Содержание к диссертации
Введение
ГЛАВА 1. Обзор литературы .12
1.1 Фармакогенетика как научная дисциплина 12
1.2 Современные взгляды на развитие фармакогенетики в офтальмологии .13
1.3 Фармакогенетика возрастной макулярной дегенерации .14
ГЛАВА 2. Материалы и методы .34
ГЛАВА 3. Влияние полимофизма y402h гена cfh на терапевтический ответ при лечении ранибизумабом 54
3.1 Исходные характеристики выборки в зависимости от наличия полиморфизма 402H гена CFH .54
3.2 Эффективность лечения ранибизумабом в зависимости от наличия полиморфизма Y402H гена CFH 59
ГЛАВА 4. Влияние полимофизма 625А гена htra1 на терапевтический ответ при лечении ранибизумабом 79
5.1 Исходные характеристики выборки в зависимости от наличия полиморфизма 625А гена HRTA1 79
5.2 Эффективность лечения ранибизумабом в зависимости от наличия полиморфизма 625А гена HTRA1 88
ГЛАВА 6. Влияние полимофизма на терапевтический ответ при лечении ранибизумабом
6.1 Исходные характеристики выборки в зависимости от наличия полиморфизма 251А гена IL-8 98
6.2 Эффективность лечения ранибизумабом в зависимости от полиморфизма 251A гена IL-8 104
ГЛАВА 7. Совместное влияние изучаемых полимофизмов генов cfh, htra1 И IL -
8 На терапевтический ответ при лечении ранибизумабом .114
Заключение .124
Выводы .131
Практические рекомендации .132
Список литературы .133
- Современные взгляды на развитие фармакогенетики в офтальмологии
- Эффективность лечения ранибизумабом в зависимости от наличия полиморфизма Y402H гена CFH
- Эффективность лечения ранибизумабом в зависимости от наличия полиморфизма 625А гена HTRA1
- На терапевтический ответ при лечении ранибизумабом
Современные взгляды на развитие фармакогенетики в офтальмологии
В офтальмологии одними из первых препаратов, при применении которых была замечена вариабельность ответа, были мидриатические средства. Около 100 лет назад Чен и Пат отметили различную эффективность действия кокаина и эфедрина у представителей разных рас [53]. Позже на примере атропина было установлено, что препарат распределяется по-разному у людей с разной пигментацией радужки. У кареглазых происходит неспецифическое связывание атропина с меланином, что уменьшает биодоступность препарата для рецепторов-мишеней [144]. Также у людей с карими глазами было отмечено снижение эффективности 0,25 % тимолола [145] и других препаратов. Однако в таких исследованиях не связывали ответ на лечение с конкретными генами и их полиморфизмами. Впервые это было сделано в исследованиях по изучению эффективности лечения глаукомы различными препаратами [121]. Например, в исследовании с участием 48 здоровых добровольцев было установлено, что носители полиморфизма Arg389 гена 1-адренорецептора по сравнению с участниками с полиморфизмом Gly389 имели более высокое исходное внутриглазное давление и лучший терапевтический ответ на 0,25 % бетаксолол [148]. Подобное исследование здоровых добровольцев при применении 0,005 % латанопроста показало корреляцию SNP rs3753380 и rs3766355 в промоторной зоне и интроне 1 F2-простагландинового рецептора с ответом на однонедельное применение препарата, а Т и С аллели этих полиморфизмов соответственно с низкой транскрипционной активностью гена рецептора [143]. Вслед за исследованиями фармакогенетики глаукомы в последние годы появилось значительное количество работ в области ВМД [151].
Фармакогенетика возрастной макулярной дегенерации Эпидемиология и патогенез возрастной макулярной дегенерации ВМД является ведущей причиной потери центрального зрения среди людей старше 50 лет в развитых странах [45, 51, 95, 142]. Частота встречаемости заболевания у людей 40-50 лет составляет около 2%, тогда как после 80 лет эта цифра возрастает до 35%. В США насчитывается более 2 млн людей с низким зрением вследствие ВМД, а еще около 8 млн имеют начальные проявления заболевания. В 2010 г. в США экономические потери из-за нарушения зрения вследствие ВМД составили около 4,6 млрд долларов США в год [50]. Все эти цифры будут значительно увеличиваться с каждым годом вследствие роста продолжительности жизни и количества лиц старшего возраста [34, 48, 174]. Развитию ВМД способствуют как факторы окружающей среды (возраст, атеросклероз и артериальная гипертензия, курение, избыточная масса тела, избыточное ультрафиолетовое облучение, несбалансированное питание, светлый цвет глаз), так и доказанные генетические факторы (см. далее) [42, 43, 52, 55, 68, 94, 98, 101, 110, 134, 149]. Наиболее часто ВМД встречается у людей европейского происхождения, затем у выходцев из Азии, Латинской Америки, наконец, Африки [154]. В 90% случаев ВМД представлена неэкссудативной («сухой») формой, и лишь у 10% больных ВМД развивается экссудативная («влажная») форма, характеризующаяся наличием неоваскуляризации. Но в 90% случаев слепоты вследствие ВМД причиной является именно экссудативная форма заболевания [51, 95]. ВМД представляет собой хронический дистрофический процесс с преимущественным поражением хориокапиллярного слоя хориоидеи, мембраны Бруха, РПЭ и молекулы межклеточного матрикса (МКМ). Вследствие тесного взаимодействия структурных элементов сетчатки в патологический процесс включаются и фоторецепторные клетки [40, 104, 128, 141, 180]. Заболевание может быть классифицировано на раннюю и позднюю стадии [18]. На ранней стадии изменения часто не заметны для больного и развиваются длительное время. Среди первых жалоб можно назвать ухудшение остроты зрения, позже искривления (метаморфопсии), а среди признаков – наличие друз под РПЭ в центральной зоне, включая макулу. Ранняя ВМД может прогрессировать в позднюю стадию и приводить уже к серьезному снижению зрения или полной потере центрального зрения, что значительно снижает качество жизни больного [8, 110]. Поздняя ВМД может проявляться развитием хориоретинальной атрофии («сухая» форма, географическая атрофия) или СНМ (экссудативная, или «влажная», форма), также они могут присутствовать на одном глазу одновременно [46, 89]. Активная СНМ часто приводит к быстрой потере остроты зрения - от дней до нескольких недель, тогда как атрофическая форма прогрессирует медленно, в течение нескольких лет [110]. Патогенез развития СНМ при экссудативной форме ВМД до конца не изучен. К развитию неоваскуляризации приводит дисбаланс про- (например, фактор роста эндотелия сосудов VEGF) и антиангиогенных (например, тромбоцитарный фактор роста PEDF) молекул. Гипоксия, ишемия и воспаление влияют на регуляцию факторов роста и смещают их баланс в сторону проангиогенных молекул [13, 21, 47, 129].
Основной молекулой, задействованной в ангиогенезе, является VEGF -цитокин, который, связываясь с мембранным рецептором эндотелиальной клетки, запускает каскад реакций, результатом чего является синтез белков, контролирующих пролиферацию и дифференцировку клеток [19]. Это подтверждается возможностью создания моделей неоваскуляризации у животных с помощью внутриглазных инъекций VEGF [21, 23]. В офтальмологии под VEGF понимают разновидность фактора роста VEGF-А, поскольку семейство VEGF на самом деле включает несколько молекул. Все они были обнаружены позже, чем VEGF-A (до их обнаружения белок VEGF-А назывался просто VEGF). В настоящей работе термин VEGF также будет часто использоваться вместо VEGF-А. В семейство VEGF также входят плацентарный фактор роста (PGF) и белки VEGF-B (эмбриональный ангиогенез), VEGF-C (ангиогенез лимфатических сосудов) и VEGF-D (развитие лимфатических сосудов в легких) [37]. Рецептор к VEGF относится к тирозинкиназным рецепторам, содержащим в своей полипептидной цепи тирозинкиназный домен. При передачи сигнала внутрь клетки запускается киназный митогенактивирующий механизм (mitogen-activated protein (MAP) kinase pathway). Он активируется в период развития, когда для формирования тканей и роста органов необходимо интенсивное размножение клеток, и инактивируется в полностью дифференцированных неделящихся клетках. Однако в тех случаях, когда необходимы новые клетки, киназный каскад активируется вновь. Это характерно, в частности, для клеток эндотелия хориокапилляров при неоваскуляризации в сетчатке, вызванной гипоксией. Таким образом, при неоваскулярной форме ВМД фактор роста VEGF, секретируемый клетками РПЭ, связывается с клетками эндотелия хориокапилляров, запускает сигнальный каскад, который приводит к синтезу белков, контролирующих клеточную пролиферацию, что и приводит к развитию СНМ [37]. Экспрессия гена VEGF находится под значительным влиянием гипоксия индуцированного фактора – 1 (HIF-1) [106]. Таким образом, одной из ведущих причин образования VEGF является недостаток кислорода в клетках РПЭ [13].
