Введение к работе
Актуальность проблемы. В последнее десятилетие в литературе говорятся о растущем клиническом значении бактерий рода псевдомотас (Беляков В.Д. и др., 1990; Мороз A.S. я др., 1988). Среди них возбудитель нелноидоза - P.pseudomelia! - занимает особое место, что связано с его способностью su-зывать у лщеі в животных тяжелое заболевание, характеризующееся септицемией о множественными некротическими поражениями внутренних органов, трудно поддающееся антибактериальной терапии (Ширяева Д.Т. И др., 1976; Chaowagul V. et al. „ 1989), В силу'этих обстоятельств мелиоидоз и по сегодняшний день остается в списке особо опасных инфекций я вызывает оправданную настороженность у медиков. Несмотря на то, что о момента открытия Уитмором возбудителя мелиоидоза прошло почтя 80 лет, многие стороны его биологии я свойств остаются на сегодняшша день шло изученными.
Эндемичный район для данной инфекции находится медду 2бс.ш. и 20 ю.н. Заболевание встречается в тропических и субтропичес-ких'зонах, чаще всего в Юго-Восточной Азия. В других частях ове-та мелиоидоз менее знаком медикам. Однако в связи с развитием меадународного туризма нельзя относиться к ыелиоидозу как к болезни» распространенное яа отдельное территории. Так, по данным французских и американских специалистов, среди лиц, находившихся более месяца в эндемичных районах, до 9% является потенциально больннми мелиоядозом ( Barrett-Connor в. „ 1978). В последние годы интерес к мзлаоидозу возрос также и аа-за роста заболеваемости во многих государствах, расположенных вне "ьшео $гчєсйес эндемичных географических регионов - США, Австралия, франции ( капаі к., Dejairlleet з. , 1988).
Ыа территории Советского Союза мадиоидоэ не регистрировался,, но постоянно расширяющиеся торгово-экономические связи о эндемичными по данному заболеванию странами создают предпосылки для появления в нашей стране этой опасной инфекции. Имеется также вероятность завоза иелиоидоза из приграничных с СССР районов Ирана, где выявлены активные очаги мелиоидоза (Pourtagbva ы. et al. , 1975).
Все ато диктует необходимость всестороннего исследования биологии возбудителя мелиоидоза и, в частности, вопросов, связанных о изменчивостью микроба в процессе его взаимодействия о микроорганизмом, что раскрывает механизмы патогенеза данного заболевания.
Одним из методов для более глубокого изучения строения и овойств микроорганизмов является электронно-микроскопический, алектронно-микроокопическое исследование как метод структурного анализа дозволяет получить тонкую организацию возбудителей инфекционных заболеваний, дать им морфо-функциональную характеристику и определить возможное значение бактериальных структур в инфекционном провесов (Селезнев А.С., Быков А.С., I983;coater-
toa J.w. , 1979).
Известно, что особенности строения возбудителя заболевания оказывают существенное влияние на характер взаимодействия мйкро-г и макроорганизма (Езепчук Ю.В., 1985; Тимаков В.Д. в др., 1983). Поэтому для понимания патогенеза инфекции необходимо знать морфологию микроба не только in vitro , но и, что особенно важно,
la тіто. Имеются единичные работы, описывающие ультраструктуру бактериальной клетки возбудителя мелиоидоза в живом организме, в которых показана возможность образования 1-форм у «того возбу-
дителя в условиях моделирования специфического абсцесса с использованием имплантированных под коху восприимчивым животным перфузионнык камер (Заъараев B.C. и др., 1987; Саямов СР., 1983). Шесте с тем, изучения ультраструктури бактерий меляоидоза в организме хозяина и их взаимодействия с клетками макроорганизма на начальных этапах инфекции не проводилось.
Цель работы- избить особенности субмикроскооиче-ского строения возбудителя ызлиоидоза, его взаимодействия с гуморальными й клеточкыка факторами шлунатета, а гадав взаимоотношения бактерий с клетками в пораженных органах на начальных етапах инфекционного процесса.
Основные задачи исоледов а.н а я:
I» Дать ультраструктурную характеристику возбудителя мелио-идоза з макроорганизме и при культивирования на сывороточных средах с помощью обычных, приемов электронной микроскопий, а так-Я8 элекгронноцитохимического и электронноиммунохимического методов исследования.
-
На оубмикроскопическом уровне исследовать особенности взаимодействия мелиоидозных бактерий с гуморальными к, клеточными факторами иммунитета хозяина на начальных этапах инфекции.
