Электронная библиотека диссертаций и авторефератов России
dslib.net
Библиотека диссертаций
Навигация
Каталог диссертаций России
Англоязычные диссертации
Диссертации бесплатно
Предстоящие защиты
Рецензии на автореферат
Отчисления авторам
Мой кабинет
Заказы: забрать, оплатить
Мой личный счет
Мой профиль
Мой авторский профиль
Подписки на рассылки



расширенный поиск

Получение рекомбинантного белка MTS-1 и его биохимическая характеристика Нейра Карденас, Маурисио Альфредо

Данная диссертационная работа должна поступить в библиотеки в ближайшее время
Уведомить о поступлении

Диссертация, - 480 руб., доставка 1-3 часа, с 10-19 (Московское время), кроме воскресенья

Автореферат - бесплатно, доставка 10 минут, круглосуточно, без выходных и праздников

Нейра Карденас, Маурисио Альфредо. Получение рекомбинантного белка MTS-1 и его биохимическая характеристика : автореферат дис. ... кандидата биологических наук : 03.00.03.- Москва, 1993.- 23 с.: ил.

Введение к работе

Mev глазирование опухолезых клеток - это сложный процесс, включающий прорастание опухоли через стенки сосудов и проникновение опухолевых клеток в кровеносное русло, способность выжигать в условиях атаки ан>:унной системы организма и, наконец, прикрепление и размножение клеток и возникновение опухоли в новом месте.

Образование втср:тчных опухолей является одной из наиболее частых причин смерти при раковых заболеваниях и ярляется важной медицинской проблемой, од-ако мало известно о молекуляр-ных механизмах, приводящих к метастазироватпо опухолевых клеток.

При попытке идентификации гепоз, отггтственньпс га Метастатический фенотип, в вашей лаборатории было проведено дифференциальное исследование экспрессин генов в метастазирующей (КСМЛ - ІСО) и родственной ей Неметзстазирующей (КСМЛ - 0) линиях клеток, полученных в результате различных условий пас-скрзвавия спзптапной аденокарциноми Молочной хселезы мышей в скпгег^шх хсхвотных. В результате был гсяонкросан кДНК гена mts-1, специфически транскрибируемого только в метгстгзирую-щкх клетках.

Изучение транскрипции река mts-1 з 27 опухолевых линиях клеток показало, что этот ген преимущественно транскрибируется в

метастазирующих опухолях. Транскрипти гена обнаружены в шести из семи метаетазирующих линий, а в иеметастазгсруюшнх линиях клеток не обнаружена транскрипция этого гм:а.

Определение нуклеотидкой поспелога-хльности reK3mts-l показало, что он кодирует белок, состоящий из 101 сминоккслот, и, исходя из его аминокислотной поелгдователькосп:, относится к S- 100 семейству кальшшевязивающих белков.

Ко времени написания диссертации гьщла рзбота (Davies B.R. et. at.,1993) в которой метастатический фенотип был индуцпросан при трансфекцки эпителиальных клеток Rama 37 молочной келезы крысы, крысиным аналогом гена шв-1. В контрольном эксперименте при траясфекции тех же клеток онкогеном EJ-ras-1 такого эффекта не наблюдалось.

Таким образом, возможно продукт rei.a rr.ts-1 каким-то обраюм вовлечен в формировании метастатического фенотипа опухолей. В связи с этим получение продукта гена IEK-1 и его изучение представляет собой актуальную задачу.

OcHGEzas цель васгогшей работы состояла в получении экспрессии рекомбяьаятного пш-1 в Е. Coli, его очистка для поо.здуюшей бкохимичеяхй характеристики и его истолкование в качестве ян-струмеїгга для дзльзгйдгах исследований по выяснению биологической релм белха mts-1.

В настоящей работе был получен и очкшен рекомбмкантный продукт гена mts-1 з достаточном количестве, позволяющем изучать некоторые его свойства. Показало связывание кальция реком-бияантным тв-1 и его взаимодействие с полилелтидом пчелиного яла мелиттином, что указывает на зозмогнее структурно-функциональное сходство с другим белком S-100 семейства, S10Q5 и с кал-модулином, которые также способны связывать мелитгин. С помощью 15-членного С-концевого синтетического пеппиа белка mts-1, а также с помощью рекомбинантного mts-I были получены моноклояалькые антитела НМ-4 и Л.8/7, соответственно (Лукани-дин Е.М. и др.. Датское общество нселедоЕаяпя раса). С их помощью было получено подтверждение прясутствия белка mts-1 в клетках ХСМЛ-100 и е;о отсутствие в клетг^х ІССМЛ-0, методом иммуноблоттннга.

Имг "упопрецигзтация экстракта белков из глегск КСМЛ-100 с ьпиощыо мовоклональках антител НМ-4 и А8/7 (Храевсхая М., Датсгос общество исследовепкг рака) прнаодат х специфической гопргшжгтцк:! белкогых полос 200 Кда, 22 Кдэ, 18 Кда и-полосы 10 Кда, с^отпетелг/изщгй белку mts-1. В пасткяцгй р?боте показано иеяоергдетггкное рзгзмолейсгссї полосы 700 Хдя с рекомби-нанткик белым mts-I при ипиубацки гел!' с; ьхглйпшгм иодом

'I - nts-1 в присутстегк 1 :-.'М EGTA и Солее слабое ззакаодейст-вке в присутстзчн ! мМ Ci .

Білло пок'оглко также взаїзісдеіїсггке этой же полосы

с I - Calmodulin в присутствии 1 мМ Са * и отсутствие взаимодействия в присутствии ! мМ ЕСТА.

Эти результаты указывают на то, что полоса 200 Кда представляет собой миозин, тах как его молекулярная масса 200 Кда и известно его взаимодейстьие с калмодулином.

С помощью поликлональньгх антител к миозину в настоящей работе показано специфическое окрашивание полосы 200 Кда в иммуноблотгияге иммунопрецитштировгкного мзтериалз. Имму-нопреципитадна тою же экстракта с помощью поликлональных антител к миозину прводит к той лее картине коиммунопрецшшги-рованяих полос (Краевская М.).

Такчм образом, впергые получены данные, показывающие взаимодействие ntfs-1 с миозином. Это га=но с точки зрений понимания механизмов, функционирования белка mts-1. Возможно, посредством миозина гак-1 участвует б регуляции клеточной подвижности и, таким образом, mts-1 оказывается вовлечен в проявлении метастатического фенотипа опухолевых клеток.

Практическое значение настосщей работы определяется тем, что в ней внесен вклад в выяснение возможной роли белка mts-1 в метастатическом иоведешш опухолевых клеток, что может иметь далеко идущие поелсдеггля в прогнозе и терапии метастатического фенотипа.

Материалы диссертации были представлены на "22-nd Meeting of the Federation of European Biochemical Societies" (Stockholm, 1993) it на еястодном симпозиуме Датского общества ксслеяоза-

ния рака (Copenhagen, 1993). Опубликована одна работа в журнале "Биоорганическая химия" и готовится еше оана публикация для зарубежного журнала.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