Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1 Обзор литературы 13
1.1 Эпидемиология пограничных опухолей яичников 13
1.1.1 Особенности пограничных опухолей в новой классификации Всемирной организации здравоохранения 2013 года 15
1.2 Современные методы диагностики пограничных опухолей яичников. 17
1.3 Современные представления о механизмах возникновения пограничных опухолей яичников 1.3.1 Роль интегриновых рецепторов в механизмах канцерогенеза 20
1.3.2 Роль элементов внеклеточного матрикса в механизмах канцерогенеза.
1.4 Факторы риска прогрессирования пограничных опухолей яичников 39
1.5 Современные методы лечения пограничных опухолей яичников 42
ГЛАВА 2 Материал и методы исследования 46
2.1 Клинический материал 46
2.2 Материалы исследования 49
2.3 Методы исследования 2.3.1 Ультразвуковое исследование органов малого таза 50
2.3.2 Определение СА125 и НЕ4 методом иммуноферментного анализа 52
2.3.3 Выделение суммарной клеточной РНК и очистка от примеси ДНК с помощью ДНКазы 53
2.3.4 Электрофорез РНК в агарозном геле 54
2.3.5 Определение концентрации РНК 54
2.3.6 Обратная транскрипция 55
2.3.7 Полимеразная цепная реакция в реальном времени (ПЦР) 55
2.3.8 Иммуногистохимическое исследование 56
2.3.9 Статистическая обработка данных 58
ГЛАВА 3 Результаты исследования 60
3.1 Выявление факторов риска развития пограничных опухолей яичников. 60
3.1.1 Характеристика группы больных пограничными опухолями яичников. Ретроспективный анализ 60
3.1.2 Проспективный анализ факторов риска у больных с опухолями яичников 63
3.2 Оценка роли онкомаркёров СА125 и НЕ4, как предикторных факторов у больных с пограничными опухолями яичников 65
3.2.1 Анализ экспрессии интегриновых рецепторов ITGA2 в опухолевой ткани у больных ПОЯ, ДОЯ и РЯ, как возможных маркёров агрессивности опухолей яичников 69
3.2.2 Иммуногистохимическое исследование интегрина ITGA2 в ткани опухолей яичников 71
3.3 Анализ экспрессии генов изоформ остеопонтина OPNa, OPNb, OPNc и тромбоспондина TSP1 у женщин, больных ПОЯ и РЯ, и ДОЯ 77
3.3.1 Иммуногистохимическое исследование изоформы белка OPNa, OPNb, OPNc у больных ПОЯ и РЯ, и ДОЯ 80
3.4 Анализ распределения тромбоспондина TSP1 в опухолях яичников. 84
3.5 Оценка чувствительности и специфичности исследуемых маркёров
3.6 Связь молекулярных маркеров с факторами риска прогрессирования пограничных опухолей яичников 93
3.7 Прогнозирование онкологического риска у больных с ПОЯ с учетом данных по экспрессии ITGA2, OPN и TSP1 95
ГЛАВА 4. Обсуждение результатов исследования 103
Выводы 121
Практические рекомендации 122
Список сокращений и условных обозначений 123
Список литературы
- Современные представления о механизмах возникновения пограничных опухолей яичников
- Выделение суммарной клеточной РНК и очистка от примеси ДНК с помощью ДНКазы
- Характеристика группы больных пограничными опухолями яичников. Ретроспективный анализ
- Связь молекулярных маркеров с факторами риска прогрессирования пограничных опухолей яичников
Современные представления о механизмах возникновения пограничных опухолей яичников
Согласно современным представлениям, каких-либо специфических клинических проявлений для пограничных опухолей яичников не существует. В 70,9 %, по данным Шелкович С. Е., Демидчик Ю. Е. (2012), наблюдалась крайне скудная клиническая симптоматика. Большинство пациенток предъявляли жалобы на чувство дискомфорта в брюшной полости и боли различной выраженности (88,8 %). Увеличение живота в объеме выявлено в 22,2 % случаев. Учитывая торпидное и доброкачественное течение заболевания, выраженность клинических проявлений зависит от размеров и топографии новообразования. По данным литературы, в среднем от момента верификации диагноза до специального лечения проходит 1,3 месяца, а при отсутствии симптомов – 10,2 месяца [35].