Содержание к диссертации
Введение
Глава 1. Обзор литературы 10
1.1. Пробиотики 10
1.1.1.Понятие пробиотиков 10
1.1.2. Понятие бактериоцинов и микроцинов 13
1.1.3.Характеристика антагонистически активных штаммов лактобацилл 17
1.1.3.1.Частота встречаемости бактерицинпродуцирующих штаммов лактобацилл 17
1.1.3.2.Спектр антагонистической активности бактерицинпродуцирующих штаммов лактоба цилл 19
1.1.3.3.Физико-химические характеристики бактериоцинов, синтезируемых лактобациллами 20
1.1.3.4.Генетический контроль синтеза бактериоцинов 22
Глава 2. Материал и методы исследования 26
2.1. Характеристика исследуемого материала 26
2.2. Выделение чистой культуры лактобацилл 27
2.3. Идентификация лактобацилл 27
2.4. Праймеры и постановка. ПЦР для видовой идентификации лактобацилл .28
2.5. Изучение антагонизма микроорганизмов методом перпендикулярных штрихов 31
2.6. Определение антагонистической способности микроорганизмов (продукция бактериоцинов) 31
2.7. Определение антагонистической способности лактобацилл (продукция микроцинов) 32
2.8. Определение антимикробной активности супернатантов, содержащих бактериоциноподобные вещества 33
2.9. Совместное культивирование на поверхности твердой питательной среды 33
2.10. Определение чувствительност лактобацилл к желчи 34
2.11. Определение чувствительности лактобацилл к соляной кислоте 34
2.12. Определение кислотопродуцирующей способности лактобацилл 34
2.13. Определение признаков патогенности 35
2.13.1. Определение лецитиназной активности 35
2.13.2. Определение казеинолитической активности 35
2.13.3 Определение желатиназной активности 36
2.13.4. Определение нуклеазной активности 36
2.13.5. Определение каталазной активности 37
2.13.6. Определение гемолитической активности 38
2.13.7. Определение антилизоцимной активности 38
2.14. Определения адгезивной способности микроорганизмов 39
2.15. Определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (качественная) 39
2.16 Определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (количественная) 40
2.17. Определения чувствительности латобацилл к химиопрепаратам и хитозану 40
2.18. Статистическая обработка материала 41
Глава 3. Результаты собственных исследований 42
3.1. Выделение и идентификация лактобацилл 42
3.2. Антагонистическая активность лактобацилл 43
3.2.1. Бактериоцинная и микроцинная активность 43
3.2.2. Антагонистическая активность прогретой культуры 49
3.2.3. Межмикробный антагонизм 50
3.3. Чувствительность лактобацилл к антимикробным препаратам 50
3.4. Чувствительность лактобацилл к химиопрепаратам и хитозану 53
3.5. Ферменты патогенности и адгезивная способность лактобацилл 54
3.6. Чувствительность лактобацилл к соляной кислоте и желчи 57
3.8. Кислото продуцирующая способность лактобацилл 63
3.9. Характеристика групп сравнения 65
Глава 4. Заключение 80
Выводы 89
Практические рекомендации 89
Список литературы 91
- Понятие бактериоцинов и микроцинов
- Бактериоцинная и микроцинная активность
- Чувствительность лактобацилл к соляной кислоте и желчи
- Характеристика групп сравнения
Понятие бактериоцинов и микроцинов
Представители нормальной микрофлоры выделяют различные антибактериальные вещества, основными из которых являются бактериоцины и микроцины. Бактериоцины представляют собой комплексы, составной частью которых является белковый или полипептидный компонент, который считается ответственным за бактерицидную активность. В отличие от антибиотиков, бактериоцины имеют сравнительно узкий спектр действия, направленный против родственных видов (штаммов) (Блинкова Л.П., 2003, Курепина Н.Е. и соавт., 1986, Хмель И.А., 1999, Garver K.I. and Mu-riana P.M., 1993, Jack R.W. et al., 1995, Jamuna M. and Jeevaratnam, 2004, Nettles C.G. and Barefoot S.F., 1993, Niedzielin R. et al, 2001, Okerke A. and Montville Т., 1991, Piard J.C. and Desmazeaud M., 1992, Strus M. and Mali-nowska M., 1999, Tagg J.R. et al., 1976, Vanderhoof J.A. et al., 1999). Молекулярная масса всех изученных бактериоцинов грамположительных бактерий (в том числе лактобактерий и бифидобактерий) колеблется, в основном, от 2,0-10 до 5-10 . Термостабильность бактериоцинов варьирует в зависимости от степени их очистки, величины рН и ионной силы, молекулярной массы и структурной конфигурации белковой составляющей (Хмель И.А.1999, Blanco М.Т. et al., 1986, Diep D.B. et al., 2000, Hernandez-Chico С et al., 1986, Kaiser A.L. and Montville Т., 1993).