Предполагают, что сенсорами локальной концентрации кислорода являются пока не идентифицированные гем-связанные белки. При снижении концентрации кислорода эти белки активируют неизвестных посредников, которые в свою очередь стимулируют повышенное образование фактора HIF-1. Разрушение фактора HIF-1 контролируется кислород-зависимой пролилгидроксилазой (PDH). Белок HIF-1 – димер, состоящий из двух протомеров - и . Субъединица постоянно присутствует в цитоплазме, независимо от содержания кислорода. В нормоксических условях -протомер разрушается в протеосомах. Пролилгидроксилаза наиболее активна при высоких концентрациях кислорода, а при гипоксии -протомер освобождается, образуя димерный белок HIF-1. Он проникает в ядро и связывается с участком ответа на гипоксию, что активирует транскрипцию различных генов, включая VEGF [49].
Эффективность лечения ранибизумабом в зависимости от наличия полиморфизма Y402H гена CFH
Амплификацию осуществляли в реакционной смеси, содержащей 66 мМ ТрисHCl, рН 9,0, 16,6 мМ (NH4)2SO4, 2 мМ MgCl2, по 100 мкМ каждого дНТФ, 1 Ед Taq-полимеразы (Promega, США) и по 2 пмоля каждого праймера в объёме 10 мкл. Реакцию амплификации (35 циклов) проводили в амплификаторе DNA Engine Tetrad 2 (MJ Research, США) в следующем температурном режиме: 940С, 15 сек., 580С, 15 сек., 720С, 16 сек. Продукты амплификации анализировали в 2% агарозном геле. Для последующего проведения реакции минисеквенирования проводили дефосфорилирование концевых фосфатных групп дНТФ в постамлификационной смеси. Для этого инкубировали образцы с 1 ед. активности фосфатазы из антарктической креветки (New England BioLabs, Великобритания) при 370С в течение 30 минут с последующей инактивацией фермента прогреванием при 850С в течение 10 мин. Реакцию минисеквенирования осуществляли в 20 мкл реакционной смеси: 66 мМ Tris-HCl, pH 9,0; 16,6 мМ (NH4)2SO4; 2,5 мМ MgCl2; по 0,2 мМ необходимых ддНТФ и/или дНТФ; по 3 пмоля каждого праймера и 2 Ед TermiPol DNA Polymerase (Solis Biodyne, Эстония), используя в качестве матрицы амплифицированные фрагменты ДНК. Наработку продуктов минисеквенирования осуществляли по универсальному профилю: 940 С – 5 сек., 580 С – 20 сек., 720 С – 5 сек., 40 циклов. Очистку продуктов реакции минисеквенирования проводили с помощью набора SpectroCLEAN Kit (Sequenom, США) согласно инструкции фирмы-производителя. Входящий в состав набора сорбент в количестве 8 мг растворяли в 16 мкл ультрачистой воды (Merck, Германия), после чего полученную суспензию в объеме 24 мкл вносили в пробирку с продуктами реакции минисеквенирования. Содержимое пробирки тщательно перемешивали и инкубировали при комнатной температуре 15 мин. Затем осаждали сорбент центрифугированием в течение 5 мин при 1000 об/мин. Супернатант использовали для масс-спектрометрического анализа.
Аликвоту образца (0,3 мкл) наносили на предварительно высушенную на планшете AnchorChip (600 мкм, Bruker Daltonics, Германия) матрицу, приготовленную из насыщенного раствора 3-гидроксипиколиновой кислоты (Fluka, Германия) в 50% ацетонитриле (Merck, Германия) с добавлением 10 г/л цитрата аммония двухосновного (Fluka, Германия) и высушивали на воздухе. Все использованные растворители, включая воду (Merck, Германия), были только аналитической чистоты или специальные для масс-спектрометрии. Спектры получали с использованием MALDI-времяпролетного масс-спектрометра Reflex (Bruker Daltonics, Германия), оснащенного азотным лазером (=337 нм) с частотой импульсов до 20 Гц. Все измерения проводили в линейном режиме, детектируя положительно заряженные ионы с ускоряющим напряжением - 20 кВ, накапливающем электроде - 18,65 кВ, фокусирующей линзе - 9,2 кВ и временем задержки анализатора 400 нсек. Для получения каждого масс-спектра использовали 50 импульсов лазера с мощностью излучения, установленной на уровне минимального порогового значения, достаточного для десорбции-ионизации образца. Для записи, обработки и анализа масс-спектров использовали программное обеспечение фирмы «Bruker Daltonics» (Германия): flexControl 2,4 (Build 38) и flexAnalysis 2,4 (Build 11). По наличию в масс-спектрах продуктов реакции пиков, соответствующих ионам определенной ожидаемой молекулярной массы, судили о нуклеотидном контексте в данном положении.