Результаты ультрасонографии органов малого таза не всегда позволяют дифференцировать пограничные опухоли яичников с доброкачественными и злокачественными новообразованиями яичников. По результатам ультразвукового исследования при наличии кистозно-солидной структуры опухоли с папиллярными разрастаниями на капсуле и наличием кровотока возможно лишь отнести пациентку к группе онкологического риска. Точность УЗИ-исследования на дооперационном этапе составляет 72,6 % [41;42]. Магнитно-резонансная томография с контрастным усилением позволяет в сомнительных случаях уточнить характер новообразования яичников и с высокой точностью (97,5 %) диагностировать пограничный характер опухоли. Определение маркёрных гликопротеинов СА125 и СА19-9, а также РЭА и НЕ4 применительно к пограничным опухолям не может считаться строго специфичным[41;42]. По данным Шелкович С. Е., Демидчик Ю. Е. (2012), значения СА125 выше нормы отмечено у 57 % женщин.Показатели онкомаркёра не превышали 90 ЕД/мл, что отмечается при доброкачественных эндометриоидных опухолях яичников и при общем генитальном эндометриозе. Лишь начиная с IIIб стадии показатели маркёра повышались до 1 443 Ед/мл. В настоящее время данные онкомаркёры применяются для мониторирования пациенток, перенесших хирургическое лечение, с целью выявления прогрессирования опухолевого процесса.
Сложности морфологической экспресс диагностики по замороженным срезам не всегда позволяют точно интерпретировать характер опухолевого поражения во время проведения хирургической операции, что порой приводит к нерадикальному характеру последних. Окончательный диагноз возможен только после гистологической проводки материала, в ряде случаев с привлечением ИГХ-методик [24;42].
По данным исследований последнего десятилетия, было показано, что серозные пограничные опухоли яичников являются предшественниками злокачественных опухолей яичников 1-го типа–серозной (высокодифференцированной), муцинозной, эндометриоидной, светлоклеточной аденокарциномы яичников. Опухоли 2-го типа – низкодифференцированная серозная аденокарцинома, карциносаркома, недифференцированная карцинома яичников – возникают denovo из кист включений, быстро развиваются и прогрессируют [8; 128].Ещё в 2005 г. Shih и Kurman на основании изучения мутаций в генах p53, K-ras, B-raf в доброкачественных серозных цистаденомах, пограничных опухолях и высокодифференцированных серозных аденокарциномах выдвинули теорию овариального канцерогенеза, согласно которой вышеперечисленные формы опухолей яичников представляют собой последовательные этапы малигнизации, происходящей по пути «высокой дифференцировки клеток» [139]. В настоящее время считается, что пограничные опухоли представлены двумя вариантами, находящимися на разных этапах опухолевой прогрессии.
Атипическая пролиферирующая серозная опухоль, которая выявляется у большинства больных, имеет доброкачественное течение. Интраэпителиальная высокодифференцированная серозная карцинома, встречающаяся в меньшем проценте случаев, имеет более агрессивное течение и является предшественником инвазивной высокодифференцированной аденокарциномы. 1.3.1 Роль интегриновых рецепторов в механизмах канцерогенеза
Развитие, рост опухоли и способность к метастазированию во многом определяется её микроокружением. Опухолевая строма состоит из молекул экстраклеточного матрикса и множества типов клеток, включая эндотелиальные и периваскулярные клетки, фибробласты и клетки иммунной системы. Все эти виды клеток участвуют в различных процессах канцерогенеза, таких как ангиогенез, лимфангиогенез, десмоплазия, инвазия и метастазирование.
Одними из ключевых молекул, отвечающих за взаимодействие опухолевых клеток с их микроокружением, в частности, за адгезию клеток к межклеточному матриксу, являются интегрины. Интегрины Интегрины являются гетеродимерными трансмембранными рецепторами, состоящими из и субъединиц, связанных друг с другом нековалентно (рисунок 1). Описано 18 - и 8 -субъединиц, образующих 24 различных гетеродимера, каждый из которых состоит из большого внеклеточного домена, связывающего элементы ВКМ, трансмембранного домена и короткого внутриклеточного домена, связывающегося с актиновым цитоскелетом посредством ряда таких адапторных белков, как талин, киндлин, винкулин [123]. Интегрины могут связывать различные элементы внеклеточного матрикса (ламинин, коллаген, фибронектин и др.) и клеточные рецепторы [146].