В зависимости от штамма-продуцента, химической природы, способа воздействия на бактериальную клетку выделяют несколько групп бактериоцинов (Atrih A. et al., 1993, Baguero F. And Morreno F., 1984, De-Lorenzo-V. et al., 1984,1985, Garcia-Bustos J.F. et al., 1985, Бондаренко B.M. и соавт., 1997, 1999, 2001):
1) - лантибиотики - это бактериальные полипептиды, механизм антибиотического действия, которых связан с нарушением проницаемости бактериальной цитоплазматической мембраны, образованием пор, через которые проходят молекулы лантибиотиков;
2) - термостабильные пептиды малой молекулярной массы, действие которых обусловлено наличием на поверхности чувствительной клетки специфического протеинового мембранного рецептора, присоединяющего бактериоцин;
3) - высокомолекулярные термолабильные протеины;
4) - комплексы протеинов, для проявления бактерициногенной функции которых необходимы углеводная или липидная составляющие.
Основную группу составляют лантибиотики - бактериальные полипептиды, содержащие в своей структуре пострепликативно модифицированные аминокислоты: лантонин, Р-метиллантонин или ненасыщенные аминокислоты, представляющие собой термостабильные пептиды (Блин-кова Л.П. 2003, Klaenhammer T.R. 1993.).
Бактериоцинпродуциругощие клетки устойчивы (иммунны) к действию собственного бактериоцина. Это связано с наличием генов (imm), определяющих иммунитет к синтезируемому бактериоцину (Diaz-Guerra L. et al., 1989, Diep D.B. et al., 2003, Garrido M.C. et al. , 1986, Genilloud-O. et al., 1989, Kurepina N.E. ct al., 1990, Lavina M. et al., 1986, Perdigon G. et al., 2001).
По механизму действия микроцины можно разделить на:
1 - блокирующие белковый синтез в микробных клетках (микроцины А15, А17, С7, С51),
2 - подавляющие репликацию ДНК (микроцин В17, D93),
3 - ингибирующие транспорт лейцина и про лина (микроцины D140, D15)
4 - изменяющие мембранный потенциал клетки (микроцин Е492),
5 - нарушающие процессы деления клетки (микроцин J25).
Лактобациллы образуют широкий спектр бактериоцинов (Курепина Н.Е. и соавт., 1990, Хмель И.А. 1993, Altermann Е. и соавт., 2005, Aguilar A. et al., 1982, Jimenez-Diaz R. et al., 1993, Martinez J.L. et al., 1986, Pugsley A.P. 1985, 1986, ): курвацин A (Lactobacillus curvatus LTH1174), курвацин FS47 (Lactobacillus curvatus FS47), ацидоцин B(Lactobacillus acidophilus), лактоцин S (Lactobacillus sake L 45), сакацин (Lactobacillus sake Lb674), плантарицин А и С (Lactobacillus plantarum), плантации 154 (Lactobacillus plantarum LTF154), амиловорин 471 (Lactobacillus amylovorus 471119), 6a-варицин MN (Lactobacillus bavaricus MN), казеицин (Lactobacillus casei). Бактерицины молочнокислых бактерий (лактобацилл) разделяют на две группы. Представители первой группы характеризуются узким спектром антибактериального действия - вызывают гибель организмов, близких к организму продуценту. В эту группу входят лактоцин S, амиловорин, кур-вацин А. Бактериоцины, относящиеся ко второй группе, ингибируют рост многих видов грамположительных микроорганизмов, в том числе Listeria monocytogenes, Clostridium botulinum, Clostridium sporogenes, Staphylococcus aureus, Bacillus spp., Enterococcus faecales. К бактериоцинам второй группы относятся: ацидоцин В, курвацин FS47, плантарицин С. Показано, что большая часть этих бактериоцинов не токсична и не иммуногенна.
