Введение к работе
Актуальность проблемы. За многие годы коммерческого выпуска чумной вакцины хорошо отработана технология её изготовления. Однако современныэ требования к ШБП предусматривают постоянное совершенствование препаратов, направленное на повышение их качества, максимальное упрощение процесса приготовления и снижение себестоимости продукции. При производстве чумной вакцины согласно нормативно-технической документации значительно растянут этап приготовления материала для засева питательной среды при получении больших объемов бакмассы. Для э~ого производят гри пересева производственной культуры на питательных средах (пробирки с агаром Хоттингера, бульон без аэрацк/ и бульон с аэрацией). Вое эти манипуляции занимают 5-6 суток времени. З.И.Коробковой, Л.П.Павловой ( 1964, 1966), А.Ф.Филипповым, Т.И.Анисимочой ( І9Є4 ) была высказана мысль о том, что в качестве посепной культуры мож-ьо использовать лиофилизированные микробные клетки, что существенно может упростить данный этап технологического процесса. Использование третьей генерации посевного материала предполагает не только накопление достаточного числа микробных клеток для засева большого количества питательной среды в АКЫ-Ш или реакторе, но и восстановление всех свойств культуры после анабиоза. В то же время литературные данные показывают, что достаточно одной генерации на искуств»?нкых средах сухих музейных культур, чтобы они приобрели исходные свойств? ( Чернова Э. А. и др., 1969; Печникова И. В. и др., 1987; Калмыкова Л.И. и др., 1937 и др.).
Можно предполагать, что использование сухих посевных культур является вполне разрешимой проблемой. Реализация её требует довольно широкого' круга исследований для наиболее полной характеристики полученного препарата, что естественно нельзя реаить в одной работе.
Учитывая сказанное, уы считали необходимым сосредоточить свое внимание на ещё слабо изученных вопросах.
Анализ литературных данных и нескольких десятков млн доз чумной вакцины, выпущенной в НИШ Кавказа и Закавказья,показал,что способ л/о&ильного высушивания не гарантирует полной стабильности препарата. Несмотря на выпуск его в соответствии с НТД в строго контролируемых условиях, колебания общей и биологической концентраций в
разных сериях было велико, а в. процессе хранения вакцины в регламентируемых температурных условиях отмечалась значительная гибель микробных клеток, достигающая двух и более раз ( Дертеьа И.И. и др., 1964; Анисимова Т.И.t Голубева В.К., 1966; Чернова Э.А., 1967; Тинкер А.И., 1971; Дудукалова Т.Н., 1977; Кузнецова К.А. и др., 1977; Печникова И.З. и др., 1985; Ракитина Е.Л., 1988 и др. ).
В качестве сухого посевного материала необходимо иметь стандартную культуру, длительно сохраняющую единое количество живых микробных клеток, обеспечивающих инокуляцию более или менее равного числа их в питательную среду. Проблема эта сложная, поскольку требует исследования значительного числа параметров, касающихся режимов высушивания, объема суспензии, вида контейнера, газовой среды при укупорке и т.д.
В связи с этим вполне оправдано наряду с наличием сухого посевного материала оставить в НТД использование производственных культур, но изучить возможность применения их первой генерации, а не третьей, как это заложено в документации.
Однако использование первой генерации требует тщательного изучения всех свойств чумной вакцины.
Наряду с указанными вопросами важным является сосредоточить внимание на более глубокой характеристике препарата, полученного из биомассы повторного выращивания. Особенно это касается реакто-генности чумной вакцины, поскольку данное выращивание предусматривает двухэтапный рост культуры, каждый сроком 48-2 часа с частичным удалением продуктов метаболизма за счет импрегнации агара оснобным раствором Хоттингера.
Известно,.что чумная вакцина, приготовленная из биомассы повторного выращивания, безвредна и способ её производства внесён в регламент № 37-8о. Однако данных по реактогенности препарата пока ещё недостаточно.
В своей работе мы использовали поэтапность решения поставленных задач. Всё это и явилось основанием для изучения перечисленных выше вопросов.
