Содержание к диссертации
Введение
Глава 1 Обзор литературы 17
1.1 Введение 17
1.2 Методы оценки МОБ 19
1.3 Иммунологические подходы к детекции МОБ при В-ОЛЛ 23
1.3.1 В-клеточный онтогенез в основе диагностики В-ОЛЛ 23
1.3.2 15-й день терапии индукции ремиссии 26
1.3.3 Иммунологические основы детекции клеток МОБ в конце терапии индукции ремиссии (29-33-й дни) и на более поздних сроках терапии 27
1.3.3.1 ЛАИФ, выявляемые на основании различий в уровнях экспрессии антигенов 28
1.3.3.2 ЛАИФ, выявляемые на основании экспрессии антигенов не свойственных линии дифференцировки 31
1.3.3.3 ЛАИФ, выявляемые на основании асинхронной экспрессии антигенов 33
1.3.4 Оценка МОБ в условиях таргетной терапии 33
1.3.5 Сравнительная характеристика проточно-цитометрических протоколов детекции МОБ при В-ОЛЛ 34
1.4 Иммунологические основы детекции МОБ при Т-ОЛЛ 37
1.4.1 Т-клеточный онтогенез в основе диагностике ОЛЛ из Т-линейных предшественников и выявлении клеток МОБ 37
1.4.2 Проточно-цитометрические протоколы мониторинга МОБ при Т-ОЛЛ 40
1.5 Заключение 42
Глава 2 Материалы и методы 44
2.1 Группы больных 44
2.2 Химиотерапевтические режимы 45
2.3 Методы оценки иимунофенотпа бластных клеток при диагностике и мониторинге МОБ 46
2.4 Алгоритм оценки МОБ при В-ОЛЛ 51
2.5 Алгоритм оценки МОБ при Т-ОЛЛ 53
2.6 Статистическая обработка результатов исследования 55
Результаты собственных исследований 56
Глава 3 В-линейные ОЛЛ 56
3.1 Иммунологическая характеристика бластных клеток при первичной диагностике как основа мониторинга МОБ 56
3.1.1 Общая характеристика 56
3.1.2 Основные иммунологические критерии аберрантности бластов. Экспрессия антигенов CD58 и CD38 58
3.1.3 Дополнительные иммунологические критерии аберрантности бластов 61
3.2 Иммунофенитипическая характеристика бластных клеток в рецидиве заболевания 63
3.3 Морфо-иммунологическая характеристика образцов костного мозга при оценке МОБ на 15-й день терапии 67
3.3.1 Общая характеристика образцов 67
3.3.2 Характеристика образцов костного мозга с точки зрения морфологических критериев ответа на терапию 69
3.3.3 Сопоставление различных иммунологических протоколов оценки МОБ на 15-й день терапии 75
3.3.4 Иммунологические подходы к выявлению В-линейных предшественников в образцах КМ на 15-й день терапии 77
3.3.5 Иммунофенотип клеток МОБ на 15-й день терапии 81
3.3.6 Технические особенности проточно-цитометрической оценки МОБ на 15-й день терапии 83
3.3.7 Клиническое значение оценки МОБ на 15-й день терапии 85
3.4 Проточно-цитомерическая оценка клеток МОБ на 33-й день терапии 90
3.4.1 Морфо-иммунологическая характеристика образцов костного мозга при оценке МОБ на 33-й день терапии 90
3.4.2 Иммунологические критерии оценки МОБ на 33 день терапии 94
3.4.3 Клиническое значение определения МОБ на 33-й день терапии 101
3.5 Морфо-иммунологическая характеристика образцов костного мозга при оценке МОБ на 78-й день терапии 103
3.6 Мониторинг МОБ в рецидиве В-ОЛЛ 107
3.6.1 Оценка МОБ после I блока противорецидивной терапии (35-й день) 107
3.6.2 Мониторинг МОБ в условиях таргетной противорецидивной терапии 109
Глава 4 Т-линейные ОЛЛ 116
4.1 Иммунологическая характеристика бластных клеток при первичной диагностике 116
4.2 Иммунологические подходы к оценке МОБ при Т-ОЛЛ 124
4.3 МОБ на 15-й день терапии 127
4.3.1 Общая характеристика образцов костного мозга для оценки МОБ 127