Выделение суммарной клеточной РНК и очистка от примеси ДНК с помощью ДНКазы
Комплексное ультразвуковое обследование проводилось на аппаратах экспертного класса фирм PHILIPS «IU» и HITACHI Preirus с использованием мультичастотных датчиков (конвексный 1-5 МГц, полостной 3-10 МГц, линейный 3-9 М Гц) и включало исследование органов малого таза, брюшной полости, забрюшинного пространства и мягких тканей передней брюшной стенки в проекции послеоперационных рубцов и зон лапароцентезов.
Всем больным выполнялось последовательное трансабдоминальное (ТА) и трансвагинальное (ТV) исследование в режиме реального масштаба и времени с применением контактного способа сканирования. Для визуализации органов брюшной полости, малого таза и забрюшинного пространства использовалась стандартная методика осмотра: конвексным датчиком 1–5 МГц при триплексном сканировании для оценки состояния органов в положении лежа на спине при тугом наполнении мочевого пузыря. Во время исследования пациентки находились в положении лежа на спине. Ультразвуковое исследование проводили в стандартных проекциях, начинали с продольного направления. После опорожнения мочевого пузыря, проводили TV сканирование органов малого таза. При выявлении в брюшной полости или малом тазу патологических объемных образований оценивали локализацию, размеры, эхо-структуру, взаимосвязь с прилежащими органами (признаки инфильтративного роста), особенности васкуляризации. При ЦДК внимание уделялось не только интенсивности, но и равномерности распределения цветовых сигналов в структуре образований: - периферический кровоток – регистрируемый кровоток только по периферии образований; - центральный кровоток – наличие локусов кровотока в центре образования; - смешанный кровоток – наличие локусов кровотока хаотично по всей поверхности образования. Акцент был сделан на усиление периферического кровотока, характерного для пограничных опухолей яичников.
При анализе эхоструктуры опухолей оценивали наличие солидного и папиллярного компонента.
Для злокачественных опухолей было характерно наличие гиперэхогенных образований в опухолевом узле с периферическим кровотоком, а для поганичных опухолей наличие папиллярных разрастаний по капсуле с периферическим типом кровотока. Парафиновые срезы окрашивались гематоксилин-эозином. Для верификации опухолей использовались следущие гистологические критерии. Гистологические критерии опухолей яичников. Low_grade серозная карцинома(LGSC, 8460/3) – инвазивная карцинома низкой степени злокачественности, состоящая из эпителиоцитов, формирующих папиллярные, железистые и солидные структуры с умеренной цитологической атипией. Микроскопически опухоль характеризуется множеством структур роста, в том числе единичными клетками и небольшими скоплениями клеток разной величины и формы, инфильтрующими строму яичника. Часто обнаруживаются микрососочки, реже макрососочки, окруженные неравномерно пролиферирующим эпителием, и другие структуры инвазии. Во многих опухолях можно найти компоненты пограничной/атипичной пролиферативной серозной опухоли. Опухоль состоит из однородной совокупности мелких клеток с четкими мелкими ядрышками и умеренным ядерным полиморфизмом. Некрозы почти никогда не обнаруживаются, псаммомные тельца определяются часто. Митотическая активность значительно ниже ( 2–3 митоза на 10 полей зрения), чем в high-grade серозной карциноме. High_grade серозная карцинома(HGSC, 8461/3) – карцинома высокой степени злокачественности, состоящая из эпителиоцитов, формирующих папиллярные, железистые и солидные структуры с выраженной ядерной атипией, обнаруживаются папиллярные, железистые и криброзные структуры. Ядра крупные, гиперхромные и полиморфные, иногда причудливые. Ядрышки четкие и могут быть очень крупными и эозинофильными. Митозы многочисленные и атипичные, встречаются очаговые некрозы, кровоизлияния. Количество псаммомных телец различное.
Пограничные опухоли яичников – группа овариальных новообразований для которых характерно наличие клеточной и ядерной атипии с образованием сосочковых структур и отсутствием стромальной инвазии, могут встречаться псамомные тельца.
Оба маркёра CA125 и HE4 были определены двухступенчатым иммунологическим анализом с помощью иммуноферментногоанализатора Architecti 2000 SRImmunoassay Analyzer (Abbott Laboratories, Illinois, US) c использованием хемиолюминисцентной технологии в лаборатории «Инвитро» (Москва, Россия). При определении концентрации CA125 и HE4 в сыворотке пациентов для проведения измерения, калибровки и внутренней качественной оценки были соблюдены все рекомендации производителя. Пределы определения: 1,0 Ед/мл – 101 000 Ед/мл.
