Введение к работе
Актуальность проблемы, Менингококковая инфекция (МИ) представляег серьезную проблему для многих стран мира. Пандемия менингококкового менингита (ММ) серогруппы А, зарегистрированная на земном шаре в конце 60-х и начале 70-х годов двадцатого века, была обусловлена вирулентным представителем этой инфекции, появивншмся впервые в Китае, и обозначенным впоследствии как «клон Ш-І» группой исследователей из института Молекулярной Генетики им. М. Планка в Берлине.
В настоящий момент этот клон-Ш серотипа А как возбудитель МИ снова активизировался : обнаруженный в 1980-е годы в Непале и Китае, сн был занесен мусульманскими паломниками в Мекку, после чего стал причиной вспышек инфекции на Ближнем Востоке, в Африке, США и Канаде. Особо следует отметить вызванную им недавнюю эпидемию в Нигерии, где в 1995 году заболеваемость ММ составила 350/100000.
Проблема заноса МИ в сьязн с миграцией паломников имеет конкретный интерес для России не только потому, что в ней проживает много мусульман, но и в связи с тем, что Российская Федерация (РФ) является центром буддизма, а верующие этой конфессии совершают длительные переходы в Тибет, Лхасу. В перибд подъема МИ в конце 70-х годов от 80-95 % больных из региона Бурятии выделялись менингококки серогруппы А, которые продолжают доминировать в этиологии генерализованных форм МИ в этой автономии.РФ и до настоящего времени, при некотором увеличении числа числа заболеваний, обусловленных возбудителями серогрупп В и С.
В свете изложенного особую актуальность приобретает вопрос о і ex диагностических системах, которые используются для уточнения клиннко-бактериологического диагноза МИ и для выявления уровня коллективного иммунитета к МИ как до проведения активной профилактики, так и после применения вакцинных препаратов по эпндпбказаниям. Именно в этих последних случаях возникает потребность в диагностических тест-системах, пригодных для массового использования в полевых условиях, а опыт отечественной и зарубежной практики свидетельствует о приоритете, принадлежащем в этом случае латексным диагностикумам.
Простота реакции латекс-агглютинации (РЛА) с антигенными диагностикумами при скрининговых обследованиях больших коллективов позволяет быстро и без существенных затрат установить тех, кто благодаря высокому уровню противоменингококковых антител «защищен» от МИ и не подлежит вакцинации. Эта же тесг-система позволяет выявить едзигн, а также подтверждать серологический диагноз МИ по нарастанию циркулирующих аитнтгл
-2-в сыворотках больных с клинической симптоматикой ММ.
Одновременно при подобного рода исследованиях выявляются группы риска, т.е. группы люд**й, в сьшороткдх которых или нет противоменингококковых антител, или же титр последних столь незначителен, что такие лица могут стать как носителями Neisseria meningitidis, так и экологической нишей для интенсивного размножения- патогенных менингококков, т.е. говоря иными словами, заболеть геи алнзованной формой (ГФ) эпидемического ММ.
Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось конструирование антигенной тест-системы для индикации антител к капсульным полисахаридам (КП) менингококков на основе полимерных микросфер (латексов). .
При достижении этой цели последовательно решались следующие задачи, і. Проводился подбор партий микросфер для приготовления латексных диагностикумов (в этой части исследований мы ориентировались на материалы, полученные Яшиной Н.В. (1997) при создании антигенных кншечно-иерсиниозного и бруцеллезного латексных диагностикумов).
-
Отрабатывались методы иммобилизации КП менингококка на полимерных микросферах, осуществлялась оценка чувствительности, стабильности полученных серий иммунохимических латексных тест-систем (ТС) в сравнении с аналогичной антигенной ТС для реакции пассивной геммагглютинации (РПГА).
-
Оценивались возможности новых ТС при определении уровня антител у здоровых людей, у люден, привитых менингококковыми вакцинами, а также в сыворотках больных при динамическом наблюдении за течением ММ.
Научная новизна. Впервые разработан метод получения ТС для индикации антител к КП менингококков на полимерных микро-. сферах с реакцнонноспособными эпоксидными группами. Применение таких модифицированных полимерных суспензий позволило связать молекулы бнолиганда за счет образования ковалентной связи, обеспечивающей необратимую фиксацию на поверхности частиц и получить стабильные и высокочувствительные ТС для диагностики ММ.
Практическая значимость. Разработаны антигенные ТС для серологической диагностики ММ, вызванного возбудителями серогрунп А, В, С, X, У и Z на основе окрашенных частиц
полистирольнык суспензий, химический состав, структура и размер частиц которых позволил «привязать» к ним и удержать очищенные КП менингококков с последующей возможностью использования полученных ТС для выявления указанных антимикробных антител в сыворотках людей и экспериментальных животных . для диагностических, прогностических и экспериментальных целей.
Положения выносимые на защиту:
і. Разработана ТС на основе полимерных микросфер (лагексов) для
индикации1 противоменннгококковых антител серогрупповой
принадлежности.
-
Латексная ТС при выявлении серогрупповых противоменннгококковых антител в РЛА обладает высокой специфичностью и чувствительностью, превышая по этим показателям РИГА с коммерческими эритроцитарными диапюстикумамн.
-
ТС за счет простоты постановки РЛА, высокой воспроизводимости и быстроты оценки результатов титрования пригодна для проведения скрй'нинговых обследований широких контингентов людей при эпидемическом неблагополучии, обусловленном MM, п целях выявления круга лиц, подлежащих прививкам менингококковыми вакцинами.
-
РЛА может быть использована для уточнения серологического диагноза ММ: почти у 80% больных МИ на 7-Ю день болезни в сыворотках обнаруживаются в диагностическом титре сероіруп-повые антитела, причем практически у 90% больных в динамике болезни отмечается положительная сероконверсия. При исследовании сывороток больных с клиническим диагнозом ММ, но без лабораторного уточнения диагноза, у 77-100% больных удается в РЛА установить серогруппу возбудителя менингита.
-
Практическое здравоохранение получает дополнительный серологический метод выявления серогруппы возбудителя МИ и простой тест для массовой оценки уровня коллективного протнвоменингокок-кового иммунитета, столь необходимый противоэпидемическим службам для принятия решений о профилактических прививках против возбудителя МИ установленной серогруппы.
Апробация работы. По ходу выполнения исследования результаты представлялись для обсуждения на научно-практических конференциях НПО «Биомедицинские технологии», в 1995, 1996, 1997 гг, на научно-практической конференции молодых ученых медицинского факультета РУДН, на международной конференции «Ломоносов-96» в
..4-МГУ, на . 1-ой Национальной конференции Российской Ассоциации аллергологов и клинических иммунологов в 1997 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы, перечень коюрых представлен в конце автореферата.
Объем и структура работы. Диссертация изложена на стр. машинописною текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения экспериментальных исследований, выводов и библиографического указателя, включающего источников. Работа проиллюстрирована рисунками н таблицами.