Введение к работе
Актуальность ww . Вид Aureobaaldium pullulana ислользуїтся в настоящее время в стрянах СНГ, Японии, США кяи продуцент экзогликанов. Ня кафедре микробиологии СІШМ имеется коллекция культур данного видя, в которую включен штамм 8 A. pulluleaa
- продуцент оригинального энзоглюкяня - яубяаидяня: Технология аго
получения была апробирована ня Красноярском зяводе медирепярятов,
где впоследствии был создан ОПР ня получение данного полисахарид*.
Ранее было установлено, что опытные серии яубгзидана, полученные НЯ
КЗШ, а зятем - и ня Ладыжинском бисфармаиевтическом объединении
"Энзим" отличались друг от друга по ряду показателей, что могло за
висеть от популяционной вариабельности культуры-продуцента, однако
эта проблема оставалась недостаточно исследованной. Данная работа
посвящена изучению спонтанной популяционной изменчивости A. pullu-
lans в в связи с синтезом аубазиданя.
Цель и задачи исследования. Цель рябоїн заключалась в определении закономерностей спонгянной популяционной изменчивости А. раїїиіавв 9
в зависимости от условий, культивирования, я также влияния факторов стабилизирующего отбора.' в отношении наиболее продуктка-ных по экзогликяну вариантов. Конкретные задачи были следующими:
определить подлинность таксономической принадлежности исследуемых культур;
изучить диапазон вариабельности всех культур на разных средах;
оценить стабильность продуцентов при хранении;
изучить экзогликяны, продуцируемые всеми тест-культурями;
отобрать и исследоаять наиболее продуктивные в»рнянтн С ЦЙЛЬО . вырябвтки практических рекомендация.
Научная новизна. В результата исследования установлено, что структура популяций A» pullulani» В ;t ого вариантов з^сыи дин»ыичнк: частот» иомякиопен'лр, различии» члр^ологи,твскчх гипса їі и к йляй^шг*
І -З
.'і»5.'одоЕ достаточно ВЫСОК"» (10 - Ю ).
Вьіяелєня коррелятивная связь между уровнем активности образова
ния экзогликанов отдельными вариантами и их морфолого-культуральны-
ми свойствами'. '
Док*з*ко стябилизирующео действие питательного агара Сабуре не трлько в отношении морфолого-культуряльных, но и физиолого-бко-"имических характеристик A. pullulans 8 и его вариантов.
Покязяно, что эффект стабилизации полисчхаридообрязовяния связям с изменением соотношения клеток рязличных морфологических типов A. pullulans прч замено сусло-агаря на ягар Сябуро.
Установлено, что вариантам A. pallulaao 8 свойственна р-зличная степень стабильности при хранении.
Установлено генетическое единообразие гено?лов исследуемых культур A. pullulans 8 и его вяриянтов с помощью полимераэной цепной реакции с универсальным праймером 45.
Показано, что обряботкя клеток A. pullulans 8 и его вариантов акридиновым оранжевым приводит к стабилизации культур ( зя исключением "белого" варианта) по морфолого-культуряльным признакам , я также к увеличению их способностей к синтезу ЭКЗОГЛИКЯНЯ .
Практическая значимость. Установлено, что использование ягяря Сябуро для получения посевного материаля сопровождается сужением дияпяэоня вяри-бельности культур по образованию окяогликянов и возрастанием частоты вариантов, обладающих большей способностью синтезировать яубяЗИДЯН.
Показано, ч?о для стабилизации на высоком уровне полисахяридо-обрязовяния необходимо, чтобы в процессе ферментации в популяции продуцента преобладали клетки низкопяри«больчых продуктивных типов; ото может быть достигнуто двумя путями: либо использованием ст^били-
РИРУТІЩЄГІ СрОДН СябурО 5ЛП ПОЛурНИ;- ИНОКуЛГСМЯ, Л'.їбО 11СКУППТИРНК1."'
со';Л"Ни?м поаулнциіі-г»ссоцччнтов.
Одним из предпочтительньіхспособов сохранения жизнеспособными продуцентов является их хранение ни скошенном сусло-ягяре при 4-5С в течение годя без пересевов ( до 10 лет - по наблюдению М.И. Прониной).
При сокращенном времени выращивания посевного материала ( от V суток ня сусло-ягяре - по регламенту-, до 2 суток ня ягяре Сябуро -по няшим дянньм) и сокрященной длительности ферментации ( от 120 чясов - по регляменту,- до 96 часов- по дяинш няших экспериментов) можно достичь регламентного выходя экзоглихяня в случив культивиро-вяния продуцентов ня среде Чяпекя-Докся с исходным значением рН 4,0 (вместо 6,2 - 6,4).
При ферментации четцрехсуточных культур продуцентов ня среде Чяпекя-Докся с исходным рН 6,2 - 6,4 ( либо с рН 4,0) в течение 120 чясов удяется достигнуть двухкратного увеличения внг.одя конечного продуктя.
Полученные результаты могут быть использованы для совершенствования биотехнологии яубязидяня в лабораторных и производственных условиях.
Апробация работы. Мятериялы днссертяции были доложены ня Пленарной Сессии микробиологического общества и Научного Совета по проблеме "Микробиология" РАН ня конференции "Микробиология в биотехнологии" (1993) и ня заседаниях сотрудников кафедры микробиологии СПХФИ (1992, 1993, 1994).
Публикяции. Мятериялы диссертации опубликованы в трех статьях в журнялпх "Микробиология" РАН, "Микология и фитолитохогия" РАН.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из вьедения, обзора литературы, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов и библкогряфии. Рабат* изложена ня страннцпк, содержит ?-Q таблиц, <Р. рисунков. Список циїїігуеі'сп л№їрітур« включает''..