Введение к работе
Актуальность проблемы. Со времени создаїшя эффективных вакцин против полиомиелита - сначала инактивировашюй вакцины (Salk et al., 1954), а затем живой аттенуировашюй вакцины (Sabin et al., 1959) - полиомиелит стал контролируемым заболеванием в большинстве стран мира (Kim-Farley et al., 1984; Varaghese et al., 1989; Strebel et al., 1992). Тем не менее, несмотря на явные успехи в борьбе с полиомиелитом, достигнутые в развитых странах мира путем проведения программ иммунизации, паралитический полиомиелит продолжает оставаться серьезной проблемой для развивающихся стран Азии и Африки, а также некоторых стран Европы. В связи с этим на Ассамблее Всемирной Организации Здравоохранения, проходившей в 1988 г., была поставлена за/дача полной ликвидации полиомиелита на Земном шаре к 2000 г. (WHA, 1988; WHO, 1992). Результатом усилий, предпринимаемых для достижения поставленной задачи, явилось искоренение полиомиелита в Америке, где с 1991 г. не было зарегистрировано ни одного случая этого заболевания (de Quadros et al., 1992; Tambini et al., 1993; Pan American Health Organization, 1995). Основные трудности па пути глобального искоренения полиомиелита связаны, в первую очередь, с социальной и политической нестабильностью во многих странах, в том числе в некоторых республиках бывшего СССР, влекущей за собой серьезные дефекты в программах иммунизации населения. Для борьбы с паралитическим полиомиелитом важно своевременное выявление случаев заболевания, выделение и идентификация штаммов полиовируса, вызвавших эти заболевания, а также мониторинг
штаммов, циркулирующих среди здорового населения и выделяемых и: объектов окружающей среды.
Для анализа иолиовирусного генома, быстро эволюционирующего прг репликации в человеческом организме, применяются молекулярно-генетические методы, позволяющие проводить оценку эпидемиологическго связей между выявляемыми полиовирусными штаммами и изучать пути ю трансмиссии. Для установлення происхождения штаммов полиовируса і выявления родственных связей между ними успешно применяется мето/ частичного секвенирования вирусного генома (Rico-Hesse et al„ 1987; Kew с al., 1990, 1993; Zheng et al., 1993). Информация о первичной структурі участков РНК генома, полученная с помощью этого метода, может быть зате\ использована для синтеза олигонуклеотидных праймеров, позволяющие проводить рутинную диагностику штаммов полиовируса в клинически) образцах и объектах окружающей среды с помощью методов полимеразноі цепной реакции (ПЦР) и молекулярной гибридизации (Schweiger et. al., 1994 da Silva et al., 1991; Yang et al., 1991, 1992).
Цель работы. Целью настоящей работы явилось изучение штаммої вируса полиомиелита (пикорнавируса, относящегося к роду Enterovirus) выделенных от больных паралитическим полиомиелитом на территорш бывшего СССР в период с 1982 по 1991 гг., а также установленні родственных связей между дикими штаммами, послужившим] этиологическими агентами заболеваний, и создание молекулярных реагента для их быстрой детекции методом ПЦР.
Научная новизна. Выяснено происхождение штаммов вируса полиомиелита, послуживших этиологическими агентами заболеваний паралитическим полиомиелитом в разных регионах бывшего СССР в период с 1982 по 199] гг. Показано, что крайне редкие случаи заболевания паралитическим полиомиелитом были вызваны вакцинородственными штаммами полиовируса преимущественно типа 2. В то же время, вспышки и отдельные случаи заболевания паралитическим полиомиелитом были ассоциированы с дикими штаммами полиовируса типа 1 и типа 3. Молекулярно-эпидемиологический анализ позволил классифицировать дикие штаммы типа 1 на различные геотипы - географические генотипы - А, Т, G, а штаммы типа 3 - объединить в один геотип С. В работе были сконструированы и использованы праймеры для детекции и идентификации диких штаммов полиовируса типа 1 и типа 3 методом ПЦР.
Практическая ценность работы. Выяснено происхождение штаммов вируса полиомиелита, послуживших этиологическими агентами заболеваний паралитическим полиомиелитом в разных регионах бывшего СССР в период с 1982 по 1991 гг. Показана широкая циркуляция диких штаммов полиовируса типа 1 и типа 3 на территории Кавказа и Средней Азии. Молекулярно-эпидемиологический подход позволил определить родственные связи между дикими штаммами полиовируса и возможные пути их распространения. Создание набора праймеров, специфически узнающих геотипы полиовируса, циркулирующие в данном регионе, открывает перспективы создания системы надзора за распространением диких штаммов полиовируса путем мониторинга объектов окружающей среды и штаммов, выделенных от здоровых людей.
Апробация работы. Материалы исследований были представлены на пяти международных конференциях. Результаты работы изложены в 2 публикациях и 5 сообщениях. Диссертация была апробирована нг объединенном семинаре отдела взаимодействия вируса с клеткой НИИ физико-химической биологии им. А. Н. Белозерского и кафедры вирусолопіг Биологического факультета МГУ 10 октября 1995 г.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на страница? машинописною текста и состоит из введения, обзора литературы, описанш материалов и методов исследования, результатов и их обсуждения заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Рабоп иллюстрирована 14 рисунками и 7 таблицами. Библиография включает 15( ссылок.