Введение к работе
Актуальность темы диссертации.
Проблема внутрибольничных инфекций, вызываемых различными видами патогенной и условно-патогэкнсй микрофлоры, не теряет своей актуальности, так как уровень заболеваемости ими остается высоким (А. П. Красильниксз, 1996; А.А. Кукулянский 1996; М.И. Рим-жа 1996). В родовспомогательных учреждениях чаще всего этиологическим фактором являются микроорганизмы рода Staphylococcus (В.Д. Беляков. Р.Х. Яфаев, 1989; В. И. Покровский 1993; М.И.Римжа 1994). Высокая социальная значимость внутрибольничных инфекций (ВБИ), а также отсутствие надежных методов тигшрования стафилококков, требует дальнейшего изучения этой проблемы в целом, и. в частности, разработки и применения новых более эффективных методов эпидемиологического маркирования стафилококков.
В последнее десятилетие раскрыты молекулярно-генетические механизмы жизнедеятельности микробных клеток, получены материалы о гетерогенности микробной популяции, обоснована концепция саморегуляции паразитарных систем, вскрывшая сущность внутренних механизмов регуляции эпидемического процесса.
Сейчас на основе этих новых представлений закономерно встает вопрос о совершенствовании методов типирования в системе эпидемиологического надзора за ВБИ.Сравнительная оценка полезности и эффективности типирующих систем и методов основывается на трех главных критериях: дискриминантность. воспроизводимость, область применения (P. Huter. М. Gaston. 1988; H.J. Struelens. 1992).
В странах СНГ для эпидемиологического типирования стафилококков используются методы фаготипирования и определения антибио-тикограммы. На сегодняшний день эти методы не удовлетворяют требованиям практического здравоохранения: они недостаточно стандартизованы для повседневной эпидемиологической практики, часто дают ошибочные плохо воспроизводимые результаты, что снижает чувствительность типирующих систем (В.Д. Беляков. 1990; Г.К. Дегтева 1990). Вместе с тем в настоящее время существует возможность расширить систему типирования стафилококков за счет более детальной характеристики антибиотикорезистентности на биохимическом уровне.
Одним из главных и наиболее распространенных факторов резистентности микроорганизмов к широко применяемым антибиотикам (бета--лактамам) является синтез ферментов бета-лактамаз. гидролизирую-щнх бета-лактамное ядро пенициллинов и цефалоспориков с образова-
- г -
нием лишенных антибактериальной активности дериватов. Вместе с тем существует и другой тип резистентности к бета-лактамным антибиотикам, который не связан с продукцией микроорганизмами бета-лак-тамаз, а обусловлен структурной модификацией белков, связывающих бета-лактамы, изменением проницаемости стенки микробной клетки, образованием слизи и другими причинами неферментного характера (Т. Sawal. 1982; G. Broks,1988).
Широкое распространение бета-лактамаз, общность их синтеза и кинетики у грамположительных бактерий, видовые и штаммовые различия продуцирования данных ферментов - все это позволяет использовать синтезируемые микроорганизмами ферменты как эпидемиологически значимый маркер штамма и разработать, адаптированный к практическим целям, метод маркирования стафилококков по механизму резистентности к бета-лактамным антибиотикам и типу бета-лактамаз.
Связь работы с научными программами.
Работа выполнена на кафедре эпидемиологии и микробиологии Белорусского государственного института усовершенствования врачей (БелГИУВ) и являлась частью научных исследований по теме отраслевой научно-технической программы Министерства здравоохранения СССР в области медицины С-23 "Разработать и внедрить в практику здравоохранения эффективные меры борьбы и профилактики внутрибольничных инфекций и сепсиса"(N госрегистрации 01.9.10.043507),запланированной кафедрой эпидемиологии и микробиологии БелГИУВ на 1991-1995 г.
Цель и задачи исследования.
Цель настоящей работы - усовершенствование системы титрования стафилококков путем определения механизма резистентности к бета-лактамным антибиотикам и типа синтезируемой бета-лактамазы.
Задачи иследования:
-
Дать сравнительную характеристику информативности методов дифференцирования стафилококков, выделенных в различных эпидемиологических условиях родильных домов.
-
Изучить механизм резистентности к бета-лактамным антибиотикам и тип бета-лактамаз у стафилококков с учетом их биотопа.