50 мг ткани растирали в ступке в жидком азоте с добавлением 600 мкл раствора QIAzol Lysis Reagent (Qiagen, США). Инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут, после чего добавляли 200 мкл хлороформа, тщательно перемешивали, центрифугировали в течение 15 минут на центрифуге Eppendorf MiniSpin (Германия) при 13,4 тыс. rpm. В ходе центрифугирования раствор разделялся на три фазы. Верхнюю водную фазу, содержащую РНК, отбирали в новую пробирку, добавляли эквивалентный объём 70 % этилового спирта, перемешивали. Полученный раствор переносили на РНК-связывающую колонку из набора Rneasy Mini Kit (Qiagen, США). Центрифугировали в течение 1 минуты при 13,4 тыс. rpm, сливали фильтрат. Проводили ДНКазную обработку: на мембрану колонки наносили 80 мкл заранее приготовленного раствора ДНКазы I из набора RNase-Free DNase Set (Qiagen, США) (5 l стокового раствора ДНКазы I в 75 мкл буфера RDD). Инкубировали при комнатной температуре в течение 15 минут. Центрифугировали 30 секунд при 13,4 тыс. rpm, сливали фильтрат. Добавляли 700 мкл буфера RW1, центрифугировали 15 секунд при 13,4 тыс. rpm, удаляли фильтрат. Добавляли 500 мкл буфера RPE, центрифугировали 15 секунд при 13,4 тыс. rpm, сливали фильтрат. Повторно промывали РНК с помощью 500 мкл буфера RPE, центрифугировали 2 минуты при 13,4 тыс. rpm. Колонку переносили в чистую пробирку на 1,5 мл. Элюировали РНК с колонки путём нанесения на мембрану 30 мкл воды, свободной от РНКаз. Центрифугировали 2 минуты при 13,4 тыс. rpm. Образцы
Характеристика группы больных пограничными опухолями яичников. Ретроспективный анализ
В настоящее время использование традиционных маркёровСА125 и НЕ4 на дооперационном этапе не даёт полной картины агрессивности опухолевого процесса на ранней стадии [117], хотя совместное их применение, согласно данным некоторых авторов, увеличивает чувствительность и специфичность метода[92; 93]. По нашим данным,полученным в ходе ретроспективного анализа, сывороточные онкомаркёры начинают убедительно работать только с III ст. опухолевого процесса.Более того, совместное применение двух онкомаркёров значительно увеличивают чувствительность и специфичность [93]. В последнее время,как при исследовании механизмов канцерогенеза, так и при поиске новых маркёров активное внимание уделяется белкам,обеспечивающим клеточную адгезию, среди которых важную роль играет семейство белков интегринов. В их числе заслуживает внимания ITGA2, экспрессия которого снижена во многих типах опухоли. Недавно Atala et al. (2016) показали, чтовосстановление его экспрессии приводитк фенотипическим изменениям таких клеток, связанным со снижением подвижности и способности к инвазии. Кроме того, восстановление экспрессии способствует формированию железисто-подобных образований в трёхмерном матриксе. Исходя из этого, авторы полагают, что снижение уровняэтого интегрина в опухолевых тканях приводит к повышению инвазивности опухоли.
Однако роль таких маркёров в развитии ПОЯ пока остается неизвестной, что и определило цель настоящего исследования.
Результаты показали, что уровень экспрессии гена интегрина А2 в ДОЯ сопоставим с ПОЯ (рисунок8), тогда как при РЯ этот показатель достоверно снижается. Тогда этот интегрин может отражать агрессивность опухолевого процесса. В пользу этого предположения свидетельствуют данные Atala et al. (2016), также показавшие снижение экспрессии ITGA2 в низкодифференцированных клетках рака молочной железы.Различные интегриновые рецепторы, взаимодействуя с лигандами-белками 106 внеклеточного матрикса, выполняют различные функции, принимая активное участие в адгезии, инвазии и метастазировании опухолевых клеток. [100; 146]. Ferraro A. еt al. (2014) показали механизм, при котором гистоновая метилтрансфераза EZH2 ингибирует промоторную область гена ITGA2, что приводит к подавлению его экспрессии, в этом случаеотсутствие интегрина в клетках рака толстой кишки приводит к усилению подвижности актинового скелета через белок кофилин, что повышает агрессивные свойства опухоли.
