Введение к работе
Актуальность проблемы. Среди актуальных проблем противозпидеми-зкого обеспечения населения дизентерия устойчиво сохраняет одно из иболее значимых мест.
Ведущее значение в профилактике дизентерии отводится санитар--гигиеническим мероприятиям противоэпидемической направленности. Од-т, с целью предупреждения заболеваемости среди отдельных групп каления, а также некоторых организованных коллективов,известную пользу гут оказать препараты для специфической профилактики.
По линии, выполняемой ВОЗ программы борьбы с диарейными заболе-зиями, осуществляется поддержка и стимулирование исследований, наце-яных на разработку и оценку вакцин против острых килечных инфекции в частности, против дизентерии. Принятое ранее решение сконцентри-зать внимание на медицинских и санитарно-гигиенических мерах по эьбе с шигеллезами оказалось недостаточно эффективна (Гад. BG3. Же-эа, 1986, 1991). Появление штаммов шигелл, устойчивых к широко ис-яьзуемым антибиотикам, быстрое распространение устойчивости к новым гимикробным препаратам, а также трудности практической реализации іитарно-гигиенических мероприятий постоянно сткмулирупт научный по-t средств и методов специфической профилактики дизентерии (Полоцкий Ї. с соавт., 1992, Сергеев В.В. с соавт.. 1989, Black R.E. et al, 37, Lindbergh A.A. et al, 1988) .
Обобщенные данные об этиологической структуре тигеллезов-в нашей эане свидетельствуют о преобладании возбудителей Shigella sonnet )7.) и Shigella Пехпегі (30-35%) (Солодовников Ю. П.. 1992).
Среди возбудителей дизентерии Флекснера наиболее широко распрсст-шны подсероварианты la, lb, 2а и 6-й серовариант (Солодовников I., 1989, 1992). Большинство крупных экономико-географических регис-s РФ характеризуются преобладанием во внутривидовом пейзаже -
S.Пехпегі la, lb и 2a. Сумма указанных подсеровариантов определ практически всю заболеваемость коллективов риска. 6 серовариант пр мужественно встречается на территориях, где дизентерия Флекснера ут тила доминирующие позиции.
Учитывая это обстоятельство, а также принимая во внимание п пецифичность иммунитета при дизентерии Флекснера, что еще раз с убедите »>но показано в полевых испытаниях шигеллезной моновакщ состоящей из антигенных комплексов S. Пехпегі 2а, проводившихся в і кольких крупных регионах бывшего СССР (Холодный П.М., 1986), к< вакицна не снижала заболеваемости, вызванной другими вариантами гелл, в числе которых идентифицироывались преимущественно подсеров< анты 1а и lb, была сформулирована цель настоящего исследования - ( дать и изучить поливакцину из антигенных комплексов S. Пехпегі la, и 2а.
Для достижения поставленной цели необходимо было решить следую! задачи:
-
Разработать технологию получения биомассы вакцинных штаї S.Пехпегі la, lb и 2а с использованием метода полунепоерывного к тивирования микроорганизмов.
-
Сравнить продуктивность методов глубинного культивиров вакцинных штаммов S.flexnerl.
-
Дать характеристику качества антигенов, полученных из биом вакцинных штаммов шигелл с помощью разработанной технологии куль рования.
-
Приготовить габлетированную поливакцину, состоящую из рас римых антигенных комплексов S.flexnerl la, lb, 2а.
5. Изучить безвредность, иммунологическую и протективную ак
ность, стабильность при хранении поливакцины в лабораторных услови
6. Изучить безвредность, реактогекность, иммунологическую актиз-лъ и профилактическую эффективность поливакцины на ограниченном ітингенте добровольцев. Научная новизна.
Создана пероральная поливакцина из антигенных комплексов S.Tlex-rt la, 1в и 2а, извлеченных путем дезинтеграции бактериальных клеток лянокислым гидроксиламином с последующей очисткой и таОлетироЕанием.
