Введение к работе
Актуальность темы
Вес многообразие клеток крови является потомством плюрипотеитпых гемопоэтнческнх стволовых клеток. Постулировано, что эта примитивные клетки обладают способностью как. к делению с образованием более зрелых клеток, так и к воспроизведению себе подобных клеток. Попытки морфологически описать стволовые клетки не увенчались успехом, и реальный прогресс в развитии концепции стволовых клеток был достигнут после обнаружения феномена колопиеобразующих единиц (КОЕ). Изучение дифференцировки и самоподдержаши КОЕ in vitro выявило широкий спектр факторов роста и рецепторов, модулирующих рост колоний, состоящих из клеток одной или нескольких клеточных линий. Тем не менее, молекулярные медиаторы поведения наиболее примитивных стволовых клеток Ш VIVO, в основном, неизвестны.
Значительная часть тирозшговых протеиикшшз (ТПК) играет важную роль в гсмопоэзе, участвуя в переносе внутриклеточных и межклеточных сигналов, регуляции клеточной пролиферации и дифференцировки. Рецсгггорные-ТТПС (Р-ТПК) являются рецепторами факторов роста и, таким образом, участвуют в контроле пролиферации. Нерецепторные-ТПК (НР-ТПК) не обладают внеклеточной частью. Тем не менее, ряд протеинкиназ этого подсемейства ассоциирован с другими белками клеточной поверхности, которые обычно не обладают собственной ферментативной активностью, и участвуют в переносе сигналов с поверхности клетки так же, как и рецепторные-
тпк.
Клонирование новых тирозиновых протеинкиназ, экспрессирутощихся на ранних стадиях гсмопоэза, - это первый шаг на пути изучения процессов, управляющих дифференнировкой стволовых клеток крови.
Цель работы
Целью настоящей работы являлись поиск и изучение генов тирозиновых протеинкиназ, экспрессирутощихся в стволовых кроветворных клетках мыши. Исходя из поставленной цели, были сформулированы следующие задачи:
-
Идентификация генов новых тирозиновых ^ротеинюшаз, экспрессирутощихся в стволовых клетках крови мыши.
-
Клонирование и определение нуклеотвдной последовательности полноразмерных кДНК полученных генов.
-
Клонирование геномных копии и определение экзон-интронной структуры полученных генов.
-
Изучение тканевого распространения граискриптов полученных генов.
Научная новизна и практическое значение работы
Клонирована кДНК новой тирозиновой протеинкиназы Bhk и определена ее ігуклеотіщная последовательность. Производная аминокислотная последовательность Bhk обладает рядом черт, позволяющих отнести проклошірованную протеинкиназу к ТНК семейства Csk. Обнаружено три альтернативно сплайсируемых типа мРНК bhk. Клонирована геномная копия, получена рестриктная карта и устаношіена экзон-интронная структура гена bhk. Выяснен механизм образования альтернативно сплайсируемых мРНК. Изучение тканевого распространения транскриптов гена показало, что мРНК bhk экспрессируется в головном мозге и гемопоэткческой системе.
Открытие гена новой тирозиновои протеинншазы, относящейся к классу ингибиторов активности ТПК семейства Src, многие из которых являются онкогенами, позволяет более детально изучать пути активации, в том числе и патологические, ТПК семейства Src па молекулярном уровне, что может быть использовано в поисках рациональных путей терапии некоторых форм злокачественных заболеваний.
Апробация работы
Результаты данной диссертации были представлены на 24-той ежегодной конференции международного общества экспериментальной гематологии (Дюссельдорф, Германия, Август 1995).
Публикации
По материалам данной диссертации опубликованы 3 печатные работы.
Объем и структура диссертации