Введение к работе
^ВРТ^ЧИ,7
Акт^альность_проблемы. Изучение молекулярного механизма образования пептидной связи в рибосоме является одной из важнейших задач молекулярной биологии. Для понимания молекулярных механизмов работы рибосомы необходимо изучить ее структуру не только на молекулярном, но и на атомном уровне. Такой уровень знания может обеспечить только рентгеноструктурный анализ. За последние годы наметился прогресс в применении этого метода к изучению структуры рибосомы. Это стало возможным после получения кристаллов рибосом и их субчастиц из термофильных и галофильных микроорганизмов ( Bacullus stearothermophilus, Thermus thermophllus, Halobacterium morismortui). В настоящее время наиболее перспективными для рентгенографических исследований являются рибосомы экстремального термофила Th. thermophllus. Получены кристаллы 30S и 5QS субчастиц-и целой. 70S рибосомы из этого микроорганизма. Многокомпонентная, несимметричная рибосома, состоящая из трех различных молекул РНК. и примерно пятидесяти молекул различных белков, с общей молекулярной массой около 2,6*10 Д, является очень сложным объектом для рентгеносгруктурного анализа. Поэтому важно параллельно с исследованием кристаллов рибосом и субчастиц проводить рентгеноструктурные исследования отдельных компонентов рибосом, в том числе и рибосомных белков. Полученные для них рентгенографические данные высокого разрешения позволят в даль^-нейшем уточнить данные, полученные, для субчастиц и 70S рибосом.
ШМь_рабдты - выделение, физико-химическая характеристика и кристаллизация рибосомных белков из Thermus thermophllus.
Шl^^йJ^2Ш^&J^J^^'ШiйШ^JSёMSїkJЁ^^.'Ш . Данная работа посвящена созданию биохимической базы для дальнейших структурных исследований рибосомных белков из Thermus thermophllus. Она содержит ряд оригинальных методик для работы с рибосомами из этого микроорганизма, в том числе методики очистки рибосом и разделения их на субчастицы, методику выделения ряда рибосомных белков из 50S субчастиц без применения денатурирующих агентов, методику получения пригодных для рентгеноструктурного анализа кристаллов белка TS9(S6) из малых субчастиц рибосом._ В
.о
результате впервые получены в препаративных количествах 11 белков из 50S субчастиц рибосом Thermus thermophilus. Для ряда этих белков получены физико-химические характеристики - определены молекулярные массы, аминокислотный состав, коэффициент экстинкции. Два из них (TL5 и TL7) получены в кристаллической форме. Впервые были выращены кристаллы белка TS9 (S6), пригодные для рентгеноструктурного анализа.
П2блтации_и_апробация_р_аботы. По теме диссертации опубликовано 10 работ. Материаллы диссертации представлялись на Международном Симпозиуме "Молекулярная организация биологических структур" (Москва, 1989), Третьей и Четвертой Международной Конференции "Кристаллизация отологических макромолекул" (Вашингтон, 1989, Фрайбург, 1991), на конкурсах научных работ Института белка (1987, 1989, 1991).
Структ^ра^и_дОъем_р_аОдты. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части,, результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы (140 ссылок). Работа изложена на 142 страницах машинописного текста, включает 41 рисунок и 14 таблиц.