Одним из первых препаратов, созданных на основе бактериоцинов широкого спектра действия молочнокислых бактерий является низин, применяемый в качестве консерванта в пищевой промышленности. Низин, синтезируемый Lactococcus lactis (Anderson A.R. et al., 1988), является бактериоцином, ингибирующим размножение и рост грампозитивных бактерий. По данным Liu С и соавт. (2005), продукция низина является процессом, находящимся в строгой зависимости от состава среды, на которой культивируется лактококк, вследствие чего тщательная оптимизация ключевых параметров культивирования ведет к значительному увеличению продукции данных метаболитов. Для получения низина, продуцируемого Lactococcus lactis, используют недорогую, но ценную по аминокислотному составу и витаминам среду на основе ферментативного гидролизата молока с добавлением дрожжевого экстракта. Низин Z синтезируется штаммом Lactococcus lactis 10-1 при использовании среды, содержащей глюкозу, сахарозу, ксилозу. На среде с глюкозой удалось получить высокий уровень низина (4000 МЕ/мл). Lactococcus lactis растет при 37С (Barefoot S.F. et al., 1994). Вид источника азота также влияет на образование бактериоцина. При сравнении влияния на синтез низина органического источника азота (10 г/л) в составе сложных сред был получен наиболее значимый эффект при добавлении муки из хлопкового семени ( 2500 МЕ/мл), а также при использовании рыбной муки в сочетании с дрожжевым экстрактом ( 2000 МЕ/мл) (De Vuyst L. et al., 1996.). Благоприятное влияние неорганических фосфатов на синтез низина (3500 МЕ/мл) при периодическом культивировании штамма L.lactis subsp. lactis NIZO 22186 выявлено в условиях рН 6,8 с содержанием в среде К2НРО4 в количестве 50 г/л. Однако для L.lactis 10-1 стимулирующего эффекта фосфатов не отмечено. Внесение в среду Mg позволяет не только значительно снизить слипание клеток у штамма-продуцента L..lactis subsp. lactis АТСС 11454, но и интенсифицировать синтез низина. Возможно, такой эффект является штаммоспе-цифичным, так как на образование низина штаммом S.lactis 10-1 добавле-ние Mg" не повлияло. Известно, что в процессе ферментации с использованием Lactococcus lactis 10-1 в среде с глюкозой при рН 5,5 максимальные количества бактериоцина (3940 МЕ/мл) и биомассы (68,5 мг/г) получены при перемешивании со скоростью 320 об/мин, а при 1000 об/мин отмечено незначительное снижение концентрации бактериоцина (3410 МЕ/мл). Противоположный эффект (ингибирование роста клеток и синтеза бактериоцина) получен при скорости 540 об./мин на среде с ксилозой.
Бактериоцинная и микроцинная активность
Спектр антагонистической активности лактобацилл выявляли методом агаровых слоев у 20 культур лактобацилл, подавляющих индикаторный штамм E.coli BVK 083. В качестве тестовых культур были использованы следующие штаммы: Staphylococcus aureus 25923, Candida albicans 531, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium 415, Shigella sonnei I фазы 941, Bacillus subtilis, Escherichia coli 25922. В качестве контроля использовался штамм Lactobacillus plantarum 8RA-3 с известным спектром антагонистической активности.