Математическая и статистическая обработка полученных в ходе исследований данных проводилась с использованием стандартных пакетов программ (Excel; SPSS 19.0). Статистическая обработка исследуемого материала включала обработку всей базы данных с частотным анализом полей с дискретными непрерывными значениями (N, М ± т, 8, минимальные и максимальные значения, асимметрия и эксцесс, где N - число наблюдений, М -среднее арифметическое, м - ошибка средней арифметической, 5 - среднее квадратическое отклонение).
Для оценки статистической значимости различий количественных признаков был применен критерий t Стьюдента и критерий F Фишера. При использовании критерия t Стьюдента предварительно производилась проверка соответствия распределения выборочных значений закону нормального распределения с помощью критерия Колмогорова - Смирнова. По критерию Стьюдента производили сравнение средних значений для параметрических показателей, а по критерию U Манна-Уитни - для непараметрических данных. Анализ статистической значимости различий качественных признаков, а также количественных признаков, не соответствующих закону нормального распределения, проведен с помощью критерия 2 Пирсона с поправкой Йетса. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез в данном исследовании принимался меньше 0,05 (p 0,05). Для оценки взаимосвязи между показателями определялся коэффициент ранговой корреляции Спирмена.
Для исследования зависимости остроты зрения, ЦТС, ОМО от генотипов по исследуемым генам использовался дисперсионый анализ. Общая методика проведения дисперсионного анализа была следующая: анализировались распределения рассматриваемых показателей на нормальность или наличие симметричного распределения в исследуемых группах (критерий нормальности Колмогорова-Смирнова и Шапира-Уилка, анализ гистограммы распределения, анализ описательных статистик по группам); анализировались дисперсии зависимой переменной внутри групп, образуемых факторами на основе статистики Ливиня, основанной на среднем и на медиане; устанавливалась значимость влияния рассматриваемых факторов (проверялась гипотеза, что среднее значение количественных зависимых переменных, а именно – острота зрения до лечения, ЦТС и ОМО, одинаково по категориям факторов);
В дополнение к однофакторному параметрическому дисперсионному анализу для выявления зависимости между остротой зрения, ЦТС, ОМО и полиморфизмами генов применялся непараметрический дисперсионный анализ на основе критерия Краскала-Уоллиса.
В работе с пациентами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинкской декларацией Всемирной медицинской ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki).
Эффективность лечения ранибизумабом в зависимости от наличия полиморфизма 625А гена HTRA1
На основе сравнения пропорций по столбцам с помощью z-критерия установлена связь между количеством пациентов с КО и полиморфизмом CFH Y402H, а также значимо различающимся «умеренным» КО и полиморфизмом CFH Y402H. У пациентов с КО преобладают генотипы YY и YH (40,2 и 36,9% соответственно), что в процентном соотношении значимо больше по сравнению с генотипом HH (25%) (табл. 8 и 9). При этом более благоприятный «умеренный» КО у пациентов с генотипом YY встречается значительно чаще, чем у пациентов с HH (58,6 и 22% соответственно). Таким образом, у пациентов с генотипом HH КО развивается реже, но при его наличии вероятнее его более тяжелое течение с развитием гигантских и субфовеолярно расположенных кист (рис. 13).
Результаты применения z-критерия сравнения пропорций столбцов Тип кистовидного отека CF# Есть умеренный С Гигантские кисты Кисты субфовеолярно Всего A B Примечание.1 - С помощью поправки Бонферрони тесты корректируются на множественность для всех парных сравнений в пределах одной и той же строки каждой подтаблицы с наиболее глубоким уровнем вложенности. Таблица 9. Распределение пациентов (в %) с различным типом КО по генотипам CFH
Всего с КО у пациентов с определенным генотипом 40,2 36,9 Рис. 13. Ангиографическая картина глазного дна и результат ОКТ сетчатки пациентки Х. 87 лет до лечения, с КО и гигантской субфовеолярной кистой и с генотипом HH по гену CFH.