4.3.2 Морфо-иммунологическая характеристика образцов костного мозга с точки зрения критериев ответа на терапию 128
4.3.3 Клиническое значение МОБ на 15-й день терапии при Т-ОЛЛ 132
4.4 МОБ на 33-й день терапии 133
4.4.1 Общая характеристика образцов костного мозга для оценки МОБ 133
4.4.2 Морфо-иммунологическая характеристика образцов костного мозга с точки зрения критериев ответа на терапию 134
4.5 Сопоставление иммунологических алгоритмов оценки МОБ при Т-ОЛЛ 138
Заключение 141
Выводы 153
Практические рекомендации 155
Список сокращений 156
Список литературы 157
- ЛАИФ, выявляемые на основании различий в уровнях экспрессии антигенов
- Характеристика образцов костного мозга с точки зрения морфологических критериев ответа на терапию
- Иммунологические критерии оценки МОБ на 33 день терапии
- Сопоставление иммунологических алгоритмов оценки МОБ при Т-ОЛЛ
ЛАИФ, выявляемые на основании различий в уровнях экспрессии антигенов
Наиболее часто используемым критерием аберрантности В-ЛП при выявлении клеток МОБ на настоящий момент считается гиперэкспрессия АГ CD58 в сочетании со слабой экспрессией АГ CD38, либо ее отсутствием. Нормальные В-ЛП в свою очередь имеют иммунофенотип CD58+/low/CD38+ (рисунок 2, M. Borowitz, 2010) [118, 146].
АГ CD58 (lymphocyte function-associated antigen-3, LFA-3 — лейкоцит-ассоциированный АГ-3), поверхностная молекула клеточной адгезии суперсемейства иммуноглобулинов, связываясь с CD2 на Т-клетках, участвует в различных иммуномодуляторных эффектах [22, 61, 148]. LFA-3 широко экспрессирован как на гемопоэтических, так и на негемопоэтических клетках, а также злокачественных новообразованиях, включая хронические В-клеточные лейкозы [43], опухолевые Т-клетки [74], клетки Рид-Штернберга [44], миелому [133] и миелоидные лейкозы [115]. Показано, что опухолевые В-лимфобласты характеризуются гиперэкспрессией CD58 [86]. De Waele с соавт. [42] сравнили экспрессию ряда молекул адгезии, включая CD58 на CD34+ клетках острого миелоидного и лимфобластного лейкоза с экспрессией этих молекул на неопухолевых аналогах. Авторами продемонстрировано, что степень экспрессии CD58 на В-ЛП выше, чем на CD34+ В-клетках в норме. Chen с соавт. подтвердили значение гиперэкспрессии CD58 при В-ОЛЛ у детей методом анализа комплиментарной ДНК-матрицы [29]. В исследовании I-BFM-ALL-MRD-Study Group показано, что молекула CD58 экспрессирована на 99,4% случаев ОЛЛ из В-ЛП, гиперэкспрессия отмечается АГ в 93,5% случаев. При этом авторами показана стабильность экспрессии АГ на различных этапах системной противоопухолевой терапии. [146].
Выраженная экспрессия СD38, трансмембранного протеина, обладающего рецепторной и энзимной активностью ассоциируется с важной функциональной ролью молекулы в онтогенезе как В-, так и Т-линейных предшественников. Вместе с тем, имеются сведения о неоднородности и колебаниях экспрессии АГ в ходе созревания кроветворных клеток. Наиболее стабильная экспрессия антигена показана для костномозговых клеток-предшественников [27, 68, 132].
Аберрантной в отношении CD38 считается слабая экспрессия молекулы на В-ЛП [82]. Min Xia и соавт. при анализе иммунофенотипа бластных клеток 139 детей с впервые установленным диагнозом В-ОЛЛ аберрантная экспрессия CD38 выявлена в 61,2% случаев, что явилось надежным маркером клеток МОБ в процессе терапии [94].
