Введение к работе
Актуальность проблемы. Na+,K -АТФаза плазматических мембран :- животных" обеспечивает постоянство ионного состава внутриклеточной среда. Этот фермент присутствует во всех животных клетках и осуществляет транспорт ионов Ка+ и к+ против их концентрационных градиентов за счет энергии гидролиза АТФ, Na+,K+-AT$a3a является мишенью действия сердечных гликозидов.
Биохимические исследования последних лег на белковом уровне показали наличие двух изоформ для сС субъединипы На ,к-АТФазы -оС и оС+, существенно раз.тачаюшхся тканевой специфичностью, чувствительностью к сердечным гликозидам и некоторыми другими характеристиками. Применение техники молекулярного клонирования-ПОЗВОЛИЛО установить существование трех высокогомологичных мРНК, две из которых кодируют оС и оС+изоформы белка, а третья содержит открытую рамку считывания для белка выоокогомологичного первым двум. Этот гипотетический белок получил название еСШ изоформн. Работами нашего Института в геномном банке человека было установлено наличие не менее 5 генов, гомологичных гену оС субъединицы Иа ,к -АТФазы. В связи о этим возник вопроо о функциональном зна^-чении кавдого из этих генов и о тканеспецифичеокой экспрессии их. Исследование этих вопросов необходимо для более полного изучения механизмов функционирования На+,к+-АТФазы человека.
Цель работы. Данная работа проводилась.в.рамках ооушеотвляе-мых в Инотитуте биоорганической химии им. М.М.Шемякина АН СССР комплексных структурно-функциональных исследований иа+,к+-АТФазы человека. Настоящая работа представляет собой один из этапов изучения экспрессии генов Na+fK+-АТФазы человека и посвящена изучению экспрессии двух генов оС .субъединицы Иа+,к+-АТФазы в различных органах и тканях человека. В связи о этим в данной работе были по-
ставлены оледуюшие задачи:
-
Получить препараты poly(A+)-PHK из различных органов и тканей человека.
-
Получить и проанализировать банк кДНК из мозга человека.
-
Сравнить экспрессию двух генов оС субъединицы На+,К+-АТФазы в различных нормальных и опухолевых тканях человека.
Научная новизна и практическая ценность работы. В результате проделанной работы в банке кДНК из мозга человека обнаружены транокрипты двух генов, кодирующих две из оформи (оСи сСШ) каталитической субъединицы Иа+,к+-АТФазы. Установлено, что экспрессия генов, кодирующих oL и оСШ изоформы оС субъединицы На+,к+-АТФазы, регулируется тканеспецифично. Показано, что содержание оСШ-мРНК наиболее велико в почках. Это позволило начать работу по выделению и изучению этой формы каталитичеокой оубъединицы Na ,к -АТФазы методами белковой химии. Экспрессия двух генов субъединицы уменьшается в опухолевых тканях почки по оравнению о нормальной почечной тканью. Установлено, что экопреосия генов, кодирующих оСШ и.«С изоформы Na ,к -АТФазы человека, регулируется в онтогенезе.