Введение к работе
Актуальность теки диссертации- Интерфероны (ИФН) - се-нейство полифункциоиалькых индуцибельных белков, которые обладают антивирусной! антипролиферативной, иммуноиодулируюией активностями и в связи с этин находят широкое клиническое применение* Клонировано большинство известных генов ИФН» получены высокопродуктивные бактериальные штампы-продуценты и разработаны схемы очистки, позволившие получить достаточные количества данных белков как для нужд медицины, так и для структурно-функциональных исследований- Тем не ненее,к иасто-одену времени удалось установить пространственную структуру Лишь для одного ИФН - тляиного ИФН-бета (Senda et a]-, 1"Э90), до сих пор неизвестен механизм биологического действия ИФН, сведения по локализации "активного центра" различны, а иногда противоречивы. В связи с этин для обнаружения Функционально важных районов молекулы ИФН больюое значение приобретают исследования с использованием моноклональных антител и сднт-специфического мутагенеза -
Цель работы- Цель» данного исследования была разработка практических подходов, позволяющих локализовать антигенную детерминанту на примере взаимодействия лейкоцитарного ИФН-А и ион'оАТ NK2.
Научная новизна работы- Было показано, что широко используемые в исследовании ИФН нейтрализующие противовирусную активность мышиные поноАТ NK2 узнают район последовательности АК остатков, локализованных в С-концевой области молекулы ИФН-А <ЙК остатки НИ 112-117). Ат"3 121« вероятно, также играет определенную роль а поддержании необходимой конфориации эпитопа-
Иэучена специфичность взаимодействия 21 ноноАТ о ,пятью лейкоцитарными человеческими генно-инженерными интерферонани ИФА в трех кодификациях-На основаним полученных результатов и данных по взаимодействии ВгСМ Фрагментов ИФН-А о панелью ноноАТ была предположено, что поверхность ИФН может быть разделена по крайней мере на 7 антигенных областей, состояыих из перекрывающихся АГ детерминант, уэчавагкых различиями антителами- Обнаружено, что три ионоАТ способны взаимодействовать со всеми субтипами исследованных реконбимантных ИФН.
Анализ всей совокупности полученных данных дает основа-
ниє считать, что АГ детерминанта NK2 образована в результате конфориационнот-о взаимодействии АК остатков ЮІ 113-121 и предположительно 38-42
Практическая значмпость работы Разработанный nana ступенчатый подход, использованный для картирования эпитопа ионоАТ >1К2 в пределах АК последовательности ИфН-А, можно при-пенять для нахождения соотв етствдачях эохтопоа в молекулах других белков і в особенности» если семейство исследуемых белков состоит из нескольких представителей с извесг ь чи АК последовательностями. Воэпожно также t что полученные .~ =ные позволят локализовать участки молекулы ИфН, вовлеченные в связывание с рецептором и во вторичные сэаияолействия с компонентами клеточной мембраны- Метод выделения ИфН-F вошел в регламент на производство этого белка-
Структура работы- Диссертация состоит ко введения» обзора литературы» описания материалов и методов исследования» 7 глав изложения собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы из /" наименований советских н иностранных авторов- Объеи диссертации составляет /]$ страниц основного текста, а также /ф рисунков иД^таблиц-