Однако наиболее информативным в отношении выявления клеток МОБ является оценка одновременной экспрессии молекул CD58 и CD38 на В-ЛП. Если в случае CD58 можно говорить об аберрантной экспрессии в большинстве случаев В-ОЛЛ (93,5% по данным M.Veltroni с соавт.), то почти 40,0% случаев В-ОЛЛ характеризуются отсутствием аберрантности в отношении CD38 (Min Xia и соавт.). Таким образом, необходимы дополнительные критерии аберрантности опухолевых В-лимфобластов, для повышения чувствительности оценки МОБ методом ПЦ.
К числу АГ, аберрантность которых определяется различием в уровнях экспрессии на нормальных клетках КМ и их опухолевых аналогах, помимо CD58 и CD38 можно отнести Common-антиген CD10, CD9, а также молекулу CD81. Common-ОЛЛ-антиген CD10, явился одним из первых дифференцировочных АГ, использовавшихся для классификации ОЛЛ [106]. Первоначально описан Greaves и соавт. в 1975 году [62] и позднее классифицированн как мембран-ассоциированный фермент нейтральная эндопептидаза [87, 124].
Экспрессия CD10 в процессе нормального онтогенеза характерна для стадии пре-пре-В. Про-В иммуноподвариант ОЛЛ (CD10-негативный) характеризуется неблагоприятным прогнозом. Гиперэкспрессия (в сравнении с нормальными В-ЛП) common-антигена является признаком ЛАИФ опухолевых В-лимфобластов и может служить маркером наиболее злокачественной популяции клеток ОЛЛ [48, 108].
Оценка экспрессии CD10 является неотъемлимой частью ПЦ протоколов мониторинга МОБ на всех этапах системной терапии. Помимо анализа аберрантности (гиперэкспрессии), CD10, как один из наиболее стабильно экспрессируемых АГ, служит для выявления В-ЛП в целом (в случае пре-пре-В и пре-В ОЛЛ).
Оценка экспрессии CD9 предусмотрена как в ранних (4-х цветных), так и более поздних (6-цветных) ПЦ протоколах COG (M. Borowitz и соавт.). Молекула CD9 относится к семейству тетраспонинов и участвует в функциональной активности комплекса CD19/CD21/CD81 [71, 121]. Отчетливо экспрессируется на ранних В-ЛП, исчезая на стадии пре-В и вновь появляясь на мембране уже зрелых В-клеток [10]. Аберрантной считается её мономорфная гиперэкспрессия на В-ЛП [15].
К АГ, аберрантность которых определяется разницей в уровнях экспрессии, относится молекула семейства тетраспонинов CD81. Присутствие CD81 в процессе нормального онтогенеза В-клеток обусловлено прямой ассоциацией с экспрессией CD19 и участием в CD19-CD21-CD81 сигнальном комплексе [18, 53, 71, 121, 125, 152]. Аберрантной в отношении CD81 считается слабая экспрессия или её отсутствие на мембране опухолевых В-лимфобластов [10, 97]. T. Muzzafar и соавт. показано, что аберрантная экспрессия CD81 выявляется в 82% случаев В-ОЛЛ [97]. В случае выявления аберрантной экспрессии при первичной диагностике, CD81 может служить надежным критерием наличия МОБ.
Таким образом, группу ЛАИФ, выявляемых на основании различий в уровнях экспрессии на нормальных В-ЛП и их опухолевых аналогах составляют следующие маркеры:
1. характеризующиеся аберрантной гиперэкспрессией CD58, CD10, CD9;
2. с аберрантной слабой экспрессией или ее отсутствием CD38, CD81. При этом, согласно цитометрическим подходам к анализу малых популяций, наиболее эффективной является комбинация из ярко- и слабоэкспрессируемого маркеров (например, CD58/CD38, CD9/CD81, CD58/CD81, CD10/CD38) на В-ЛП (CD19+CD45lowTdT+CD34+).