Наши результаты подтверждают также данные других авторов, исследующих интегрины. Так, в работах Ahmed N.etal. (2007) изучали экспрессию интегринасубъединиц alpha3, alpha6, alphav и бета1 в нормальных яичниках, доброкачественных опухолей яичников и рака яичника различных гистологических вариантов. Был выявлен, различный характер экспрессии alpha3, alpha6, alphav и бета1 субъединиц интегрина при раке яичников по сравнению с нормальными яичниками и доброкачественными опухолями яичников. Более того, клеточные линии рака яичников продемонстрировали значительно повышенный уровень экспрессии alpha3, alpha6, alphav и бета1 субъединиц интегрина. По мнению Ahmed N. еt al. (2007) [123] эти результаты указывают на то, что alpha3beta1, alphavbeta1 и alpha6beta1 интегрины опосредуют пролиферацию, адгезию, миграцию и инвазию клеток рака яичников в ответ на изменение экстраклеточного матрикса. Тогда интегрины могут быть ингибиторами метастазирования рака яичников.Более поздние исследования Villegas-Pineda, Garibay-Cerdenares(2015) подтвердили роль интегринов в развитии опухолей. По их данным, опухолевые клетки характеризовались повышенной экспрессией субъединиц а5, V, 1, 3 и beta4 интегринов по сравнению со здоровой тканью яичника. Данные результаты свидетельствуют о том, что повышенная экспрессия этих молекул и модификации фукозилирования являются характеристиками злокачественного процесса. Таким образом, по мнению авторов, эти молекулы могут быть перспективными терапевтическими мишенями у пациентов с данным типом неоплазии.Samardzija С. еt al. (2016)[71] показали, что Oct4A и beta1 интегрины позволяют взаимодействовать между клетками и окружающей их микросредой и играют фундаментальную роль в развитии метастазов. Отмечена значительно повышенная экспрессия Oct4A в высокодифференцированных серозных опухолях яичников по сравнению с нормальными тканями яичников. Таким образом, по данным последних исследований рецепторного статуса опухолей яичников, показана перспективность исследования интегриновых рецепторов, как маркёров злокачественного потенциала и точек приложения для возможной таргетной терапии.Наши результаты подтвердили перспективность ITGA2, как маркёра агрессивности опухолей яичников, так как показали достоверное увеличение ITGA 2 приснижении агрессивности опухолевого процесса (рисунок8).
Наряду с изучением рецепторного статуса опухолевых клеток в настоящее время большое значение придается изучению внеклеточного матрикса, который активно взаимодействует с опухолевой клеткой, опосредуя её агрессивное поведение. Одним из таких компонентов является остеопонтин.
Впервые остеопонтин был идентифицирован в клетках рака яичников с помощью ДНКовых микрочипов, используемых для выявления генов с повышенными уровнями экспрессии, и при этом оказалось, что он может быть потенциальным диагностическим маркером рака яичников [78; 112].
Результаты наших исследований показали достоверное (p 0,05) увеличение уровня мРНК-изоформ остеопонтина OPNa и OPNb, как в образцах тканей рака яичников, так и в образцах пограничных опухолей по сравнению с образцами кистом яичников. Уровень экспрессии обеих изоформ был значительно (OPNa в 3,1 раза, p = 0,014005; OPNb в 2,4 раза, p = 0,034565) повышен в образцах пограничных опухолей по сравнению с раком яичника. В то же время уровень мРНК-изоформы OPNc был низким во всех образцах кистом яичников, тогда как в тканях пограничных опухолей яичников наблюдалось значительное повышение уровня экспрессии по сравнению с тканями рака яичников (в 2,4 раза, p = 0,000754).
Связь молекулярных маркеров с факторами риска прогрессирования пограничных опухолей яичников
Учитывая новую классификацию от 2014 года клинические факторы прогноза не являются показанием для проведения химиотерапии. Об агрессивности опухоли могут говорить больше молекулярные факторы прогноза, что может в дальнейшем явиться показанием, как к проведению химиотерапии, так и показанием от ее отказа.
