Введение к работе
1.Актуальность проблемы.
Одним из перспективных, путей борьбы с вирусными заболеваниями является создание искусственного антивирусного иммунитета с помощью антисмыеловых (ао) і полинуклеотидов,которые представляют собой или ао РНК, как природного так и неприродного генеза, или синтезированные химически ас олигодэзоксинуклеотидн (ас ДНК), которые возможно использовать в качестве химиотершевтических антивирусных агентов. Хотя мы по традиции будем широко использовать термины ас РНК и ас ДНК, но для полноты, картины следует отметить, что на самом деде зга группа антивирусных агентов включает наряду с, поли- и олигонуклеотидами комплементарными вирусным информационным мРНК (ас РНК в узком смысле слова) таэкж? и агенты комплементарные (-) цепям вирусных геноме* , ;.*омополимеры ас ДНК, способные формировать трояндо спирали в вирусных ДНК, рибозимы и олигонуклеогиды^ способные связывать. определенные регуляторные Ояки 'и трансактиваторн вирусного происхождения- Вся ага группа веществ,'включая и ас РНК в узком смысле этого слова носит название комплементарных адресованных антивирусных полннуклеотвдов.
Исследования последних лет. показали эффективность Использиэнсщя йятисмысловых РНК для подавления репродукции различных вирусов. Открытие ас РЖ дает совершенно новый crocos регуЯяйни генной экспрессии в клэгках. Кроме того.
они потенциально мощный инструмент в медицинской практике и ветеринарии, т.к. могут сить использованы в генной терапии, а тамге дают реальную воймокноотъ для создания пород
трвнсгэшшх животных , устойчивых к одной или дака нескольким вирусным инфекциям.
2.Цели и задачи исследования.
Для изучения влияния ас РНК на-репродукцию парвовируса свиней ошп. сконструированы плазмщш , зкспрессирущие ас РНК против неструктурного белка парвовируса свиней (ІШС).
Для решения поставленной перед нами задачи ном предстояло:
1 .Создать. генно-инхенерныа конструкции способные продуцировать ас РНК против неструктурного (НС) белка ПВО под контролем индуцибельяоїй металлотионеинового промотора "
мыши ДОТ-1 ).
2.Получить на основе клеточной линии щитовидной железы свиньи , пермиссивной для БВС ."чнии, содержаще в геноме данную конструкцию и продуцирующие ас РНК к НС области генома ЛВС.
З.Истштрть антивирусное действие полученных конструкций с генами ас РНК в реакции непрямой гемагглютинации (РИГА) и в реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ). 3.Научная новизне и практическая значимость. В процессе работы созданы вектора , несущие под контролем МТ-1 промотора мыши ген ас РНК против НС области генома ЛВС и испытана антивирусная активность данных плазмидв отношении репродукции* ГОС в і етках щитовидной железы свиньи,
пермиссквшх в отношении ГОС. Максимальный уровень ингиоирования составил 95 по данным РИГА и РНИФ.Таким образом впервые показане епоооснооть ао РНК подавлять репродукщш ГОС в клеточной культуре. В экспериментах- in vivo при попытке получения трансгеншх мышей показана токсичность данной антисшсловой конструкции для эмбрионов на ранних стадиях эмбриогенеза.
Работа представляет не только научный, но и
практический интерес, так кок плазмиды с генами асРНК,
обладающие высокой антивирусной активностью могут быть
использованы для получения трансгенных свиней, устойчивых к
шс. - '
Апробация работы. Материалы., диссертации доложены и обсуздены на Конференциях "молодых ученых и специалистов ВНИИСБ в 1989-1992 г.г., на VIII Международном Вирусологическом Конгрессе ( Берлин, август 1990 ), на втором Конгрессе Европейского Общества Ветеринарной Вирусологии ( Uppsula, Sw&den, сентябрь, 1991).
Публикации. Основные результаты диссертации отракены в трех печатных' работах, список которых приводится в конце автореферата.
Объем и структура диссертации. диссертационная работа состоит из введения , глав ". Обзор-литературы", "Материалы и метода", "Результати", "Обсуждение результатов", выводов и списка литературы, включающего 107 библиографических ссылок. Работа изложена на 104 страницах машинописного, текста, включая 2 таблицы и 9 рисунков.