Впервые показана возможность получения комбинированного препарата я профилактики дизентерии Флекснера, состоящего из белково-ЛПС комл-ксов шигелл с учетом преобладающи в распространении серовариантов збудителя.
Для получения биомассы вакцинных штаммов S.tlexncrl la, їв и 2а зраОотана новая технология с использованием метода полунепрерывного у льтивирования микроорганизмов в ферментере АНКУМ-2А (Пудаю) , раСо-м объемом 20 литров.
Показаны преимущества новой технологии культивирования. Продук-;вность полунепрерывного культивирования вакцинных стаммов S.flexne-, рассчитанная по суммарном-/ выходу антигена из одного миллиарда «териальных клеток, была в несколько раз больше, чем продуктивность адиционного культивирования в реакторе. Антигены, полученные из био-юсы вакцинных штаммов шигелл,характеризовались более высокой иммуно-юлогической активностью.
Впервые дана комплексная оценка качества антигенных комплексов, юдящих в состав шигеллезной поливакцины. Установлено, что совместное іблетирование антигенных комплексов S.flexnerl \а, lb, 2а не оказыва-: отрицательного влияния на качество и активность кдхдого антигена в сдельности.
Впервые показано, что пероральная пигеллезная поливакцина из ан-
тигенных комплексов S.rlexneri la, lb и 2a является практически ар< тогенным и безвредным препаратом, а также обладает высокой иммунолс ческой активностью и профилактической эффективностью.
Практическая значимость работы.
Разработана новая высокопродуктивная технология получения био» сы вакцинных штаммов S.flexneri la, lb, и 2а, которая позволяет ш чить достаточное количество антигена с высокой иммунобиологической тивностью при использовании одной посевной дозы.
Утвержден экспериментально - производственный регламент (ЭЛЯ технологию получения пероральной дизентерийной поливакцины Олексі Комитетом МИШ (пр. N10 От 19.07.90 г.)
Шигеллезная поливакцина предназначена для специфической профи. тики дизентерии Флекснера в регионах, где сохраняют широкое распрі ранение подсероварианты S.t'leKnerl la, lb и 2а, а также в отдел: организованных коллективах, в которых доминирующую роль в заОоле мости играют те же варианты возбудителя.
Поливакцина характеризуется технологичностью процесса изгото ния, стандартностью больших серий препарата, устойчивостью при хр нии и практическим отсутствием противопоказанием к применению.
В зависимости от внутривидового пейзажа возбудителей дизент Флекснера на территории предполагаемого применения препарата, поте алько возможен пересмотр набора компонентов поливакцины.
.Результаты проведенного исследования показывают целесообразн проведения дальнейшего испытания шигеллезной поливакцины на расши кых контингентах в строго контролируемом эпидемиологическом опыте.
Положения, выносимые на защиту.
- разработана новая технология получения биомассы вакцинных и мов S.flexneri la, lb и 2д, которая позволяет увеличить суммарный
ход антигена из биомассы, а также получить антигены с большей иммунобиологической активностью.
создана пероральная поливакцина из растворимых антигенных комплексов S.flexnerl la, lb и 2а, извлеченных путем дезинтеграции бактериальных клеток солянокислым гидроксиламином.
поливакцина в испытанных дозах является практически ареактоген-ным и безвредным препаратом, а также обладает высокой иммунологической активностью и профилактической эффективностью.
Апробация работу.
Результаты исследований, представленные в данной работе, доложены на конференции отдела вакцин и заседании Ученого совета НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН, а также на совместной научной конференции кафедры эпидемиологии, кафедры микробиологии и лаборатории молекулярной эпидемиологии ММА им.И.М. Сеченова от 22 ноября 1995 г.
Структура и объем работы.
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, пяти глав собственных исследований, іаключения, выводов и библиографического указателя. Содержание диссер-'адаи иллюстрировано 8 рисунками и 18 таблицами. Список литературы со-іержит 232 источника.