В нашей работе мы использовали аналогичные подходы с использованием белков внеклеточного матрикса и белков клеточной адгезии, контролирующих агрессивное поведение опухолевой клетки.
Проанализировав полученные результаты, мы представили гипотетическую схему патогенеза опухолей яичников с участием белков клеточной адгезии (рисунок 32). В норме взаимодействие белков внеклеточного матрикса (OPNa, OPNb, OPNс и TSP1) с их рецептором представляет собой строго регулируемый процесс. Такое взаимодействие обеспечивает тесные межклеточные контакты, что не позволяет клетке мигрировать.Любое нарушение (генетическое, эпигенетическое) экспрессии генов данных белков приводит к изменению взаимодействия лиганд-рецептор, что сопровождается снижением клеточной адгезии и, как следствие, повышению клеточной миграции. Так как интегриновые рецепторы также участвуют в проведении митогенного сигнала, активность ключевых сигнальных молекул pFAK, pAkt снижается, что сопровождается изменением экспрессии генов, клеточной дифференцировки и повышением выживаемости клетки. Все эти процессы характерны для трансформированных эпителиальных клеток яичника.
Согласно теории [111], ПОЯ являются переходным звеном патогенеза серозных карцином низкой степени злокачественности. Поэтому особый интерес представляет поиск новых молекулярных маркеров прогрессирования опухоли и установление их взаимосвязи с традиционными факторами риска для построения математической модели онкологического риска рецидива, что особенно актуально для молодых пациенток в плане применения у данной группы органосберегающего лечения. Молекулярные факторы ПОЯ во взаимосвязи с онкологическим риском весьма немногочисленны: гиперэкспрессия c-erb-B2(HER-2/neu), Bcl-2, p53, PCNA, Ki67, гиперэкспрессия металлопротеиназ [25]. Другими авторами исследуемые нами молекулярные факторы в таком аспекте не анализировались. Поэтому на заключительном этапе нашей работы анализировалась экспрессия ITGA2, OPN и TSP1 в ассоциации с известными факторами риска развития и прогрессирования ПОЯ, такими как размеры опухоли, стадия, наличие спаечного процесса, гистологическая характеристика опухоли (наличие микропапиллярной структуры опухоли), сочетание с ожирением, эндокринопатия и бесплодие в анамнезе, уровень сывороточных онкомаркеров СА 125 и НЕ 4 для определения их статистической значимости и разработки математической модели риска прогрессирования ПОЯ. При проведении статистического анализа взаимосвязи факторов риска рецидива ПОЯ с уровнем экспрессии онкомаркеров ITGA2, TSP1 и OPN только экспрессия OPN показала статистически значимую связь с факторами риска прогрессирования ПОЯ. О возможной статистически значимой связи других онкомаркеров ITGA2 и TSP1 с факторами риска рецидива ПОЯ окончательно можно судить при увеличении выборки пациентов, что требует проведения дальнейшего исследования.
Следующим этапом был анализ взаимодействия исследуемых маркеров с факторами риска ПОЯ для построения математической модели для подтверждения их значимости в качестве предикторов ПОЯ. Анализ показал, что экспрессия ITGA2 коррелирует с предикторными факторами возраста, уровнем экспрессии онкомаркера СА 125 и наличием солидного компонента опухоли. Эти результаты подтверждают имеющиеся на сегодня данные о роли интегриновых рецепторов в злокачественной трансформации [78]. Таким образом, этот маркер показал свою значимость для прогноза прогрессирования ПОЯ. Суммируя полученные результаты, можно заключить, что система трансмембранных рецепторов и их лигандов может быть использована для прогностически значимой оценки трансформации ПОЯ в злокачественный вариант карциномы низкой степени злокачественности. Прогностическая значимость других САМ-белков клеточной адгезии требует дальнейшего изучения.
С учетом разработанной математической модели прогнозирования онкологического риска, учитывающей молекулярные характеристики опухоли и клинические факторы риска, нами разработан алгоритм ведения больных с ПОЯ. Таким образом: 1) Клинико-морфологическое обследование необходимо дополнять изучением молекулярной характеристики опухоли (ITGA2, OPN и TSP1); 2) У всех пациенток с пограничными опухолями яичников должна проводиться оценка онкологического риска по разработанной модели с учетом клинико-морфологической характеристики, уровня маркера СА125 и уровня экспрессии интегранового рецептора.