Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. В основе иммунной зашиты организма лежит способность клеток одного типа распознавать и уничтожать клетки другого типа, оказывавших неблагоприятное воздействие на данный организм.
Защита организма от трансформированных и инфицированных вирусом клеток осуществляется цитолитическами лимфоцитами. Эти клетки взаимодействуют с КМ (клетки-мишени) с последующей секрецией в зону контакта или экспрессией на клеточной поверхности цитотоксических белков. Взаимодействие этих белков с КМ приводит к запуску процессов, обуславливающих лизис клеток.
В. последнее время пристальное внимание ученых привлекает лечение злокачественных заболеваний методом адаптивной иммунотерапии. Стимуляция лимфоцитов периферической крови ИЛ-2 приводит к образованию ЛАК-клеток (лимфокин-активированнкх киллеров). Эти клетки обладают высокой противоопухолевой активностью in vitro и in vivo. Клинические испытания, проведенные профессором Розенбергом и др. исследователями, показали, что терапия ЛАК-клетками не ограничивается их применением в медицинской практике, они такие служат удобным объектом для изучения механизма цитотоксичности, опосредованной действием штолитических лимфоцитов.
В настоящее время механизм цитолитического дєйстеия ЛАК-клеток интенсивно изучается. В Институте биологии гена РАН было установлено, что в процессе культивирования лимфоцитов- в присутствии ИЛ-2 наблюдается изменение цитотоксической активности ЛАК-клеток.. Цитотоксичность ЛАК-клеток характеризуется двумя максимумами, развивающимися на 4-ые и 6-ые сутки инкубации с ИЛ-2. Эти изменения цитотоксичности коррелируют с изменением фенотипа ЛАК-клеток: 1-ый максимум цитотоксичности соответствует активности ЕКК (естественные киллерные клетки), появление 2-го максимума связано с развитием субпопуляции ЛАК-клеток с фенотипом, характерным для ЦТЛ (цитолитические Т-лимфоциты). Были выделены и охарактеризованы цитотоксические белки ЛАК-клеток как ассоциированные с мембранами, так и секретируемые в зону контакта при взптиодействии ЛАК-клеток с КМ, причем было установлено, что ЛАК-клетки с различным фенотипом секретируют различные цитотоксические белки. Однако, до настоящего времени практически не изучаются процессы, участвующие в регуляции шгготоксического
действия ЛАК-клеток.
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧА ИССЛЕДОВАНИЯ. Цель настоящей работы - наметить подход к изучению регуляторних процессов, участвующих в модуляции цитотоксической активности ЛАК-клеток. Конкретными задачами Сыли: исследование регуляторной роли ионов кальция в процессе активации . цитолитических лимфоцитов, изучение состава цитотоксических белков при кальций-зависимом и кальций-независимом механизмах секреции. Изучение активирующего влияния на цитотоксичность секретируемнх ЛАК-клетками белков-модуляторов 'цитотоксичности - BLT-эстераз. Поиск ингиОиторов ЛАН-клеток:
НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИИ И ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ. Установлено, что цитолитическов действие ЛАК-клеток в отсутствии экзогенного кальция связано, не только с действием мембрано связанных белков, но такке и с секрецией растворимых цитотоксических белков. Охарактеризованы белки, секретированные по кальций-независимому механизму, определена молекулярная масса етих белков, показано, что взаимодействие ЛАК-клеток с КМ модифицирует состав секретированных белков. Установлена способность ЛАК-клеток осуществлять секрецию непрерывного типа через аппарат Гольдки. Исследованна роль гранулярных BLT-встераз в процессе цитолиза. Показано, что BLT-встеразы не обладают прямым цитотоксическим действием, а участвуют в модуляции цитотоксичвского действия ЛАК-клеток. Показано, что основной белок крупного рогатого скота -фэтуин обладает ингибирупцим действием на цитотоксическую активность ЛАК-клеток.
Работа относится к фундаментальным исследованиям. Она расширяет современное представление о механизме действия цитолитических лимфоцитов. Полученные данные представляют такке практический интерес. Описанив цитотоксических белков, а такке белков, принимающих участие в регуляций процесса цитолиза, открывает перспективу получения их в гомогенном состоянии, что позволит использовать их в клитической практике.' АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные результаты диссертации докладывались на 16-ой конференции ФЕБО (Москава,1984), на совещании "Механизмы интерфазной гибели клеток" (Бущино-на-Оке, 1984), на всесоюзном' совещании "Актуальные вопросы клеточной, биологии" (Ленинград, 1984), 14-ом Международном биохимическом конгрессе (Прага, 1988), IV- совещании УКЛА симпозиума' по молекулярной и клеточной биолгии (Лос-Анжелес, 1988), 2-ой Международной конференции по фактору некроза опухолей и связанным цитокинам (Нала, Калифорния, 1989),
Всесоюзном симпозиуме по молекулярной и клеточной ОНКООИОЛОГИЕ (Львов, 1990), симпозиуме "Структура и функция регуляторних полипептидов" (Москва, 1992), на 8-ом международном иммунологическом конгрессе (Будапешт, 1992). ПУБЛИКАЦИИ. По теме работы имеются 5 публикаций. 'ОБЪЕМ РАБОТЫ. Работа изложена на 89 страницах машинописного текста. Она включает: введение, обзор литературы, экспериментальную часть, обсуждение результатов, выводы и список циторованной литературы. Диссертация содержит 18 рисунков и 3 таблицы.