-
Изучить на ультраструктурном уровне особенности внутриклеточного паразитизма мелиоидозннх микробов.
-
Исследовать взаимоотношение возбудителя мелиоядоза с клеточными элементами в инфицированных органах.
Научная новизна
Проведенные исследования позволили получить следующие новые данные:
- 6 -'
доказано, что возбудитель мелиоидоза в условиях макроогь. ганизма и при росте на сывороточнах средах продуцирует капсулу;
с помощью электронно-микроскопического, ИММуНОЦЯТОХШИЧе-схсого и цитохимического методов исследовании изучена ультраструктура капсулы возбудителя мелиоидоза, которая имеет преимущественно полисахаридяуи природу;
установлено, что бактерии, обладающие капсулой, устойчивы к опсонизации и фагоцитозу in vivo ;
на ультраструктурном уровне прослеген механизм инвазии возбудителя мелиоидоза в клетки хозяина;
показано, что возбудитель ыеллоидоза в ряде случаев способен, покидая ^агосому до слияния ее с лнзосомами, паразитировать свободно в цитоплазме клетки макроорганизма;
виявлено, что сформированная у P. paeudomallei капсула при его внутриклеточном развитии предохраняет патоген от неблагоприятного воздействия защитных механизмов клетки-хозяина;
охарактеризован с помощью электронно-микроскопического и цитохимического методов процесс слияния лизосои с фагосо-мами, содержащими микробов;
показано, что возбудитель мелиоидоза, являясь факультативным внутриклеточным паразитом, обладает тропностью к клеткам ретикулоэндотелиальной системы макроорганизма.
Практическая ценность. Полученные в результате исследования данные расширяют" и углубляют представления о строении на субмикроскопическом уровне возбудителя мелиоидоза в макроорганнзме, раскршзают механизмы его взаимодействия с гуморальными и клеточ-
- 8 -'
2. Злектронноцитохимическое и электронноиьмунохямяческое иссле
дования выявляют, что основу капсулы, образуемой P. paeudo-
maiioi la vivo , составляют полисахариды.
-
Налсулыше варианты бактерий устойчивы к опсоыззации й фагоцитозу.
-
Возбудитель мелиовдоза способен покидать фагбсому до слияния ее с лизосомамя и паразитировать свободно в цитоплазме клетки организма.
-
Сформированная у P. pseudomaiiei капсула при его внутриклеточном развитии предохраняет патоген от неблагоприятного воздействия защитных механизмов клетки-хозяина.
6» Возбудитель мелиоидоза, являясь факультативным внутриклеточным паразитом, проявляет тропность к клеткам ретикулоэндоте-лиальной системы макроорганизма.
диссертация состоит из введения, трех глав, выводов, иллюстрирована 72 рисунками. Указатель литературы включает 254 источника, в тон числе 139 на иностранных языках. Обідай обгем диссертации 1І6 страниц машинописи.
Материалы и методы исследования. В работе использованы «узейные штаммы 100, 108, 0-І4І, 60806, 97 возбудителя мелиоидоза, выращенные на обычных питательных средах, а также на средах с добавлением сыворотки морской свинки и белой крысы. Опыты выполняли на линейных белых крысах, морских свинках, золотистых хомячках.
При подготовке материала к исследованию в ультратонких ере-
нкш факторами иммунитета на начальных этапах инфекционного процесса. Это имеет важное значение для понимания патогенеза данного заболевания и может служить теоретической основой для даль-ue&aeg разработки мероприятий по профилактике, диагностике и лечению мелиоидоза.
Материалы диссертационноа работы использованы при оформле-.ши "Методических рекомендаций по стерилизующему режиму фиксации клеток -шкроорганизма, зараженных возбудителями мелиоидоза и сапа для электронной цитохимии и иммуиоцитохиыии", утвержденных директором Волгоградского НИПЧЙ 6 августа 1990 г., а также двух рационализаторских предложение.
Вышеуказанные документы применяются в практической и научно! работе лабораторий Волгоградского научно-исследовательского противочумного института, использующих ыелисидоэные культуры.
Апробация работы. Материалы диссертации доло- ' жены и представлены на Областной научной конференции молодых ученых "Эпидемиология, микробиология и иммунология бактериальных и вирусных инфекций" (Ростов-на-Дону, 17-20 октября 1989 г.), на Первом Всесоюзном иммунологическом съезде (Сочи, 15-17 ноября IS89 г.), на итоговых научных конференциях'Волгоградского НИШИ (Волгоград, 1989, 1990).
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 научных работ.