирургическому лечению, животные были разбиты на 4 подгруппы:
1-20 мышей, которым подкожно в область спины перевили 2 Ю5 клеток карциномы Льюис, приготовленных по методу, описанному выше; эта группа, животных служила контролем.
2-20 мышей, которым аналогичным образом была перевита карцинома Льюис и которым, начиная с 5щю дня после перевивки ежедневно внутрибрюшинно вводили по 5 Ю3 ед. гомологичного и /fi интерферона; продолжительность терапевтического курса составляла 12 дней с момента первой инъекции.
3-20 мышей, которым аналогичным образом была перевита карцинома Льюис и которым, начиная с 5-го дня после перевивки ежедневно внутрибрюшинно вводили по.10 мг/кг циклофосфана; продолжительность терапевтического курса также составляла 12 дней с момента первой., инъекции:...
4-20 мышей, которым аналогичным образом была перевита карцинома Льюис и которым, начиная с 5-го дня после перевивки ежедневно внутрибрюшинно вводили по 5 103 ед. интерферона и по 10 мг/кг циклофосфана; продолжительность терапевтического курса составляла 12 дней после перевивки.
Об эффективности указанной противоопухолевой терапии судили на основании динамики роста подкожных /первичных опухолей/, а также на основании интенсивности метастазирования. О динамике роста подкожных опухолей судили по изменению их диаметра; число метастазов в легких определяли в остром опыте путем визуального подсчета. Общий объем метастазов вычисляли по методу, описанному выше.
Как показали проведенные исследования /таблица 35/, введение интерферона и циклофосфана с пятого дня после перевивки опухолевых клеток слабо, однако статистически достоверно /Р 0,05/ снижает размер первичных опухолей и уменьшает степень их метастазирования. При этом следует отметить, что кажущееся /на первый взгляд/ преимущество циклофосфана перед интерфероном в условиях данного эксперимента не подтвердилось при статистической обработке материала /Р 0,05/. Что касается комбинированного применения интерферна и циклофосфана, то оно, как показали проведенные исследования, сопровождается более выраженным уменьшением размеров первичных опухолей, а также резким снижением числа и объема метастазов, чем это имеет место при применении каждого из перечисленных агентов в отдельности/таблица 35/. Полученные данные, таким образом, свидетельствуют о синергическом действии интерферона и циклофосфана, что особенно заметно сказывается на развитии метастазов у мышей, получавших комбинированную терапию: общий объем метастатической массы снижается у них почти в 10 раз по сравнению с контрольными животными, и в 5-6 раз по сравнению с мышами, получавшими один интерферон или один циклофосфан /таблица 35/. Противоопухолевый эффект комбинации интерферон-циклофосфан по отношению к подкожной опухоли менее выражен, чем антиметастатический эффект указанной сочетанной терапии, хотя размеры первичных опухолей у мышей, получавших комбинированную терапию, статистически достоверно уступают размерам опухолей у животных, получавших каждый из препаратов в отдельности /Р 0,001/.
Следует отметить, что приведенные результаты несколько противоречат наблюдениям Marguet и соавторов /467/, в экспериментах которых применение интерферона в течение недели, начиная с 7 дня после прививки опухолей, не влияло на динамику их развития, а сочетания интерферона с циклофосфаном даже несколько ослабляло эффект одного циклофосфанг. Указанные различия в противоопухолевой активности одного интерферона, зарегистрированные в наших экспериментах и в исследованиях Marquet е.а. , могут иметь чисто количественную основу, поскольку:
а) в опытах Marquet е.а. К началу интерферонетерапииг средний диаметр опухолей у крыс уже достиг 1,7 см, а их масса - 4 г; в наших экспериментах к началу введения интерферона средний-диаметр опухолей у животных составлял лишь 0,4-0,5 см, а их масса - около 0,5 г.
б) в опытах Marquet е.а.интерферон вводили в дозе Ю5 ед/кг, а в наших - в дозе 2,5 Ю ед/кг.
в) продолжительность терапевтического курса в опытах Marquet е.а.составляла 7 дней /начиная с 7 дня после перевивки опухолей/, а в наших - 12 дней /начиная с 5 дня после трансплантации/.
Таким образом, указанные различия укладываются в современные представления об интерферонетерапии, эффективность которой обратно пропорциональна массе опухоли /302, 304, 307, 322/; немаловажное значение имеет дозировка интерферона, схемы его применения и, наконец, чувствительность к нему данной конкретной опухоли /606, 609, 611/. Об этом же, кстати, свидетельствуют и данные Marquet е.а. , в опытах которых использование интерферона давало заметный противоопухолевый эффект, когда его применяли с первого дня после прививки опухоли.
Значительно труднее интерпретировать существующие разногласия в результатах сочетанного применения интерферона и циклофосфана, причем это касается не только наших данных и цитируемых выше исследований /467/, но и других наблюдений. Действительно, в ряде экспериментальных работ по комбинирванному использованию интерферона и циклофосфана был получен четко выраженный синергический эффект: при лечении спонтанного лейкоза мышей АШ /320/ и нейробластомы CI300 /641/, указанная комбинированная терапия сопровождалась увеличением продолжительности жизни мышей ЖЕ на 200 и полной регрессией нейробластом при использовании нетерапевтической для данной опухоли дозы циклофосфана /200 мг/кг /. Наряду с этим, при терапии мышиного лейкоза II2I0, указанное сочетание - интерферон + циклофосфан /20 мг/кг / - оказалось неэффективным /590/, а при терапии крыс с липосаркомой I 157 применение интерферона со значительно большими дозами циклофосфана /100 мг/кг / привело, как уже отмечалось, к обратному эффекту /467/. Найти какую-либо удовлетворительную трактовку приведенных противоречий пока не представляется возможным, поскольку в немногочисленных экспериментах по сочетайному применению интерферона и циклофоофана были использованы различные модели /и даже различные виды животных/, схемы и дозы препаратов, а механизмы полученных эффектов не исследовались.
Вторая группа экспериментов была посвящена, как уже говорилось, изучению влияния интерферона и циклофоофана на развитие метастазов в легких у мышей в условиях хирургического удаления первичной опухоли. Выбор указанной модели был обусловлен стремлением смоделировать в эксперименте ситуацию, близкую к той, которая имеет место в онкологической клинике: оперативное удаление первичной опухоли с последующей химиотерапией.
Проведение таких исследований представлялось тем более обоснованным, что хирургическое удаление первичной опухоли, как ранее нами было показано /31, 32/, стимулирует развитие метастазов, а применение интерферона в послеоперационный период существенно ингибирует этот процесс.