Цельработы: отработать наиболее оптимальные условия лиофилизации сухого посевного материала, доказать целесообразность использования первой генерации производственной культуры для приготовления чуиной вакцины из биомасс первичного и особенно повторного выращиваний, а также изучить реактогенность препарата.
Задачи исследования:
I. Изучить возможность отработки оптимальных условий приготов-
ления сухого посевного материала.
-
Апробировать сухой посевной материал в процессе производства чумной вакцины.
-
Доказать возможность использования одной генерации производственной культуры при изготовлении чумной вакцины.
-
Сравнить идентичность опытных сері'й препарата с отраслевым стандартным образцом.
-
Приготовить экспериментально-производственные серии чумной вакцины на базе отдела по приготовлению коммерческого препарата, изучить их качество и получить заключение -ИСК ГИСК км. Л.А. Тара-севича.
6. Утвердить соответствующие изменения к НТД на чумную вакцину. Научная новизна. Современным требованиям научной новизны и практической значимости отвечают результаты исследований по отработке условий приготовления сухого посевного материала.
Впервые изучена возможность использования одной генерации посевного материала для приготовления чумной вакцины, что сокращает сроки производства одной еярии препарата. Это представляет практическую ценность при выпуске вакцины. При отсутствии сухой посевной культуры можно пользоваться субкультурой одной генерации, что дает выигрыш во времени, равный 4 суткам.
Показано на основании критериев оценки реактогеннссти чумной вакцины по величине П-ОКС, феномену бляшкообразования,показателям лейкоцитов, сиаловых кислот, % -липопротеидос, соотношению белковых фракций, что реактогенность препарата, приготовленного из биомассы повторного выращивглия идентична отраслеьоиу стандартному образцу.
Полученные результаты могут быть использованы в качестве положительного примера в процессе производства других профилактических препаратов.
Практическая ценность
-
Приготовленные экспериментально-производственные серии чумной вакцины с использованием одной генерации и сухой посевной культуры получили положительное заключение ЛСК ГИСК им. Л.А. їарасевича.
-
На основании результатов исследований оформлены изменения
№ 2 к РП № 37 - 86 на использование одной генерации посевной культуры, согласованные с директором ГИСК им. Л.А. Тарасевича и утвержденные директором НШІИ Кавказа и Закавказья 26 ноября 1990 г.
Срок введения изменений в действие с I января 1991 г.
-
В ШЛИ Кавказа и Закавказья осуществляется коммерческий выпуск чумной вакцины ЕВ с использованием одной генерации производственной культуры.
-
Данные исследований вошли в инструкцию по приготовлению
к контролю вакцины чумной комбинированной су?:ой, утверждедную директором НЖ1И Кавказа и Закавказья IB июня 1990 г.
5. Получено авторское свидетельство № 1598653 от «J июня 1990г.
"Способ определения степени повреждения бактериальных клеток".
Апробация работы: материалы диссертации доложе-ьы и обсуждены на:
-
5 краевой научно-практической конференции, посвященной 50-летию противочумной службы Кавказа ( Ставрополь, сентябрь 1985г.'
-
6 краевой научной конференции, посвященной VO-летию Великой Октябрьской социалистической революции ( Ставрополь, декабрь
,1987 г.)..
-
Межведомственной конференции "Актуальные вопросы вакцин"о-профилакгики особо опасных инфекций" ( Киров, март IS9I р.).
-
Межлабораторной конференции научно-исследовательского противочумного института Кавказа и Закавказья ( Ставрополь, 1991 г.).
Публикации: основное содержание работы отражено в 3 опубликованных статьях.
Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы. Работа иллюстрирована 38 таблицами, б рисунками и 5 Фотографиями. Библиографические указатель содержит 279 литературных источников, в том числе 266 работ отечественных и 12 зарубежных авторов.
Полокенит, выносимые на защиту:
-
Отработка условий приготовления сухого посевного материала.
-
Необходимость использования и. результаты исследований по применению одной генерациу производственной культуры при изготовлении чумной вакцины.
-
Материалы по изучению реактогенности чумной вакцины повторного выращиван/АЯ.