Характеристика образцов костного мозга с точки зрения морфологических критериев ответа на терапию
По данным морфологического исследования среднее содержание бластов составило 6,4±1,3%. В 9,2% случаях (12 из 130 образцов) бластных клеток не выявлено.
В соответствии со стандартными морфологическими критериями оценки первичного ответа на терапию в образцах костного мозга на 15-й день проанализировано три группы больных.
Большинство (80,0%) больных с точки зрения морфологических критериев попадали в группу хорошего прогноза - менее 5,0% бластных клеток в костном мозге. Это группа М1 ( 5% бластов).
Среднее содержание бластных клеток в данной группе составило 1,6±0,1%.
19 больных в образцах костного мозга которых количество бластов варьировало от 5,0% до 25,0%, согласно морфологическим данным составили группу промежуточного прогноза М2 (5,0 25,0%).
Группа плохого прогноза (М3 (25%)) — 7 больных в образах костного мозга которых выявлялось 25% бластных клеток и более.
В каждой группе проанализированы и сопоставлены количество бластов и лимфоцитов, клеточность образцов, а также уровни МОБ. Данные представлены в таблице 20.
Среди образцов каждой морфологической группы выделены подгруппы на основании различного количества клеток МОБ. Критерий разделения подгрупп — протокол BFM для оценки МОБ во время индукционной химиотерапии:
0,1% (включая негативные случаи) — стандартный риск
0,1-10,0% — средний риск
10% и более — высокий риск
Стандартный пороговый уровень МОБ-негативности — 0,01% опухолевых клеток в образце.
Группу М1 составили 104 пациента. Согласно морфологическим критериям оценки первичного ответа на терапию данная выборка относится к группе хорошего ответа (таблица 21).
Среднее содержание бластов КМ в данной выборке – 1,6±1,1%. В 11,5% (12 образцов из 104) случаев бластные клетки отсутствовали.
44,2% (46 из 104) образцов костного мозга имели крайне низкую клеточность — 10,0 тыс/мкл и меньше (средняя клеточность 6,1±0,4 тыс/мкл). Нормоклеточным (клеточность 41,6 тыс/мкл) был 1 образец из выборки.
В 11,5% случаев данные морфологии и ПЦ совпали (отсутствие бластов по данным морфологии и полная МОБ-негативность (количество клеток МОБ 0,01%) по данным ПЦ).
В 88,5% (92 из 104) случаях нами выявленна МОБ-позитивность образцов. При этом в 19 из 104 образов (18,3%) количество клеток МОБ составило 1,0% и более, а в 4 случаях 10,0% и более, т.е. на основании иммунологических данных 18,4% детей должны быть переведены в группу промежуточного риска, а 3,8% больных в группу высокого риска.
Обращает на себя внимание, что образцы группы М1 характеризовались выраженным процентом лимфоцитов, в среднем более 60,0%
Присутствие МОБ-позитивных образцов (ПЦ) в группе М1 (группа хорошего морфологического ответа) может быть объяснено мимикрией бластных клеток, то есть их полной морфологической схожестью с лимфоцитами. Это затрудняет возможность четкой морфологической верификации остаточных лейкозных бластов.
Группу М2 составили 19 пунктатов костного мозга (таблица 22).
Среднее содержание бластов в данной выборке — 11,8±1,1%. Все образцы характеризовались выраженной пропорцией лимфоцитов ( 28,0%).
Образцы костного мозга с содержанием клеток МОБ менее 0,1% (стандартный риск) по данным проточной цитометрии в данной группе отсутствовали.
В 63,2% случаев (12 из 19 пуктатов) количество остаточных бластов по данным проточной цитометрии варьировало от 1,0 до 9,9%, составив в среднем 5,4±0,7%. В 26,3% случаев (5 из 19 образцов) количество остаточных бластных клеток составило 10,0% и более.
