Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Хроматин эукариотического ядра - это
сложный динамичный ДНК-белковый комплекс, структурной основой которого являются нуклеосомы,' выполняющие не только функцию компактизации ДНК, но и играющие важнейшую регуляторную роль (как позитивную, так и негативную) в процессах транскрипции, репликации, рекомбинации ДНК. Полное - понимание этих процессов, протекающих в клеточном ядре с участием большого количества регуляторных факторов и ферментативных комплексов, возможно лишь в "контексте" хроматина.
Репликация и транскрипция ДНК - одни из основных
процессов, происходящих "ъ живой клетке. Иследование. этих
процессов у млекопитающих сопряжено со значительными
трудностями, вызванных большими размерами их генома. Одной из
наиболее удобных и исследованных систем для изучения структуры
и функции хроматина млекопитающих является культура клеток
яичников китайского хомячка (СНОС 400), несущих
амплифицированный приблизительно в 1000 раз геномный домен длиной 240 т.п.н., включающий. . нескольких генов (наиболее изученным из них является ген дигидрофолатредуктазы - ДГФР), .две области инициации репликации (Ori-beta и Or і-gamma), а также участок прикрепления ДНК к ядерному матриксу (MAR).
'Наїла 'работа посвящена 'изучению структуры хроматина различных областей домена ДГФР в клетках линии СНОС 400.
ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Цель работы -заключалась в исследовании
специфики структуры хроматина различных областей домена ДГФР, в первую очередь, регуляторных - участков начала репликации ДНК и промоторной области гена ДГФР, а также участка прикрепления ДНК к ядерному матриксу (MAR).
НАУЧНАЯ НОВИЗНА. з Ьпервые была исследована структурная
организация хроматина в регуляторной области начала репликации и- участка прикрепления ДНХ к ядерному матриксу в клетках млекопитающих. Также впервые были получены данные о характере ДНК-гиетоновых взаимодействий , в, протяженной области конститутивного - умеренно транскрибируемого гена ДГФР. Для регуляторных областей гена ДГФР. и одного из Or і было показано
J' >
сутествование необычных нуклеосом, гистоны которых утратили большую часть гистидиновых контактов с ДНК.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации были доложены на
Конференции по регуляции репликации эукариотической ДНК (McGill University Conference) в Монреале в 1990 году,, на Симпозиуме по молекулярной и клеточной биологии (Keystone Symposia) в Кистоуне (США) в 1992 году, на Гордоновской конференции по белкам клеточного ядра, структуре хроматина и регуляции генов (Gordon conference, Tilton, NH) в Тилтоне (США) в 1994 году.
ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликованы три
печатные работы. Список публикаций приведен в конце автореферата.
СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация состоит из введения, трех
глав (обзор литературы, материалы и методы, результаты и обсуждение), выводов, и списка цитированной литературы. Работа изложена на 80 страницах машинописного текста, содержит 8 рисунков и 3 таблицы.