Следует отметить, что все 20 штаммов лактобацилл продуцировали бактериоцины и микроцины, но не все индикаторные штаммы по каким-то причинам проявили к ним чувствительность (табл.2).
Кроме того, различные штаммы лактобацилл проявили антагонистическую активность к разному количеству тестовых культур, что характеризовалось, в настоящем исследовании, как спектр антибактериальной активности. Колебания спектра антибактериальной активности составили от 1 до 7.
Индикаторные культуры Bacillus subtilis и Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 проявили чувствительность к бактериоцинной продукции 15 тестовых штаммов лактобацилл (75%), Staphylococcus aureus 25923 и Salmonella typhimurium 415 - к бактериоцинам 12 штаммов лактобацилл (60%). В свою очередь, Escherichia coli 25922 оказался чувствительным к воздействию бактериоцинов 11 штаммов лактобацилл (55%), Shigella sonnei I фазы 941-9 штаммов лактобацилл (45%), Candida albicans 531 - к 2 штаммам лактобацилл (10%) (рис.1, табл. 4).
К микроцинной продукции 8 тестовых штаммов лактобацилл (40%) оказалась чувствительна 1 культура - Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, к микроцинной продукции 6 лактобацилл (30%) - Escherichia coli 25922, к микроцинной продукции 5 лактобацилл (25%)- Salmonella typhimurium 415, к микроцинной продукции 3 лактобацилл (15%)- Candida albicans 531, Shigella sonnei I фазы 941 и Bacillus subtilis, к микроцинной продукции 2 лактобацилл- Staphylococcus aureus 25923 (10%) (рис. 2, табл. 5).
Ингибирующая активность исследуемых лактобацилл характеризовалась зоной задержки роста тестовых культур в мм. Средний диаметр ЗЗР у индикаторных культур по отношению к бактериоцинной продукции лактобацилл колебался от 12 до 18 мм и от 11 до 14 мм по отношению к мик-роцинной активности лактобацилл (табл. 3).
Как видно из таблицы, к бактериоцинной и микроцинной продукции каждого штамма лактобацилл оказались чувствительны разные по качеству и количеству культуры. Таким образом, все исследуемые 20 штаммов лактобацилл проявили бактериоцинную активность, а 16 из них - микро-цинную активность.
Чувствительность лактобацилл к соляной кислоте и желчи
Лактобациллы, обитая на слизистой оболочке ЖКТ, постоянно подвергаются воздействию содержимого желудка и кишечника, поэтому следующим этапом нашего исследования было изучение чувствительности лактобацилл к желчи и соляной кислоте.
Скорость размножения исследуемых бульонных культур лактобацилл характеризовалась величиной оптической плотности растущих бульонных культур по отношению к стерильному бульону. Величина оптической плотности сравнивалась с контролем, где происходило размножение исследуемого штамма в отсутствие соляной кислоты или желчи.
Для большинства штаммов лактобацилл минимальная ингибирую-щая концентрация соляной кислоты составила 1,25% (рис. 6,7,8,9). При концентрации НС1 0,625% наблюдался подъем роста всех исследуемых штаммов лактобацилл. Возможно, это связано с активацией ферментных систем, отвечающих за метаболические процессы бактерий. Концентрация НО 0,3125% оказывала ингибирующее действие на лактобациллы, а снижение концентрации соляной кислоты не оказывало существенного влияния на рост микроорганизмов.
При исследовании чувствительности лактобацилл к желчи (рис. 3) было выявлено, что при любой концентрации желчи наблюдалась стимуляция роста лактобацилл. Наибольшими концентрациями желчи, стимулирующими рост лактобацилл, являлись: 0,625%, 2,5%, 5% и 10%, наименьшими - 1,25% и 20%.
