Введение к работе
Актуальность проблемы.
Изеєстно, что РНК- v. ДНК-содеразше вирусы играют существенную роль е развитии некоторых новообразований «ловека. ДНК-содержаший вирус гепатита В относится к группе зирусоЕ, для которых доказана причинно-следственная связь иеаау инфекцией и возникновением опухоли. Среди носителей HBY в 200 раз чаще встречаются случаи первичного рака печени, чем среди незараженных людей. При исследовании печени больных гепатоцеллюлярнои карциномой (НСС) во многих случаях обнаружены интегрированные копии генома HBY в ДНК гепатоштов.
До недавнего времени"изучение онкогенных свойств HBY ограничивалось опухолями печени. Однако, исследование различных типов клеток и тканей больных гепатитом Б показало, что HBV способен проникать не только в клетки печени. Успехи последних лет б исследовании интегрированных копий HBV и окружающих их последовательностей клеточной ДНК показали, что интеграция может сопровождаться перестройками ДНК клетки хозяина.
Способность ДНК НВУ встраиваться в клеточную ДНК установлена для генеративных клеток человека, кроме того интегрированные копии вирусного генома выявлены в эмбриональных опухолях (неиро- и нефробластомах). Серологический анализ сыворотки крови детей с эмбриональными опухолями на присутствие вирусных антигенов и антител к ним
установил, что среди детей с эмбриональными опухоля уровень зараженности HBV значительно превышает, средний, носители составляет 26,5%. Возникновение эмбриональн опухолей связывают с генетическим нарушениями определенн локусов хромосом. Например, развитие нефробластомь; і опухо Вилмса) часто связано с делеиией в локусе хромосомы 11, ретинобластомы - с мутацией в локусе НВІ хромосомы 13. Одн из возможных причин таких нарушении может быть' внедрение локус или вблизи него вирусной ДНК, или ее фрагментов (хс подобных данных пока нет). Цель работы.
Основной целью настоящей работы была молекуляръ биологическая характеристика интегрированного генома виру гепатита В в клетки нейробластомы человека и исследовав возможной роли интеграции вирусного генома в развит молекулярно-генетических патологий человека, в частности, развитии новообразования. Кроме того, необходимо бь получить молекулярно-биологическую характеристику клеточь ДНК, участка интеграции ДНК вируса гепатита В в ДНК клеї непеченочной ткани. В качестве экспериментальной модели бь выбрана нейробластома, в ДНК которой ранее была показа интеграция ДНК HBV. Экспериментальные задачи исследова* заключались в следующем:
получение и скрининг геномной библиотеки из 1 нейробластомы;
физическое картирование фрагмента ДНК неяробластомь участке интеграции;
характеристика интегрированного генома ви{
гепатита В;
клонирование фрагментов ДНК неиробластомы и получение нуклеотидной последовательности клеточной ДНК и ДНК HBY;
компьютерный анализ интегрированного вирусного генома и фланкирующей клеточной последовательности.
Научная новизна работы.
Молекулярно-биологические v. клинико-морфологические исследования последнего десятилетия свидетельствуют о том, что инфицирование HBV может обусловливать, патологию не только печени, но и ряда других органов и тканей. Методом молекулярной гибридизации показана интеграция ДНК HBV в ДНК клеток эмбриональных опухолей. Однако, в литературе до сих пор нет примера исследования интегрированного генома вируса гепатита В в клетках эмбриональных опухолей. В настоящей работе дана характеристика интегрированному геному HBV в ДНК клеток неиробластомы. Проведен анализ фланкирующей клеточной нуклеотидной последовательноти.
Научно-практическое значение работы.
Полученные результаты поззоляют более точно оценить роль вируса гепатита В в возникновении различных патология человека, в том числе и наследственного характера. Применение чувствительных методов исследования (полимеразная цепная реакция, молекулярная гибридизация) позволяет зыявлятъ ДНК вируса гепатита В в целях пренатальною диагностики и для прогностических целей...
Апробация работы.
Отдельные части работы докладывались на XYIII
Международной конференции "European, tumor virus group"
(Стокгольм, 1989), Первой Всесоюзной конференции "Гені человека" (Переславль-Залесский, 1990с), на конкурі научных работ Института молекулярной биологии РАН в 1990г на LXII Сессии общего собрания Академии медицинских на СССР (Москва, 1991г.і.
По материалам диссертации подготовлены и находятся печати 2 статьи.
Структура и обьем диссертации.
Диссертация изложена на страницах машинописно текста, включая 13 рисунков. Состоит из введения, обзо литературы, экспериментальной части, результатов и , обсуждения,, заключения, выводов и . списка цитируем литературы, включающего 129 источников.