Введение к работе
Актуальность проблемы.
Острые желудочно-кишечные инфекции занимают одно из ведущих мест в структуре инфекционной заболеваемости, а в отдельные годы, опережая грипп и острые респираторные инфекции, выходят на первое место. Среди них значительный удельный вес принадлежит острой дизентерии (Покровский В.И.и др., 1979, 1994; Наркевич М.И. и др., 1989; Солодовников Ю.П., 1989, 1990 и др.). До сих пор регистрируются случаи одновременного заболевания дизентерией от нескольких десятков до нескольких сот и тысяч человек. Среди факторов, неблагоприятно влияющих на эффективность профилактических мероприятий по борьбе с дизентерией, одним из основных является отсутствие метода надежной и быстрой диагностики, этой инфекции (Абдурахманова Э.Г.с соавт., 1984; Покровский В.И., Ющук Н.Д., 1994). Распространенные в настоящее время бактериологический и серологический методы диагностики не могут Быть использованы для быстрого и эффективного лабораторного контроля (Нуркина Н.М., Каральник Б.В., 1983; Трясучев И.О. с соавт., 1989). В связи с этим остается актуальным совершенствование существующих и поиск новых высокочувствительных, достаточно специфичных, простых в выполнении, доступных широкому кругу исследователей экспрессных методов лабораторного анализа дизентерии (Пак С.Г.с соавт., 1989).
Особое место среди экспрессных методов диагностики инфекционных заболеваний принадлежит иммуносорбционным методам (Шахани-на К.Л.с соавт., 1969; Сербезов А.В. и др. 1973; Закревский В.И., 1980; Шимко Т.А., Леви М.Н., 1990 и др.). Значительные преимущества экспрессных методов перед общепринятыми методами появились с началом использования сорбентов с магнитными свойствами, которые используются в качестве твердой фазы для селективного концентрирования на их поверхности различных антигенов и микроорганизмов (Пушкарь В.Г., Ефременко В.И., Климова И.М. и др., 1985; Smith К.О., 1977; Lea T.et al., 1985). Широкий диапазон объемов исследуемых проб (от нескольких сот микролитров до многих кубических метров жидкостей), возможность исследования сильно загрязненных объектов позволяют проводить более качест-
венную диагностику инфекционных заболеваний, а также значительно расширяют возможность мониторинга внешней среды на наличие различных инфекционных агентов.
Разработка медико-иммунобиологических препаратов (МИБП) на основе магносорбентов для экспресс-диагностики дизентерии является актуальной и проводится впервые.
Цель и основные задачи исследования.
Цель работы - совершенствование экспрессных методов лабораторной диагностики дизентерии.
Для достижения указанной цели предполагалось решить следующие задачи:
выявить эпидемиологически значимые виды возбудителей дизентерии для Ставропольского края на основе анализа заболеваемости за 1986-1995 гг.;
оптимизировать условия наиболее полного извлечения водорастворимых антигенных комплексов шигелл;
получить высокоактивную, специфичную полигрупповую дизентерийную иммунную сыворотку;
на основе иммуноглобулинов из полигрупповой иммунной сыворотки изготовить экспериментально-производственные серии дизентерийных люминесцирующих и иммуноферментных конъюгатов;
сконструировать дизентерийный магноиммуносорбентный диаг-ностикум на основе органокремнеземного сорбента;
проверти лабораторные и полевые испытания тест-системы полигрупповой дизентерийной диагностической магноиммуносорбент-ной для ИФА и РИФ.
Научная новизна работы:
проведенный анализ эпидситуации по дизентерии в Ставропольском крае выявил тенденцию к многолетнему подъему заболеваемости „этиологически обусловленной видами Флекснера и Зонне, начиная с 1993 года, с преобладанием водного и пищевого путей передачи инфекции;
разработаны научно-методические подходы к получению полигрупповой адсорбированной гипериммунной дизентерийной сыворотки, используемой для производства различных диагностических им-
мунобиологических препаратов;
получены высокоактивные и специфичные иммуноферментные и иммунофлуоресцентные полигрупповые конъюгаты, дающие возможность выявлять все виды, типы и подтипы возбудителей дизентерии;
впервые разработан дизентерийный полигрупповой магноимму-носорбентный диагностикум на основе кремнеземноорганической матрицы;
Практическая ценность работы:
на основе новых биотехнологичных органокремнеземных маг-ноиммуносорбентов сконструирована тест-система диагностическая полигрупповая для экспресс-диагностики возбудителей дизентерии в иммунофлуоресцентном и иммуноферментном анализах;
оформлены методические рекомендации "Использование магно-иммуносорбентов в иммунологических методах выявления корпускулярных и водорастворимых антигенов возбудителей инфекционных заболеваний (бактериологический, иммуноферментный, иммунофлуоресцент-ный", одобренные Ученым Советом СтавНИПЧИ и утвержденные директором института (протокол N 10 от 23.12.1994); "Приготовление органокремнеземных магносорбентов с иммобилизованными лигандами белковой природы (иммуноглобулины, антигены, ферменты)", утвержденные Госкомсанэпиднадзором РФ 15 мая 1996 г.
Сконструированная дизентерийная диагностическая полигрупповая магноиммуносорбентная тест-система успешно апробирована в лабораторных и полевых условиях (акты о внедрении от 02.02.96 г. ЦТКСЭН Карачаево-Чекрессии; от 03.04.96 г. Кисловодского городского центра ГКСЭН; от 15.04.96 г. Кисловодской инфекционной больницы).
Основные положения, выносимые на защиту. Разработаны научно-методические подходы к получению полигрупповой адсорбированной гипериммунной дизентерийной сыворотки, используемой для производства различных МИБП; предложена технология изготовления полигрупповых адсорбированных дизентерийных люминесцирующих, иммуноферментных, магноиммуносорбентных диагностикумов; получена диагностическая полигрупповая магноиммуносорбентная тест-система для экспресс-диагностики возбудителей дизентерии (ИФА и РИФ).
Апробация работы и публикации.
Основные результаты диссертационной работы были доложены и представлены на межгосударственной научно-практической конференции "Актуальные вопросы профилактики чумы и других инфекционных заболеваний", посвященной 100-летию открытия возбудителя чумы (Ставрополь, 1994); научной конференции молодых сотрудников и ассистентов СГМА (апрель, 1994 г.; апрель, 1995); научной конференции Ставропольского отделения Российского научного общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов (Ставрополь, февраль, 1995); межлабораторной научной конференции Ставропольского НИПЧИ (июль, 1995 г.).
Основные результаты диссертации изложены в 6 научных публикациях, 2 методических рекомендациях.
Структура и объем работы.