Таким образом, данные ПЦ и морфологические для образцов группы М2 не противоречили друг другу. 7 образцов КМ морфологически содержали 25,0 и более % бластов и составили группу плохого прогноза М3 (таблица 23). Пунктаты данной выборки характеризовались нормальным содержанием лимфоцитов (среднее 26,5±12,6%). В группе отсутствовали образцы с количеством клеток МОБ менее 1,0% по данным проточной цитометрии.
8 большинстве образцов этой группы (85,7%, 6 образцов из 7) по данными проточной цитометрии выявлено 10,0% и более МОБ-позитивных клеток. И только в одном случае количество клеток МОБ составило 5,5%, то есть с точки зрения данных ПЦ больной может быть отнесен к группе промежуточного риска и интенсификации терапии не требует.
При сопоставлении средних значений показателей анализируемых групп достоверные отличия получены в отношении количества лимфоцитов для групп М1 и М3 (р= 0,0001) и групп М2 и М3 (р= 0,0001) (таблица 26 и 27) и в отношении количества клеток МОБ для всех групп сравнения (р 0,0001) (таблица 24).
Иммунологические критерии оценки МОБ на 33 день терапии
Аберрантность первичной опухоли в отношении антигенов CD58 и СD38 в анализируемой на 33 день индукционной химиотерапии группе больных была оценена в 50,0% больных (40 случаев из 80). Аберрантными в отношении CD58 антигена было 28 случаев из 40 (70%) случаев, аберрантность в отношении CD38 антигена выявлена в 60,0% случаев (24 из 40). Аберрантными по сочетанию антигенов были 55,0% случаев (22 из 40), отсутствием аберрантности характеризовались 45,0% (18 из 40).
С учетом того, что выявление клеток МОБ в конце терапии индукции (33-й день), и на всех последующих этапах терапии основано на поиске аберрантных В-лимфобластов, в случае отсутствия аберрантности по CD58/CD38 при первичной диагностике, дополнительно к данному сочетанию оценены маркеры, позволяющие на основании литературных данных идентифицировать клетки остаточной опухоли.
Так, в 21 образце КМ нами оценены следующие АГ: CD81, CD123, CD9, CD21, CD24. В результате выработаны наиболее информативные сочетания АГ для выявления аберрантных В-лимфобластов. В случае отсутствия аберрантности по одному из АГ пары CD58/CD38 при первичной диагностике, поиск клеток МОБ основывался на оценке комбинации CD58/CD10 (рисунок 23) или CD38/CD10 (рисунок 24).
На рисунке приведен пример оценки количества клеток МОБ на 33-й день химиотерапии индукции. У больного 8 лет с пре-пре-В иммуноподвариантом ОЛЛ CD58+/lowCD38+фенотип опухолевых В-лимфобластов, т.е. отсутствие аберрантности в отношении АГ CD58 -цитограмма А (ось x – CD38, ось у – CD58). Цитограмма А-1 (ось х – CD58, ось у – параметры бокового светорассеяния) подтверждает слабую экспрессию CD58.
Цитограмма Б с учетом отсутствия аберрантности по CD58 при первичной диагностике, оценка количества клеток МОБ основана на экспрессии CD10 (ось у) в сочетании с отсутствием экспрессии CD38 (ось х) на CD19+ В-клетках. Количество клеток МОБ (гейт 3, темно-синий цвет) составило 0,00095% от ЯСК образца - МОБ-негативный статус.
В случае CD20-позитивных ОЛЛ (асинхронность экспрессии стадиеспецифичных АГ), определение МОБ было проведено на основании экспрессии CD20 в сочетании с CD34 (рисунок 25).
На рисунке 25 приведен пример выявления клеток МОБ на основании комбинации CD20/CD34 АГ на 33-й день индукционной химиотерапии у больного 2-х лет с CD20-позитивным пре-пре-В иммуноподвариантом В-лин ОЛЛ. На цитограмме А представлены опухолевые В-лимфобласты (CD45lowCD19+) на этапе первичной диагностики (ось х – CD20 против оси у – CD10), 60,0% которых экспрессирует АГ CD20. Цитограмма Б демонстрирует оценку количества клеток МОБ у этого больного на основании одновременной экспрессии АГ CD20 (ось х) в сочетании с АГ CD34 (ось у). Количество клеток МОБ составило 0,027% от ЯСК образца — МОБ-позитивный статус.