При исследовании чувствительности лактобацилл к желчи было установлено, что у 5 штаммов наблюдалось равномерное увеличение оптической плотности, начиная с концентрации желчи 0,625% (рис.13); у 6 штаммов, после достижения максимального пика оптической плотности, происходило равномерное ее снижение: при концентрации 2,5% - у 2 штаммов, при 5% - у 2 штаммов, при 10% - у 2 штаммов (рис.11); у 4 штаммов после достижения минимального пика оптической плотности происходило равномерное ее повышение: при концентрации 2,5% - у 2 штаммов, при 5% - у 2 штаммов (рис.12); у 6 штаммов происходило периодическое увеличение и уменьшение оптической плотности при различных концентрациях желчи (рис.10).
Минимальная ингибирующая концентрация для 9 штаммов лактобацилл составила 0,0625% концентрации желчи, для 2 штаммов - 2,5%, для 2 штаммов — 5%, для 5 штаммов - 10%, для 3 штаммов - 20%. Пик оптической плотности у 3 штаммов выявлен при 0,625% концентрации желчи, у 2 - при 1,25%, у 2 - при 2,5%, у 4 - при 5%, у 4 - при 10% и у 6 - при 20% (табл.10).
Лактобациллы характеризуются способностью к образованию органических кислот, в том числе молочной кислоты, способствующей перси-стенции в желудочно-кишечном тракте [Бондаренко В.М. и соавт., 2003], поэтому была исследована активность кислотообразования у 20 штаммов лактобацилл (табл.11). Количество образуемой лактобациллами молочной кислоты выражали в градусах Тернера.
В течение первых суток (табл. 12) происходило закисление среды культивирования (кислотность от 2 до 52 Т, в среднем- 22,45 Т), за исключением 3-х штаммов, которые не проявили способность к кислотооба-зованию в течение первых 24 часов. В последующем происходило постепенное увеличение кислотности (табл.11), которая составила ко 2 суткам: от 14 до 60 Т (в среднем - 37,1 Т) и кЗ суткам: от 26 до 56 Т (в среднем 41,5 Т).
После добавлении в среду глюкозы в качестве питательного субстрата, были получены следующие данные: к концу первых суток наблю 65 далось закисление среды (кислотность - от 2 до 48Т, в среднем - 27,5 Т), за исключением 2 штаммов. Ко вторым суткам кислотность повысилась и колебалась - от 34 до 92 Т, в среднем - 40,3 Т. К третьим суткам: от 12 до 102 Т, в среднем 54 Т. Таким образом, присутствие глюкозы незначительно стимулировало продукцию молочной кислоты лактобациллами (р 0,05). Таким образом, 4 штамма из 20 показали высокий уровень продукции кислоты на протяжении первых, вторых и третьих суток культивирования в жидкой питательной среде как с глюкозой, так и без глюкозы. У штаммов № 28, 72, 32 и L.plantarum в питательной среде с глюкозой продукция молочной кислоты была выше примерно в 2 раза, чем на среде без глюкозы. Штаммы № 17, 42, 46, 77, начиная со вторых суток, в 2 раза больше продуцировал кислоту на среде с глюкозой и штаммы № 28 и 23 -на среде без глюкозы.
Характеристика групп сравнения
В группу сравнения вошли производственный штамм L.plantarum 8RA-3, предоставленный НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН г. Москва, и 42 штамма энтерококков, выделенных на кафедре микробиологии, вирусологии и эмбриологии Тверской ГМА г. Тверь.
Энтерококки выделялись из фекалий 280 школьников в возрасте от 7 до 15 лет, мальчиков - 106, девочек - 174. Все дети на момент обследования были клинически здоровы, не имели в анамнезе инфекционных и соматических заболеваний, не предъявляли жалобы, характерные для заболеваний ЖКТ и других систем органов. После посева на среду Эндо изучали культуральные свойства бактерий. Были отобраны мелкие (1-2 мм в диаметре), серого цвета, гладкие, влажные, блестящие, с ровным краем, гомогенной внутренней структурой, S форма колонии. Далее проводилось изучение морфологических и тинкториальных свойств, используя лабораторный микроскоп и программно-аппаратный комплекс "ДиаМорф-Cito". В исследование были включены Грам положительные каталазонегативные кокки, располагающиеся цепочками.
