Введение к работе
Актуальность проблемы. Эпидемиологическая ситуация по туберкулезу в Российской Федерации, а также со всем мире, включая и развитые страны, в последние годы значительно ухудшилась. По данным экспертов ВОЗ, заболеваемость туберкулезом сохраняется на высоком уровне и составляет 8-Ю млн в год [Е.С.Овсянкина, 1996; М.В.Шилова, 1996].
Успехи терапии и профилактики туберкулеза прямо связаны со своевременной и точной диагностикой. Для диагностики туберкулеза в настоящее время используют главным образом клинико-рентгенологические. бактериологические методы и туберкулинодиагностику. Трудности клинической диагностики связаны, прежде всего, с наличием атипичных форм заболевания и неясной рентгенологической картиной. Значимость туберку-линодиагносгики в современных условиях уменьшается в связи со снижением у больных туберкулезом чувствительности к туберкулину [В.И. Литвинов, 1996: В.Л. Фнрсова и соавт.. 1994].
Среди лабораторных методов диагностики туберкулеза основным и наиболее достоверным является бактериологический метод. Однако частота кысеваемости микобактерий туберкулеза, по данным большинства авторов, не превышает 20-40%. Кроме того, бактериологический метод позволяет установить диагноз не ранее чем через 1-1.5 месяца [В.И. Голытевская и соаві., 1995].
В настоящее время из диагностических методов значительное внимание уделяется иммунодиагностике туберкулезной инфекции. К наиболее перспективным и чувствительным методам относят иммуноферментный анализ, позволяющий определять туберкулезные антигены и антитела к ним. Однако он не получил широкого распространения в практике фтизиатров из-за отсутствия коммерческих наборов реактивов, а также недостаточной специфичности. Из методов иммунодиагностики туберкулеза, основанных на выявлении иммунной реакции организма, привлекает внимание определение антител к микобактериям туберкулеза (противотуберкулезных антител) в реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА. или РИГА). Среди серологических методов РПГА отводится первое место по сумме положительных качеств простоте постановки реакции, экономичности и экспрессное оценки. Учитывая наличие коммерческого эритро-цитарного диагностикума и возможность использования микрометода, РИГА можно широко применять на практике. Однако основанная на определении диагностического титра антител реакция недостаточно чувствительна и специфична [В.И. Литвинов, 1996; К.Ф. Каральник. 1989].
Существуют принципиальные возможности ранней диагностики инфекций на основе определения специфических антимикробных реакций. На кафедре патофизиологии Пермской государственной медицинской академии разработан оригинальный подход к оценке специфических реакций при инфекциях. В его основу положена закономерность корреляции у зло-
ровых людей и больных контрольных групп антимикробной активности і отношении разнородных микробов, что позволяет оценить специфически* изменения в крови по соотношению специфического и неспеиифическогс компонентов антимикробных реакций [В.Н. Каплин. 1996]. Этот новый ме тодический подход оказался эффективным при исследовании специфиче ских клеточных реакций у больных туберкулезом. Однако в отношенш РПГА возможности этого подхода при туберкулезе не изучены.
Целью работы является совершенствование диагностики туберкуле за на основе определения титров противотуберкулезных антител в РПГА.
Задачи исследования
-
Усовершенствовать методику оценки РПГА на основе определен!!! реакции по соотношению титров противотуберкулезных и неспецифичс ских антител (Ат).
-
При использовании оригинального методического подхода иссле довать закономерности формирования РПГА у больных туберкулезом.
-
Обосновать возможность применения нового подхода к онснк РПГА в ранней диагностике туберкулеза.
-
Изучить новые возможности оценки активности бактериальной процесса на основе оригинального методического подхода к определении титров противотуберкулезных антител.
-
Исследовать in vitro эффект взаимодействия туберкулезного анти гена (Аг) с антителами к микобактериям туберкулеза и определить воз можностн использования этого эффекта в диагностике туберкулезной ин фекции.
Научная новизна
Разработан новый методический подход к определению РПГА т соотношению титров противотуберкулезных и протнвошшеллезных анти тел. повышающий чувствительность її специфичность реакции;
для оценки РПГА разработан единый унифицированный днагнс стический критерий в форме индекса специфического изменения титра ан тител (ИСТ);
выявлены закономерности аіпиіелогенеза у больных туберкуле зом. заключающиеся в специфической ингибиции протнвотуберкулезны антител в начальных стадиях и их нарастании в более поздних стадиях:
у больных туберкулезом установлено in vitro повышение усгойчі; вости противотуберкулезных антител к ингибирующему влиянию туберкх лезного антигена:
предложена новая методика определения активности протнвот\ беркулезных антител по эффекту их взаимодействия с туберкулезным антг геном.
Практическая ценность и внедрение. Обоснован новый диагностич< ский подход к оценке титров противотуберкулезных антител В РПГА. ПС вышающий чувствительность и специфичность реакции, и показана во:
можность ранней диагностики туберкулеза на основе опенки титров антител. Разработан единый диагностический критерий РПГА. Установлена возможность ранней диагностики туберкулеза на основе опенки пнгпби-рутошего влияния туберкулезною антигена на противотуберкулезные антитела. Метод внедрен в работу лаборатории отдела эпидемиологического надзора за ириродно-очаговыми и особо опасными инфекциями центра юссанэпиднадзора в Пермской области.
Основные положения, выносимые на защиту.
!. Новый диагностический подход к определению титров противотуберкулезных антител в РПГА по соотношению титров специфических и неспеинфических антител.
2. Два варианта формирования РИГА при туберкулезе - специфиче
ское снижение титров в начальных стадиях її их увеличение в более поздние
сроки.
3. Использование унифицированною диагностического критерия
РИГА для оценки активности туберкулезного процесса.
4. Эффект повышения устойчивости противотуберкулезных антител
к ингибирутощему влиянию антигена у больных туберкулезом и возмож
ность применения этого теста для диагностики туберкулеза.
Апробация работы. Работа выполнена на кафедре патологической физиолоыш Пермской і оеударсівенной медицинской академии и является фрагментом комплексной темы: «Разработка новых методов иммунологическою исследования и ранняя иммунологическая диагностика инфекций и деструктивных процессов во внутренних органах» (.4 регистрации 01820080720).
Материалы работы доложены на кафедре патологической фпзиоло-1 ни (1995). на научной сессии ПГМА (1996. 1997 гг.). .Диссертация апробирована на совмесшом заседании кафедр патологической физиологии, микробиологии,'эпидемиологии ПГМА и лаборатории иммунолої ни Ннстигх-га зколопш и генетики микроорганизмов УрО РАН.
Публикации. По материалам исследования оіпблпковано 4 работы.
Объем работы. Диссертация изложена на 124 страницы машинописи, состоит из введения, обзора литературы, описання маїерналов и методов исследования, двух глав собсг венных исследований, заключения, выводов н примечания. Библиографический указа і ель включает ссылки на работы 157 оіечествениьіх и 51 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 3 рисунками.