В качестве нового сочетания, с учетом нормального В-клеточного онтогенеза, для выявления аберрантных В-линейных предшественников в случае отсутствия аберраности по CD58/CD38 была рассмотрена комбинация CD123 и CD81 АГ. Опухолевые В-лимфобласты характеризуются яркой экспрессией CD123 в сочетании со слабой экспрессией CD81, то есть обладают CD123+/++CD81low иммунофенотипом, как это продемонстрировано на рисунке 26.
На рисунке 27 представлен пример сопоставления количества клеток МОБ, выявленных на основании аберрантной экспрессии CD58/CD38 и CD123/CD81 пар АГ. Цитограмма А – В-ЛП выявлены на основании отчетливой экспрессии CD10 (ось у) в сочетании со слабой экспрессией CD45 (ось х), гейт 4 (0,03% от ЯСК) в пределах CD19+ В-клеток. Цитограмма Б – В-ЛП характеризуются гиперэкспрессией CD58 (ось у) в сочетании с отсутствием молекулы CD38 (ось х), также демонстрируя CD123++CD81low иммунофенотип (цитограмма В, CD123 -ось у простив CD81 - ось х). Таким образом, В-лимфобласты демонстрируют аберрантность по всем 4 проанализированным АГ и нормальные В-ЛП в образце отсутствуют. Количество аберрантных В-ЛП составило 0,027% от ЯСК образца – МОБ-позитивный статус.
Далее продемонстрирован пример выявления клеток МОБ на основании оценки количества CD123++CD81low В-ЛП (рисунок 28).
На рисунке пример оценки количества клеток МОБ на 33-й день лечения. Аберрантные В-лимфобласты выявлены на основании яркой экспрессии CD123 (ось х) в сочетании со слабой экспрессией CD81 на В-ЛП (CD19+CD10+CD45low). Количество клеток МОБ составило 0,007% от ЯСК образца – МОБ-негативный статус.
В случае выявления мономорфной коэкспрессии пан-миелоидных АГ (CD13, CD33, CD65) опухолевыми В-лимфобластами на этапе первичной диагностики, данный признак также может быть использован в качестве признака остаточной опухоли при мониторинге МОБ (рисунок 29). Однако необходимым условием является мономорфная экспрессия АГ несвойственных линии дифференцировки.
Пример случая CD66c-позитивного ОЛЛ пре-пре-В-иммуноподварианта у ребенка 6 лет. На цитограмме А представлены бластные клетки (CD45-) в дебюте заболевания, 95,0% которых экспрессирует CD19 (ось у) в сочетании с отчетливой экспрессией CD66c (ось х). Цитограмма Б демонстрирует оценку количества клеток МОБ на 33-й день. В гейте CD19+-клеток остаточная опухоль выявлена на основании отсутствия экспрессии АГ CD20 (ось у) в сочетании с отчетливой экспрессией CD66c (ось х), и составляет 0,029% от ЯСК – МОБ-позитивный статус.
Одним из АГ для выявления клеток МОБ также служит молекула CD9. Аберрантной является яркая мономорфная экспрессия АГ на В-лимфобластах, как это проемонстрировано на цитограмме А рисунка 31.
В нашем исследовании большинство образцов (87,5%) были аберрантны в отношении CD9 при первичной диагностике, что было использовано при характеристике клеток МОБ (рисунок 31).
На цитограмме А представлены опухолевые В-лимфобласты (CD45-CD19+) на этапе первичной диагностики, характеризующиеся отчетливой экспрессией TdT (ось у) в сочетании с мономорфной экспрессией CD9 (ось х). Также клетки опухоли аберрантны в отношении молекулы CD81 – цитограмма Б (ось х – CD81 простив CD45 – ось у). При сопоставлении с остаточными нормальными В-ЛП (гейт 4, розовый цвет), ярко экспрессирующими CD81, опухолевые В-лимфобласты характеризуются слабой (аберрантной) экспрессией АГ. Цитограмма В. Клетки МОБ выявлены на основании яркой мономорфной экспрессии CD9 (ось у) в сочетании со слабой экспрессией CD81 (ось х) – гейт 4, темно-синий цвет. Их количество составило 0,015% от ЯСК образца – МОБ-позитивный статус.