Первичный скрининг чистых культур энтерококков проводился по антагонистической активности по отношению к патогенной и условно патогенной микрофлоре ЖКТ методом перпендикулярных штрихов на плотной питательной среде. После отбора наиболее антагонистически активных штаммов, проявляющих антагонизм по отношению не менее чем к 2 тестовым культурам провели накопление чистой культуры и идентификацию. При идентификации установлено, что 42 исследуемых штамма относятся к роду Enterococcus, используя тест-систему арі 20 STREP (bioM-erieux Vitek, Inc.).
Из 20 антагонистически активных по отношению к патогенной и условно-патогенной микрофлоре штаммов лактобацилл были отобраны 5 бесплазмидных (плазмидный профиль изучался на базе лаборатории генетики вирулентности бактерий НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи РАМН) наиболее антагонистически активных и проведено их сравнение с 42 штаммами энтерококков и производственным штаммом L.plantarum 8RA-3.
Сравнение антагонистической активности (продукцию бактериоци-нов и микроцинов) проводили методом отсроченного антагонизма и его модификацией к 8 тест-культурам. В качестве тестовых культур были использованы следующие штаммы: Staphylococcus aureus 25923, Candida albicans 531, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium 415, Shigella sonnei I фазы 941, Bacillus subtilis, Escherichia coli 25922. В результате установлено, что все тест-культуры проявили высокую чувствительность к бактериоциннои активности исследуемых лактоба-цилл (рис.15), за исключением С. albicans, которая оказалась резистентной к их воздействию. К контрольному штамму L.plantaruin 8RA-3 все 8 тест штаммов показали 100% чувствительность. Бактериоцинная активность энтерококков характеризовалась разной степенью выраженности ко всем тест культурам. Штамм P.aeruginosa проявил чувствительность к бактериоциннои активности 27 штаммов энтерококков из 42 исследуемых, что соответствует 64,3%, S.typhimurium - к бактериоциннои активности 26 штаммов, что составило 61,9%, B.subtilis - к бактериоциннои активности 25 штаммов, что составило 59,5%, S.flexneri - к бактериоциннои активности 21 штаммов, что соответсвует 50%, S.aureus - к бактериоциннои активности 17 штаммов, что составило 40,5 %, E.coli - к бактериоциннои активности 16 штаммов, что составило 38,1%, С.albicans - к бактериоциннои активности 3 штаммов, соответственно 7,1 % и (табл. 13, рис.14).
Выраженность бактериоцинной активности исследуемых штаммов также характеризовалась диаметром ЗЗР индикаторных культур, которая колебалась от 30,1 до 40,6 мм по отношению к бактериоцинной продукции лактобацилл, от 12 до 15,46 мм по отношению к энтерококкам и от 30,1 до 40,2 мм по отношению к L.plantarum 8RA-3 (табл. 14,15).
При сравнении микроцинной активности антагонистически актив ных лактобацилл, L.plantarum 8 RA-3 и 42 штаммов энтерококков были получены следующие данные.
При исследовании чувствительности индикаторных штаммов к продукции микроцинов лактобациллами (табл. 16, рис.16) выявлено, что рост Е. соН подавили микроцинны 3-х штаммов (L. acidophilus 33 и L. fermentum 42 и 54) (60%), рост S.typhimurium - 2-х штаммов (L. fermentum 46 и 54) (40%), рост В. subtilis - 1 штамма (L. fermentum 12) (20%), рост Р. aeruginosa -1 штамм (L. acidophilus 33)(20%); ни один из этих штаммов не повлиял на рост S. aureus, S.sonnei, S.flexnery и С. albicans.