На основе критерия независимости хи-квадрат зависимости поражения одного или двух глаз, степени рубцевания, наличия эпиретинального фиброза, ОНЭ и ОПЭ от наличия полиморфизма CFH Y402H не выявлено. Результаты расчета теста хи-квадрат представлены в таблице 10.
В общей выборке. В результате дисперсионного анализа с повторными измерениями можно утверждать, что на остроту зрения влияет не только количество инъекций, но и полиморфизм Y402H гена CFH (p 0,05). Результаты расчета критерия внутригрупповых эффектов для выявления влияния фактора времени (инъекции) и взаимодействия фактора времени и генотипа по CFH (инъекции и CFH) представлены в табл. 11.
На рис. 14 графически представлено выявленное взаимодействие фактора количества инъекций и генотипа по CFH при влиянии их на остроту зрения. На графике линии идут практически параллельно, кроме третьей инъекции. У пациентов с генотипом YH средняя острота зрения статистически значимо (p 0,015) различается со средней остротой зрения пациентов с остальными генотипами. Пациенты с генотипом YH достигают наилучшего результата лечения по остроте зрения после третьей инъекции.
В группах по исходной остроте зрения. Результаты расчета критерия внутригрупповых эффектов представлены в табл. 12. Можно сказать, что количество инъекций значимо влияют на остроту зрения в 1-й и 2-й группах. А во 2-й группе, помимо количества инъекций, сделанных пациенту, на результат остроты зрения влияет еще и полиморфизм Y402H гена CFH. Таблица 12. Результаты расчета критерия внутригрупповых эффектов при дисперсионном анализе с повторными измерениями для остроты зрения по группам
Влияние полиморфизма CFH Y402H проявляется при проведении лечения во 2-й группе. До лечения средняя острота зрения у пациентов с разными генотипами по CFH примерно одинаковая и статистически значимо не различается (рис. 15). После первой инъекции у пациентов с генотипами YY и YH наблюдается одинаковый результат по остроте зрения - существенно выше, чем у больных с генотипом HH. После третьей инъекции все группы больных по генотипу значимо отличаются друг от друга по средней остроте зрения. Наилучшая острота зрения наблюдается у пациентов с генотипом YH, затем - с YY, и в последнюю очередь - с HH. Таким образом, при исходной остроте зрения от 0,10 до 0,51 наличие неблагоприятного для развития экссудативной ВМД генотипа НН по гену CFH также ассоциируется с худшим результатом лечения (по остроте зрения) ранибизумабом как после одной, так и после трех инъекций.
На клиническом примере пациента З. 90 лет с генотипом YY по гену CFH видно, что ЦТС после первой инъекции уменьшилась незначительно - с 452 (рис. 18, А) до 438 м (рис. 18, Б), а после третьей инъекции составила 246 м (рис. 18, В). Рис. 18. Ангиографическая картина глазного дна и результат ОКТ сетчатки пациента З. 90 лет с генотипом YY по гену CFH. А - до лечения. Умеренный КО сетчатки, невысокая ОПЭ; Б - после первой инъекции. Незначительная резорбция отека сетчатки, исчезновение кист, ОПЭ сохраняется. В - после трех инъекций. Отек сетчатки резорбировался, высота ОПЭ уменьшилась. Общий макулярный объем
В общей выборке. Зависимость ОМО от взаимодействия количества инъекций и генотипа по CFH не установлена (p=0,839). Результаты расчета критерия внутригрупповых эффектов представлены в табл. 15.
На терапевтический ответ при лечении ранибизумабом
В данной главе рассматривается зависимость остроты зрения, ЦТС, ОМО и других клинических признаков от наличия полиморфизма rs4073 (или 251А), расположенного в промоторном участке гена интерлейкина-8 (IL-8). Гомозигот по полиморфизму rs4073 обозначали как генотип AA, гетерозигот, имеющих только один аллель rs4073, - как генотип AT, а гомозигот без данного полиморфизма -как генотип TT. Анализ проводили сначала в выборке в общем, затем в каждой группе по исходной остроте зрения. Для исследования зависимости остроты зрения, ЦТС, ОМО от наличия полиморфизма 251А гена IL-8 (TT, AT, AA) использовали дисперсионный анализ (см. Материалы и методы).