АГ CD21 появляется на поздних этапах дифференцировки, начиная со стадии пре-В.
Во всех случаях, включенных в исследование, экспрессия CD21 на опухолевых В-лимфобластах отсутствовала при первичной диагностике. В нашем исследовании ввиду отсутствия аберрантности опухолевых клеток в отношении CD21 в дебюте болезни, экспрессия антигена в качестве критерия оценки количества клеток МОБ не оценивалась.
Сопоставление иммунологических алгоритмов оценки МОБ при Т-ОЛЛ
В протоколе группы BFM для оценки МОБ при Т-ОЛЛ в качестве каркасных АГ используется CD7 в сочетании с мембранным CD3. Однако АГ CD7 достаточно широко представлен на миелокариоцитах, включая как лимфоидные, так и миелоидные клетки-предшественники. С учетом онтогенетических особенностей экспрессии Т-линейных антигенов, нами предложено основывать поиск Т-ЛП (собственно клеток МОБ) на оценке экспрессии цитоплазматического CD3, как наиболее раннего линейно-специфичного маркера Т-клеток.
Мы сопоставили эти два подхода к оценке клеток МОБ (стандартный протокол BFM, основанный на подсчете клеток МОБ в пределах CD7-позитивных клеток, и оценку МОБ в пределах cyCD3+ клеток) как на 15-й, так и 33-й дни индукционной химиотерапии. Данные представлены в таблицах 49 и 50.
При сравнении МОБ-негативных образцов на 15-й день терапии не выявлено. Большинство (94,1%, n=16) пунктатов составили группу стандартного риска по данным МОБ на 15-й день. В целом данные по количеству клеток МОБ не отличаются в зависимости от алгоритма подсчета. Однако важно отметить, что 2 образца при подсчете на основе cyCD3 из группы промежуточного риска перешли в группу стандартного риска. Один образец группы промежуточного риска, оставшись в пределах группы, изменил уровень МОБ на МОБ 1,0%. В группу высокого риска по данным МОБ попал один пунктат КМ.
МОБ-негативных образцов в конце терапии индукции (33-й день) не выявлено. В большинстве образцов результаты количества клеток МОБ не отличаются в зависимости от выбранного алгоритма подсчета. Однако при подсчете, основанном на определении количества cyCD3, 4 образца не совпали по уровням МОБ и 3 изменили группу риск-стратификации. Два образца КМ перешли из группы промежуточного риска в стандартный риск (сохранив при этом МОБ-позитивность). Один образец группы промежуточного риска, оставшись в пределах группы, изменил уровень МОБ на МОБ 1,0% (но менее 10,0%). Один образец, стратифицированный в группу высокого риска при подсчете по CD7, перешел в группу промежуточного риска при пересчете на cyCD3 (при этом морфологически у данного больного выявлено 2,8% бластов).
Таким образом, можно заключить, что оценка количества клеток МОБ при Т-ОЛЛ на основании выявления cyCD3+sCD3- популяции является более точной.
Резюме
Оценку МОБ при Т-ОЛЛ на всех этапах терапии можно проводить иммунологически с использованием методов проточной цитометрии.
Для выявления клеток остаточной опухоли достаточно определиться с количеством Т-ЛП, то есть клеток с иммунофенотипом cyCD3+CD7+/++sCD3-.
Важным является использование правильного клона МКА для выявления экспрессии CD3. В случае оценки экспрессии CD3 в цитоплазме, это клон UCHT1.
С учетом данных проточной цитометрии на 15-й и 33-й дни терапии Т-ОЛЛ полной лейкемической циторедукции не достиг ни один больной.