-
Выявить стабильные эпидемиологические метки внутрибольничных штаммов стафилококков с учетом их видовой принадлежности.
-
Разработать методику дифференциации стафилококков с целью
слежения за циркуляцией эпидемически значимых штаммов и определения вероятного риска внутрибольничной стафилококковой инфекции в акушерском стационаре.
Научная новизна полученных результатов.
Впервые показано, что механизм резистентности к бета-лактамным антибиотикам и тип бета-лактамазы являются сравнительно стабильной меткой позволяющей маркировать все виды стафилококков.
Впервые установлено, что тип бета-лактамаз, синтезируемых стафилококками и механизм выявленной резистентности к бета-лактамным антибиотикам являются прогностическим признаком в отношении вероятности возникновения гнойно-воспалительных заболеваний в акушерском стационаре.
Изучение типа синтезируемых бета-лактамаз у различных групп стафилококков (негоспитальных, госпитальных, эпидемически значимых) позволило впервые разработать эпидемиологическую классификацию бета-лактамаз с учетом степени вероятного риска возникновения внутрибольничной стафилококковой инфекции в акушерском стационаре. Предложен метод позволяющий одновременно определять механизм резистентности (ферментный или неферментный) к бета-лактамным антибиотикам и тип синтезируемых бета-лактамаз, а также определять механизм резистентности у всех видов стафилококков к любому бета-лактамному антибиотику.
Практическая значимость полученных результатов.
Полученные данные позволяют рекомендовать данный метод маркирования стафилококков, в структуре системы эпидемиологического ти-пирования, с целью слежения за циркуляцией стафилококков и своевременного выявления предвестников ухудшения эпидситуации в отношении внутрибольничной стафилококковой инфекции в акушерском стационаре.
Разработанный метод может найти широкое применение в центрах гигиены и эпидемиологии для повышения качества проводимого эпидемиологического надзора за ВБИ. По результатам исследования подготовлены методические рекомендации "Типирование стафилококков по профилю бета-лактамаз в системе эпидемиологического надзора за
внутрибольничной стафилококковой инфекцией", утвержденные Министерством здравоохранения Республики Беларусь 11 июня 1997 года.
Материалы диссертации используются в учебном процессе БелГИУВ на циклах усовершенствования врачей-бактериологов и эпидемиологов и практической работе ряда центров гигиены и эпидемиологии РБ.
Основные положения диссертации, выносимые на защиту.
-
Методика одновременного определения механизма резистентности стафилококков к бета-лактамным антибиотикам (ферментный или неферментный), наличия бета-лактамазы и типа синтезируемого фермента, что невозможно получить другими методами;
-
Механизм резистентности к бета-лактамным антибиотикам и тип синтезируемых бета-лактамаз являются устойчивой эпидемиологической меткой всех видов циркулирующих в акушерском стационаре стафилококков;
-
Одновременное использование резистенстипироваюш по анти-биотикограмме и механизму резистентности к бета-лактамным антибиотикам повышает дискриминантность типирования коагулазоположитель-ных и коагулазоотрицательных стафилококков.
Личный вклад соискателя.
Работа выполнена лично автором на базе кафедры эпидемиологии и микробиологии БелГИУВ. Автору принадлежат организация и проведение экспериментальных исследований, статистическая обработка полученных данных, теоретическое обобщение результатов, выводы и написание работы.
Апробация результатов диссертации.
Результаты исследования и основные положения диссертации доложены и обсуждены:
на заседании Республиканского общества эпидемиологов и микробиологов (сентябрь 1989 г.);
на научно-практической конференции кафедры эпидемиологии ЦОЛИУВ (г.Москва) 30.01.90 г.);
на Республиканской научно-практической конференции "Актуальные проблемы эпидемиологии, диагностики, лечения и профилакти-
ки внутрибольничной инфекции" 1-2.06.95 г.
Опубликованность результатов.
По результатам исследования опубликований 12 научных работ, в т. ч. в рецензируемых журналах 2, в сборниках съездов и научных конференций 10 работ. Разработаны и утверждены МЗ Республики Беларусь методические рекомендации по маркированию стафилококков в системе эпидемиологического надзора за внутрибольничной инфекцией.
Структура и объем диссертации.