Введение к работе
Актуальность задачи
В последние годы одной из наиболее актуальных проблем
биологии и медицины остается изучение молекулярных
процессов, лежащих в основе превращения нормальной клетки
в опухолевую. Особое место занимает исследование механизмов
становления метастатического потенциала опухолевых клеток.
Образование очагов метастазирования - это наиболее
угрожающий жизни аспект злокачественной неоплазии.
Скрытые метастазирующие опухолевые клетки могут
циркулировать в бездействующем состоянии в течение
нескольких лет после резекции опухоли (Meltzer, 1990; Zajicek,
1987). Затем они могут быть активированы какими-то еще
неидентифицированными стимулами, в результате чего
метастатические очаги внезапно развиваются в "взрывную"
форму, результатом которой является быстрая смерть ракового
пациента. Изучение генетических изменений, ассоциированных
с опухолевой прогрессией человека, внесло большой вклад в
понимание процессов онкогенеза (Bishop, 1991; Fearon and
Vogelstein, 1990; Fidler and Radinsky, 1990). Это изучение ясно
показало, что опухолевое развитие и последующее
метастатическое поведение (злокачественный потенциал) находятся под различным генетическим контролем (Garbisa et al, 1987; Muschel et al, 1985). К настоящему моменту не идентифицирован один единственный ген, который бы регулировал весь процесс.метастазирования..Однако, поскодьку метастазирование является многостадийным процессом, генетический подход требует изоляции и независимой характеристики множественных генетических изменений, которые могут происходить на каждой стадии.
В связи с вышеизложенным, несомненный интерес представляет клонирование и характеристика генов, экспрессирующихся в . опухолях с высоким метастатическим потенциалом и являющимися возможными участниками процесса метастазирования.
Цель работы.
Основная цель настоящей работы состояла в клонировании генов, имеющих различный уровень экспрессии, в опухолях общего происхождения с противоположными метастатическими свойствами.
В ходе исследования предполагалось решение следующих экспериментальных задач:
1. Клонирование гена, специфически экспрессируюшегося в
опухоли с высоким метастатическим потенциалом.
2. Изучение структуры клонированного гена.
-
Изучение уровня транскрипции мРНК данного гена в клеточных опухолевых линиях мышей, различающихся своими метастатическими характеристиками.
-
Изучение экспрессии гена в нормальных органах мыши и человека.
5. Определение возможной функции клонированного гена.
Научная новизна и практическое значение работы.
В настоящей работе был применен метод дифференциального дисплея мРНК для идентификации генов, специфически экспрессирующихся в'высокометастазирующей (VMR-Liv) и неметастазируюшей (VMR-0) аденокарциноме молочной железы мыши. Клонирован новый ген tag7, экспрессирующийся в метастазируюших опухолях линии VMR. Изучен уровень экспрессии мРНК этого гена в нескольких клеточных линиях,
обладающих различным метастатическим потенциалом. Обнаружены изменения в уровне транскрипции этого гена в первичных опухолях и соответствующих клеточных линиях. Экспрессия гена обнаружена в нормальных мышиных легких, тимусе, селезенке, а также в специфических отделах коры головного мозга, гиппокампе и клетках Пуркинье мозжечка. Человеческий гомолог гена tag] транскрибируется во взрослом и фетальном сердце, печени и поперечнополосатой маскулатуре. Открытая рамка считывания кодирует полипептид, состоящий из 151 аминокислотного остатка, не имеющий значительных гомологии с известными белками. N-конец белка Tag7 содержит лейцин-богатый трансмембранный домен, а С-концевая последовательность обнаруживает гомологию с членами TNF семейства. Определена геномная структура гена. Промоторная. область гена tag! обнаруживает значительную гомологию с мышиным и человеческим лимфотоксином р.
Апробация работы.
Материалы диссертации были представлены на следующих симпозиумах: Школа молодых ученых в Риге, (ноябрь-декабрь, 1994); Энгельгардтовские чтения (декабрь, 1995); Bio Tec Symposium 1995, (Denmark; 1995); Annual meeting of Molecular Biology Department of Danish Cancer Society (november,1995).
Публикации. По теме диссертации опубликовано три печатные работы.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на /.&?. страницах машинописного текста и состоит из следующих частей: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты и обсуждение, выводы и список литературы. Библиография включает в себя .„.<.'