Введение к работе
Актуальность проблемы. В настоящее время хорошо известно, что биотикзависимые процессы играет существенную роль в метаболизме любой живой клетки. Достигнуты значительные успехи в изучении роли биотйнзависимых ферментов в липогенезе, гликонеогенезе, в синтезе пиримидиновых нуклеотидоо, аминокислот и мочевины, а также в ряде катаболических процессов.
В основе процессов, протекающих при участии биотина, лежит реакция карбоксилирования. При этом большинство биотйнзависимых ферментов в процессе карбоксилирования используют энергию АТР. АТР-зависимый синтез карбоксибиотина (первая' полуреакция ферментативного процесса):
HCOj + биотинилгЕ + АТР * СО^-Окотинил-Е + ADP + Pj является общим для ферментов, относящихся к группе биотйнзависимых карбоксилаз и имеет принципиальное значение в живой природе как процесс, обеспечивающий перенос и включение в молекулу одноуглеродного фрагмента. Это относится и к ацетил-СоА-карбоксилазе, биотинзависимои карбоксилазе, ферменту, имеющему универсальное распространение в живой природе, что свидетельствует о принципиальной роли в метаболизме процесса, катализируемого этим ферментом. (Ацетил-СоА-карбоксилаза ключевой фермент в цепи биосинтеза лирных кислот.) Ацетил-СоА-карбоксилаза из печени крысы и явилась объектом данного исследования;
АТР-зависимый синтез карбоксибиотина - фундаментальная проблема для биотинового катализа. Однако, со времени доказательства Линеном образования в процессе реакции карбоксибиотина механизм этого процесса остается невыясненным.
Цель работы. Основной задачей данного исследования была попытка приблизиться к пониманию событий, происходящих при АТР-эависимом карбоксилировании биотиновой простетическои группы в АТР-связывающем центре ацетил-СоА-карбоксилаэы. С этой целью было предпринято изучение функциональных групп и топографии активного центра фермента методами ингибиторного анализа и, в частности, аффинной модификации, с использованием аналогов АТР, субстрата первой полуреакции, протекаюшзя в АТР-связывающеи участке активного центра фермента, и влияние бикарбонат-иона на процессы инактивации фермента.
Научная новизна и практическая ценность работы. Показано, что о-АТР (высокоспецифический модификатор аминогрупп осуществляет аффинную модификацию АТР-связывающего участкг активного центра ацетил-СоА-карбоксилазы. Установлено, чтс алкилирующие амиды АТР и ADP обратимо взаимодействуя ( АТР-связывающим участком активного центра модифицируют группу находящуюся в ацетил-СоА-сяэываюшем участке активного центра Показано , что в результате взаимодействия косубстрата первої полуреакций - бикарбонат-иона, с активным центром фермента увеличивается реакционная способность групп активного центра являвшихся объектом модификации.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи
Объем работы. Диссертационная состоит из введения, обзор литературы, материалов и методов, результатов и обсуждения выводов, списка цитированной литературы. Диссертация изложена н 60 страницах машинописного текста и содержит 4 таблицы 18 рисунков и список цитированной литературы (75 ссылок).