Введение к работе
Актуальность темы. Изучение компонентов аппарата трансляции вакно для понимания механизма работы белоксинтезирующего аппарата клетки. Фактор элонгации G (EF-G) у бактерий катализирует транслокацию, одну из ключевых стадий в процессе элонгации полипептидной цепи. Транслокация - это GTP-зависимое перемещение пептидам тРНК из акцепторного участка на рибосоме в донорный, происходит в результате образования тройственного комплекса прэтранслокационная рибосома*EP-G*GTP. EF-G имеет не менее двух участков связывания: для GTP и рибосомы, обладает также зависимым от рибосомы каталитическим центром, гидролизуюцим GTP.
Как объект для изучения трансляции ТПегтиз thermopMlus имеет особый интерес. Во-первых, по организация аппарата трансляции эта грамотрицательная бактерия похожа на хорошо изученную E.coli. Во-вторых, все компонента системы трансляции Т.thermophilus термостабильны, хорошо функционируют при 60 С, обладают повышенной устойчивостью к протеолитическим ферментам и денатурирующим веществам. Такая стабильность существенно облегчает исследование системы трансляции T.thermophilua. В настоящее время получены кристаллы рибосом, факторов элонгации EF-Tu и EF-G из T.thermophilua. В Институте белка АН СССР проводится их ренгеноструктурный анализ. Эти работы вместе с определением первичной структуры компонентов аппарата трансляции могут дать тонкую молекулярную картину синтеза белка на рибосоме. Цель работы - определение полной первичной структуры рибосомных белков S12 и S7 и фактора элонгации EF-G из Т.thermophilic НВ8. Основные задачи исследования: Клонирование кодирующего EP-G гена /из из T.themophllus НВ8. Определение последовательности зуклеотидов гена fus и соседних генов из зіг оперона. Анализ эсобенностей первичных структур генов str оперона и кодируемых т белков у ТЛЬегторМІиз.
Научная новизна: Определена полная последовательность нук-пеотидов генов грз12, грзТ и /из, входящих в 3tr оперон T.ther-nophtlus. В примыкающем к гену г*ра12 5'-нетранслируемом районе іайден вероятный промотор at г оперона. Обнаружено типичное для термофильных бактерий преимущественное использование в зіг шероне Т.thermophilus кодонов с G или С в третьем положении.
- г -
Проведено сравнение первичных структур кодируемых этими генами рибосомных белков S12, S7 и фактора элонгации EF-G с аналогичными белками из других оганизмов.
Структура диссертации. Диссертация состоит из трех основных частей: обзора литературы, экспериментальной части и обсуждения результатов, она завершается выводами и списком цитируемой литературы (115 ссылок). Работу иллюстрируют 17 рисунков и 10 таблиц, общий объем диссертации - 124 страницы.