Индикаторные штаммы проявили низкую чувствительность к микроциннои продукции энтерококков (табл.15, рис.15): S.aureus проявил чувствительность к микроциннои продукции 7 штаммов (16,7%), S.flexneri - 5 штаммов (11,9 %), E.coli - 6 штаммов (14,3 %), S.typhimurium - 8 штаммов (19 %), P. aeruginosa - 13 штаммов (30,9 %), B.subtilis - 3 штаммов (7,1 %) и С.albicans - 5 штаммов (11,9 %) энтерококков. По сравнению с исследуемыми штаммами лактобацилл почти ко всем тест культуры проявили высокую чувствительность к микроциннои активности L.plantarum 8RA-3.
Выраженность микроциннои активности исследуемых штаммов также характеризовалась диаметром ЗЗР, которая колебалась от 18,1 до 20,2 мм по отношению к лактобациллам, от 12 до 15,46 мм по отношению к энтерококкам и от 20,1 до 25,1 мм к L.plantarum 8RA-3 (табл.17, 18).
Антагонистическая активность прогретых штаммов лактобацилл, производственного штамма L.plantarum 8 RA-3 и энтерококков с использованием следующих тестовых культур: Staphylococcus aureus 209, Pseu-domonas aeruginosa ATCC 9027, Escherichia coli ATCC 25922, Candida albicans 531 из государственной коллекции ГИСК им. Л.А.Тарасевича, г.Москва; Salmonella typhimurium 11, Shigella flexneri 26, Bacillus sublilis 534, выделенный из препарата «Споробактерин» (Россия) выявлена не была.
Проведено сравнение чувствительности антагонистически активных лактобактерий, L.plantarum 8RA-3 и энтерококков к антимикробным препаратам методом бумажных дисков.
При исследовании резистентности исследуемых культур к антимикробным препаратам выявлено, (рис.16), что 100% антагонистических штаммов лактобацилл резистентны к ципрофлоксацину, норфлоксацину, пенициллину и метронидазолу и гентамицину. 80% - к оксациллину, 60% - к линкомицину, 40% - к офлоксацину, амоксициллину, 20% к тетрациклину. К ампицилину, олеандомицину, к хлорамфениколу и кларитроми-цину лактобациллы не проявили резистентность. L.plantarum 8RA-3 оказался резистентым к ципрофлоксацину, норфлоксацину, пенициллину и метронидазолу и гентамицину, тетрациклину, оксациллину, линкомицину и офлоксацину. 100% выделенных штаммов энтерококков были резистентны к метронидазолу и бензилпенициллину, 68,6% штаммов к оксациллину и тетрациклину, 57,6% штаммов - к амоксициллину, 57,1% штаммов - к линкомицину, 44,1% штаммов - к гентамицину, 35,3% штаммов - к ципрофлоксацину, 35% штаммов - к кларитромицину, 34, 3% штаммов - к олеандомицину, 29,4% штаммов к ампициллину и офлоксацину, 2,9% штаммов - к хлорамфениколу, 17,1% штаммов - к норфлоксацину.
При исследовании чувствительности лактобацилл к антимикробным препаратам были получены следующие данные: к ампицилину, олеандомицину, к хлорамфениколу и кларитромицину данные бактерии проявили 100% чувствительность (рис.17). 80% выделенных штаммов оказались чувствительными к тетрациклину, 60% - к амоксициллину, 40% к линко-мицину и офлоксацину, 20% к оксациллину. L.plantarum 8RA-3 проявил чувсвительность к ампицилину, олеандомицину, хлорамфениколу, амоксициллину и кларитромицину. При изучении чувствительности выделенных 42 штаммов энтерококков к антибактериальным препаратам получили следующие результаты. Выявлена чувствительность 5,7% штаммов энтерококков к тетрациклину, 28,6% - к оксациллину, 31,4% - к олеандомицину, 80% - к хлорамфениколу, 28,6% - к линкомицину, 40% - к норфлоксацину, 8,8 % - к ципрофлоксацину, 32,4% - к офлоксацину, 35,3% - к гентамицину, 67,6% - к ампициллину, 33,3% - к амоксицилли-ну, 40% - к кларитромицину.