Острота зрения. При анализе влияния полиморфизмов гена IL-8 на остроту зрения на основании критерия однородности дисперсии по статистике Ливиня (p=0,991) было установлено, что дисперсия распределения остроты зрения не различается по группам генотипа гена IL-8. Расчет критерия нормальности Колмогорова-Смирнова и Шапира-Уилка (p 0,001) показал, что распределение пациентов по остроте зрения и гену IL-8 отклоняются от нормального. Поэтому дополнительно использовали непараметрический критерий Краскала-Уоллиса.
В результате проведения однофакторного дисперсионного анализа не выявлено зависимости между остротой зрения и генотипами по IL-8, что подтверждают данные табл. 40. Также отсутствие взаимосвязи было подтверждено с помощью непараметрического критерия Краскала-Уоллиса (рис. 37). Таблица 40. Результаты проведения однофакторного дисперсионного анализа
Сумма квадратов Средний квадрат F p-значение Между группами 0,020 0,010 0,337 0,714 Внутри групп 10,219 0,029 Итого 10,239 Рис. 37. Применение непараметрического критерия Краскала-Уоллиса. В 1-й группе выявлено различие дисперсий остроты зрения по генотипам IL-8 по статистике Ливиня (p 0,001); во 2-й и 3-й группах различия дисперсии нет. Критерий нормальности Колмогорова-Смирнова и Шапира-Уилка (p 0,001) показал ненормальность распределения, поэтому в дополнение к однофакторному дисперсионному анализу был использован непараметрический критерий Краскала-Уоллиса.
Связь остроты зрения с генотипом по IL-8 значима (p 0,05) для 1-й группы и не значима во 2-й и 3-й группах (р=0,554 и р=0,763 соответственно). Результаты проведения однофакторного дисперсионного анализа и расчета непараметрического критерия Краскала-Уоллиса приведены в табл. 41. Таблица 41. Результаты проведения однофакторного дисперсионного анализа установить, какие именно групповые средние генотипов по IL-8 различаются. С учетом того, что выше доказано неравенство дисперсий в остроте зрения по генотипам IL-8, используется апостериорный критерий Тамхейна. Результаты расчета этого критерия представлены в табл. 42, в которой звездочкой указаны значимые разности при уровне достоверности меньше 0,05 (p 0,05).
Острота зрения в 1-й группе у пациентов с генотипом TT гена IL-8 в среднем значимо выше на 0,016 по сравнению с остротой зрения у больных с генотипом AT (табл. 42). У пациентов с генотипом АА острота зрения в среднем на 0,018 меньше, чем у больных с генотипом ТТ, но это различие статистически не значимо (рис. 38).
Общий макулярный объем. По статистике Ливиня, гипотеза о равенстве дисперсий в группах по генотипу гена IL-8 не отвергается (p=0,289). Критерий нормальности Колмогорова-Смирнова и Шапира-Уилка (p 0,05) показал, что гипотеза о нормальности распределения ОМО в зависимости от гена отвергается. При анализе гистограмм можно сделать предположение, что распределение пациентов по ОМО в зависимости от генотипа по IL-8 все-таки является нормальным, однако для подтверждения наличия связи в дополнение к однофакторному дисперсионному анализу применялся и непараметрический критерий Краскала-Уоллиса.
По результатам однофакторного дисперсионного анализа не выявлено зависимости между ОМО и генотипом по IL-8, что подтверждают данные табл. 43 и рис. 39. Таблица 43. Результаты проведения однофакторного дисперсионного анализа
Центральная толщина сетчатки. При анализе гистограмм сделали предположение, что распределение пациентов по ЦТС в зависимости от генотипа по IL-8 имеет правостороннюю асимметрию, поэтому применялся дополнительно и непараметрический дисперсионный анализ. Равенство дисперсий в группах по генотипу IL-8 подтверждено статистикой Ливеня (p=0,331).
В результате проведения однофакторного дисперсионного анализа выявлено влияние полиморфизма 251А гена IL-8 на ЦТС (рис. 40), что подтверждают данные табл. 44, а также результаты расчета критерия Краскала-Уоллиса для независимых выборок на рис. 41. Таблица 44. Результаты проведения однофакторного дисперсионного анализа