Введение к работе
Актуальность проблемы. Эпидемиологическая обстановка по холере в мире сложная и требует постоянной противоэпидемической готовности медицинской службы (Мединский Г.М., Наркевич МИ., Сергиев В.П., Адамов А.К., 1989; Марамович А.С., Пинигин А.Ф., 1992; Подосинникова Л.С., Воронежская Л.Г., Лобанова Л.И. с соавт., 1992; Онищенко Г.Г., Ломов Ю.М., Мединский Г.М., 1994; Ломов Ю.М., Москвитина Э.А., Варивода А.Г., 1994; Ломов Ю.М., Москвитина Э.А., Подосинникова Л.С.,1997; Ломов Ю.М., Москвитина Э.А.,1998; Онищенко ГГ., 1999; Ломов Ю.М., Москвитина Э.А., Подосинникова Л.С. с соавт., 1999; Омариева Э.Я., Чернышев С.Н., Кадиев Ш.З. с соавт., 1999; Савельев В.Н., Грижебовский Г.М., Курбанов Ш.Х., 1999). Опыт профилактики холеры, накопленный в течение седьмой пандемии показал, что успех борьбы с холерой определяется своевременной и достоверной диагностикой вирулентности выделенных холерных вибрионов.
Ведущим тестом оценки вирулентности холерных вибрионов в практических лабораториях является комплексный пробирочный метод А.К. Адамова - Н.Ф. Быстрого (Адамов А.К., Быстрый Н.Ф. с соавт., 1971; Адамов А.К., Наумшина М.С., 1984; Ведьмина Е.А. с соавт., 1984). Применение этого метода в течение многих лет показало его высокую эффективность и надежность. При сопоставлении комплексного метода с экспериментами на лабораторных животных расхождение в оценке вирулентности культур двумя методами не превышало 1,5 % (Кюрегян А.А., Огнева Н.С. с соавт., 1988). С девяностых годов на Украине начали обнаруживаться штаммы холерных вибрионов, частично или полностью резистентные к литическому действию бактериофагов эльтор и ХДФ. А с 1993 года такие же штаммы появились и на территории Дагестана (Кудрякова Г.А., Македонова Л.Д. с соавт., 1991; Казакова Е.С., Лукьянова О.И. с соавт., 1994; Казакова Е.С., Абрамова Е.Г., 1995).
В связи с этим возникла потребность в более глубоком изучении свойств выделенных культур, оценки информативности различных методов дифференциации вирулентных и авирулентных штаммов, предложенных в последние годы: методов генного зондирования, реакций лизиса специфи-
ческими фагами ctx+ и ctx'; биологических методов определения вирулентности на крольчатах-сосунках по Датта и Хаббу и на лапках белых мышей по Дурихину и Поповой, а также необходимости выбора наиболее эффективного из них для использования в практических лабораториях.
Цель работы заключалась в сравнительном исследовании эффективности различных методов дифференциации вирулентных штаммов холерных вибрионов и усовершенствовании некоторых из этих методов.
Для достижения цели работы были поставлены следующие задачи:
-
Изучить биологические свойства штаммов холерных вибрионов, выделенных на территории Дагестана в 1993 -1998 годах.
-
Оценить эпидемическое значение штаммов, выделенных в Дагестане, с помощью различных методов определения вирулентных свойств холерных вибрионов.
-
Исследовать изменение чувствительности холерных вибрионов к бактериофагам, свежевыделенных из организма больных людей, и хранившихся разные сроки на питательных средах.
-
Изучить влияние некоторых биологически активных веществ на фаголизабельность холерных вибрионов.
-
Провести сравнительную оценку разных методов дифференциации вирулентных и авирулентных холерных вибрионов.
Научная новизна. В результате проведенных исследований получены данные о биологических свойствах и особенностях 1259 штаммов холерных вибрионов, выделенных на территории Дагестана за период с 1993 по 1998 годы, и дана оценка вирулентности этих штаммов разными методами определения вирулентных свойств холерных вибрионов.
Изучена динамика фагочувствительности штаммов холерных вибрионов, свежевыделенных из организма больных холерой людей, и хранившихся на питательных средах. Впервые изучено влияние биологически активных веществ на фаголизабельность атипичных по этому признаку штаммов холерных вибрионов.
Впервые проведены сравнительные испытания эффективности разных методов определения вирулентности: комплексного метода, с помощью фа-
гов ctx+ и ctx", ПЦР, а также биопроб на крольчатах-сосунках и беспородных белых мышах.
Научно-практическая ценность. Для надежного определения вирулентности холерных вибрионов предложено сочетанное применение комплексного метода и фагов ctx+ и ctx'. Разработаны «Методические рекомендации по оценке вирулентности холерных вибрионов комплексным методом» с учетом специфики выделяемых на территории республики Дагестан холерных вибрионов, одобренные научно - практическим советом Дагестанской ПЧС и утвержденные начальником Дагестанской ПЧС и Главным Санитарным врачом по Республике Дагестан. Разработаны «Методические рекомендации по усовершенствованию питательных сред для постановки пробы с холерными диагностическими фагами», утвержденные начальником Дагестанской ПЧС.
Предложенные методы внедрены в работу баклабораторий Дагестанской противочумной станции, Кизлярского и Буденовского противочумных отделений.
Впервые в практических условиях проведено испытание активности и специфичности новых диагностических препаратов холерных фагов ctx+ и ctx". Метод идентификации и дифференциации эпидемически опасных и эпидемически неопасных холерных вибрионов биовара эльтор при помощи диагностических холерных бактериофагов ctx+, ctx" и теста на гемолиз, внедрен в практическую работу лаборатории Дагестанской ПЧС.
Внедрен в практическую работу лабораторий Дагестанской ПЧС и Центра Госсанэпиднадзора в Республике Дагестан метод полимеразной цепной реакции для выявления Vibrio cholerae (ctxA4).
Положения, выносимые на защиту.
-
Модифицированная система идентификации вирулентных штаммов холерных вибрионов по комплексному методу.
-
Использование в комплексном методе идентификации вирулентных штаммов холерных вибрионов теста отека лапок белых мышей вместо теста на крольчатах - сосунках при определении токсигенности штаммов.
3. Рекомендации, составленные по результатам, полученным при сравнительном изучении существующих методов дифференцирования вирулентных и авирулентных штаммов холерных вибрионов.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены:
на научно - производственной конференции Кизлярского противочумного отделения, посвященной 50-летию Кизлярского ПЧО, Кизляр, август 1997 г.
на межлабораторной научной конференции Рос НИПЧИ «Микроб», Саратов, ноябрь, 1997 г.
на научно - производственной конференции Дагестанской противочумной станции, посвященной 45-летию Дагестанской ПЧС, Махачкала, ноябрь, 1997 г.
на научно - практической конференции Дагестанской противочумной станции, март, 1999 г.
на расширенном научно-производственном совещании Дагестанской противочумной станции, Махачкала, март, 2000 г.
Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ.