Введение к работе
Актуальность про Слеш. Удовлетворение потребностей растении в азоте - задача более слояная, чем в случае любого другого минерального элемента» Превде всего это связано с высокой подвижностью соединений азота, особенно при орошении, невозможность» единовременного создания высоких концентраций азота в почве и другие.
В биосфере нашей планеты существует постоянно действующий механизм пополнения связанного азота за с^ет его ассимиляции ю атмосферы микроорганизмами, способными фиксировать молекулярный азот. Они представлены разнообразными морфологическими и таксно-номическши грушами и распространены во всех зонах земного шара -в почвах, во внутренних водоемах, в океане /Іїишустин, 1985/.
Другим истопником пополнения запасов азота в природе и основный элементом питания сельскохозяйственных растений являются минеральные азотные удобрения. Однако чрезмерное увлечение ими имеет ряд негативных и ныне хорошо известных последствий.
Следовательно, аэотфиксация - единственный экологически чистый путь получения связанного азота, при котором принципиально невозможно загрязнение окружающей среды.
В настоящее время наметилось два основных способа усиления азотфкксации в агроэкосистемах: активизация деятельности естественной (спонтанной) популяции азотфиксирующих микроорганизмов в ризосфере и на корнях и инокуляция растений активными и эффективными штамиами аэотфиксаторов /Умаров, 1086/.
Первый путь заключается в оптимизации факторов среда, важнейшими из которых являются: потенциал почвенной влаги, повышение концентрации С02 вокруг растений, подбор видов, линий и сортов растений, обладающих повышенной способностью к активизации аэот-фнксации.
Второй путь предусматривает получение высокоактивных в отношении аэотфиксации штаммов клубеньковых бактерий и других дназо-трофов. Важным аспектом высокоактивной азотфиксации является её энергетическая обеспеченность, из чего следует, что фотосиктетк-ческая продуктивность растений должны быть достаточной для обеспечения эффективной работы нитрогенаэного комплекса. Поэтому отбор растения с экономичным расходом энергии - erne один путь селекции на повышение интенсивности фиксации молекулярного азота.
цр (ТРАЛЬНАЯ
НАУЧІ-ілЛ ЬмГіЛйОТЄКА
і mow. cwv-сиок-з. академии
H.t. К. ^"**9Я?У
Однако общая слабая изученность экологии азотфиксации и отсутствие количествекнюс данных об активности этого процесса в агро-экосистемах не позволяли до последнего времени установить истинную роль микроорганизмов-азотфиксаторов в азотном балансе почв и питании растений и оценить доли биологического азота. Не мог быть решен и принципиально.важный вопрос о возможности управления аэотфик-седиеи в почве. Отсутствуют также данные о роли эндомнкоризных грибов (эидофитов) в усилении процесса азотфиксации.
Проблема микробиологической фиксации азота атмосферы отнесена к числу важнейших в области биологических исследования как у нос в стране, так и за рубежом.
Цель и задачи исследований. Главным направлением исследования было изучение особенностей азотного питания растении при их взаимодействии С ааотфикс прущими микроорганизмами в условиях орошаемого земледелия. Конечной цель» являлась разработка научных основ усиления аэотфиксации в агроэхосистемах за счет активизации естественной популяции аэотфиксируицих микроорганизмов, улучшения комплементарности макро- и микросимбионта и их адаптивности и инокуляция растений активными штаммами азотфиксаторов.
В процессе работы решались следующие задачи:
I) определение наиболее благоприятных условий для развития а активной физиологической деятельности азотфиксируицнх микроорганизмов (увеличение численности аэотфиксируицих микроорганизмов в почве с помощью бактериальных удобрение и подбора агротехнических мероприятий, селекция растений на повышение интенсивности симбио-тической вяотфиксации и др.; 2) изучение влияния микоризообразую-qtoc грибов на активность процесса аэотфиксации; 3) изучение условий образования и функционирования аэотфикс*груицей ассоциации диа-зотрофов со злаковыми культурами.
Научная новизна и практическая ценность работы: - расширены представления о роли аэотфикскрущнх микроорганизмов в повышении продуктивности сельскохозяйственных культур на орошаемых землях юга Украины. Показано, что инокуляция бобовых и злаковых культур аэотфиксирущкми микроорганизмами в системе севооборота, а также правильное использование агротехнических приёмов: обработки почвы, предшествующих культур, применении кміграль-ных удобрений, пестицидов и др. способствует созданию положіггель-
ного баланса азота б почве, а как следствие порышенк» плодородия орошаемых земель;
на примере риса изучены закономерности чередования домини -руюцкх азотфиксиругацих микроорганизмов - аэробны* и анаэробных бактерий, цианобактерий ризосферы риса при выращиваний его бессменно и з севообороте. Экспериментально доказаны существенные различия в количественном и, особенно, качественном составе азотфикси-руюцкх микроорганизмов в ризосфере бессменного посева риса и в севообороте;
показано, что образование тройного симбиоза: бобовые (злаковые} растения - клубеньковые (ассоциатишге) бактерии - эндоми-коризные грибы на орошаемых землих усиливает процесс азотфиксации и как следствие увеличивает урожай сельскохозкяственных растений;
разработана методика позволяйся бол-;е целекаправлено выделять активные и конкурйнтноспособ!1ые по отношения к эпифитам штаммы азотфиксцрующих микроорганизмов, приспособ ленных к ассоциативной с этим видом растения аэстфос&ции, а такле более глубоко и точно изучать взаимоотношения между растениями и диазотрофами в риз эсфере;
выделены штампы диазотрофов, характеризующиеся повышенной аэотфиксирущей активностью, технологичностью и селекционной ценность»;
предложена методика расчета внесения минеральных азот.ч^ос и фосфорных удобрений при скмбкотрофноц питании растений азотом и фосфором)
определена зависимость уровня азотфиксации от комплементар-ности макро- и михросимбионта и их адаптивных свойств. В результате реализации теоретических разработок совместно с селекционерами Всесоюзного селекционно-генетического института получено 3 .сорта сои с повышенной >:нтенсквностьв анабиотической азотфкксации,
кэ которых Одесская 124, Аркадия одесская районированы на юге УССР, а Крепыш находится в государственном сортоиспытании;
разработана технология производства биопрепаратов азотфик-сирущих бактерий риэоагрина, ризоэнтеркна и азсризина. Еыие перечисленные биопрепараты получены и изучены впервые;
показано, что применение ризоагрина, ризоэнтерика, азори-зина н других высокоэффективных штаммов под злаковые культуры
дает прибавку урожая на І0-ЗО&. и часто приводит к увеличению в нем белка. Увеличение белка идет за счет повышения содержания отдельных аминокислот;
- подтверждено, что при функционировании азотфиксирующей ассоциации возможен следующий характер взаимодействия: азотфикса-ция в ризосфере и на корнях растений; образование бактериями и растениями <итогормонов; антагонистическое взаимодействие диаэо-трофов с фитосатОгенами.
Основные положения, которые .выносятся на защиту. В реэулта-те выполения поставленных задач сформулировано 3 взаимосвязанных блока положений, которые выносятся на защиту:
-
Активизация деятельности популяции клубеньковых бактерий с помощью инокуляции бобовых растений эффективными штаммами клубеньковых бактерий;
-
Активизация деятельности естественной популяции ассоциативных азотфиксаторов и инокуляция злаковых растений эффективными штаммами диазотрофов;
-
Способность микоризобразующих грибов (эндофитов) усиливать процесс аэотфиксации.
ЦЕактическвя_ценность_работы. Практическая ценность работы состоит в том, что изучение условий азотного питания растений при их взаимодействии с азотфиксирующими микроорганизмами позволяет реально повысить продуктивность растений и их качество, снизить себестоимость продукции и загрязнение окружающей среды нитратами и нитритами.
Разработаны научные подходы для изучения и создания высокопродуктивных симбиотических и ассоциативных-систем бобовых и злаковых ку~ - о. Показано, что в селекции следует включать сорта, характери:;,. ,;.-.еся высокой азотфихсирущей способностью.
Данные экспериментальных исследований исполы лны при составлении пяти рекомендаций по выращиванию экологически чистой продукции на орошаемых и богарных землях Украины. Использование данных рекомендаций позволило сократить нормы внесения минерального азота на каждом гектаре бобовых и злаковых культур в 1,5 и более раз. При выращивании сои, люцерны, эспарцета на темно-каштановых и черноземных почвах юга Ураинн при орошении рекомендовано использовать только ризоторфии без азотных подкормок.
Разработаны технические условия и регламенты производства биопрепаратов азотфиксируюцих бактерий ризоагрина, ризоэнтерина и азоризина. Только под урожай 1990-91 гг. Сакское производственное предприятие "АГРО", Колпинсхое экспериментально-производственное предприятие Всесоюзного научно-исследовательского института сельскохозяйственно Я кикробиологии, Кузнецкий {Пензенской обл.), Бахчисарайский (Крамская АССР), Мироновский (Киевская обл.) биоцехк випустили их более 300 тыс. га/порций. Несколько эффективных штаммов передано для наработки опытных партий биопрепаратов ассоциативных азотфиксаторов.
А202бауия_2аботы^ Результаты работы рассмотрены и одобрены научно-техническим Советом Главного управления растениеводства Росагропрома Украины (декабрь, 1987 г.), научно-техтг ским Советом секции по земледелию и растениеводству Государственной комиссии Совета Іііинистров СССР по продовольствии и закупкам (май, 1990 г.) и нашли отражение в соответствующих рекомендациях. Эта работа экспонировалась на ВДОС СССР в 1988-1990 гг. и была удостоена друх серебряных медалей.
Основные положения диссертации докладывались на У, УІ, УІІ республиканских конференциях по проблемах аллелопатии, Белая Церковь, 1982; Харьков, 193^; Киев, 1990; Всесоюзно* совещании представителей научных учреждений Географической сети опытов с ризоторфином, Кишинев, 1932; Ленинград, 1936, 1968, 1990; Всесоюзных координационных совещаниях по микоризе, Симферополь, 1933; Чернигов, 1966; УІ, УІІІ Всесоюзных Ваховских коллоквиумах, Киев, 1963, Кобулетти, 1988; Всесоюзном координационном совещании по ассоциативной аэотфкксацки, Ялта, 1984; УІ, УП сьеэдах Украинского микробиологического общества, Донецк, 1934; Черновцы, 1989; Расширенном заседании Межведомственного координационного совещания по проблеме "Биологический азот", Москва, 1985; 1У-м симпозиуме социалистических стран по биотехнологии, Болгария, Варил, I96S; Всесоюзном злектронномикроскопическом методическом семинаре "Ультраструктура ризосферы и ранние морфофункцио-нїльниє иг "нения клеток и тканей", Ленинград, 1931; Республиканских координатдионнмх совецанипх по орооаемог.у земледелию,
Херсон, I9S4-I920; УН еі-езде Всесоюзного микробиологического общества, Алма-Ата, 1985; Шестом конгрессе микробиологов Болгарии, Варна, 1985; ХП-ХХ заседаниях Научно-методическаго совета селек-центра БСГИ, Одесса, I9S6-I990; Всесоюзном координационном совещании по подведению итогов работа в области сельскохозяйственной микробиологии за 1931-65 гг., Ленинград, 1936; Ш Всесоюзной конференции *Микроорганизмы в сельском хозяйстве", Москва, 1986; Всесоюзном координационном совещании "Итоги КИР по сое за XI пятилетку и задачи на 1936-90 гг.", Алма-Ата, І9Р7; Всесоюзной школе-семинаре по биологическому аэсту, Усть-Нарва, 1986; Заседании межведомственной комиссии по селекции азотфиксирущих микроорганизмов, Ленинград, 1987, 1990; Международном симпозиуме "Взаимоотношения между микроорганизмами и растениями в почве", Либица, ЧССР, 1987; Республиканская конференции "Симбиотрсфные азотфиксаторы и их использование в сельском хозяйстве", Чернигов, 1937; Ш Всесоюзной конференции "Роль микроорганизмов а деградации пестицидов и охране окружащей среди", Ленинград, 1987; Научно-техническом Совете Госагропрома УССР и СССР, Кивв, 1937, Мосхва, 1990; Республиканское конференции "Микроорганизмы в сельском хозяйстве", Кишинев; 1963; Отчетных сессиях ШИИСХМ, Ленинград, 1982-1990 гг.
Публикация реаультатов исследований. Основное содержание диссертации опубликовано в 62 работах.
flSfe S4.i^, S?BS'^И. Eft, Jf1??,^* Диссертация изложена на 268 страницах машинописного текста, содержит 67 таблиц, 43 рисунка, приложения» Она состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов и списка литературы, вкЛочаицего 369 работ отечественных и 231 работу зарубежных авторов.
Исследования по изучению эффективности применения ркзоторфи-иа в орошаемых посевах сои, гороха к люцерны проводили на базе Крымского и Полтавского НПО "Элита", Украинского НИИ орошаемого земледелия, Украинского ГОН кормов. Всесоюзного селекционно- генетического института, Ворошиловоградской, Одесской, Донецкой, Николаевской скльскохозяйственных опытньк станциях, а также в отдельных хозяйствах Крамской, Херсонской и Одесской областях. Семена сои обрабатывали риз оторфином, ;ізготовленным на основе штам-
мои 029а, 6346, 040, 048а, гороха отаммами 240, 245а, 250а,d и люцерны 425а, 435а штаммами. В опытах использовали сорта сои районированные на юге Украины - Тереэинская 24, Кировоградская 4, Херсонская 9С8, Ходсон, ВНИК.К 8180, ВНШС 2, Букурия, Белоснежка, Салют 216, Амурская желтая и черная, Харосой, Пагода и другие; гороха - Неосьтад.п,кйея I, Уладовский, Рамонский 77; люцерны - Зайкеви-ча, Херсонская I, Надежда. Изучение эффективности предпосевной инокуляции сои ркзоторфином с выше указанными сортами проводили в основном, поукоснок и пожнивной посевах. Опиты закладавали по единой схеме Географической сети опытов с ризоторфином; без удобрения и г. - фоне доз азота 30-60-120 кг/га, причем все варианты преду смат,,-шали посев бобовых без обработки ризоторфином и с обработкой.
Исследования влияния протравителей ТОТД, фентиурама, фундаэо-ла и фитолавина на симбиоз сои с клубеньковыми бактериями проводили в полевых условиях на базе Крымского КП0 "Злита". Сорт сои Херсонская 908. Семена обрабатывали ризоторфином, изготовленным на основе штамма 6346.
Объектами исследований при изучении влияния климатических факторов и генотипов сортов сои на формирование клубеньков и ИХ нит-рогзназную активность с целья>получения доноров сои с повышенной азс-тф икс прущей активностью были 122 коллекционных сорта сои, созданные в наией стране, США, Канаде, Китае, странах западной и восточной Европы, Опыты проводили на селекционной базе "Дачная" Всесоюзного селекционно-генетического института СВСГИ), В опытах использовали перспективные формы сои, селекции ВСГИі 1/4-80, 25/81, 42/82, 28/82, 15/82, 17/82, 14/82. Предпосевную обработку семян в день высева проводили, ризоторфином, изготовленным на основе штамма 6346.
Исходным материалом для изучения отзывчивости перспективных сортов люцерны на инокуляцию штаммами клубеньковых бактерий служили іатаммм емїоьііш meliloti : CXMI-2I4, СХМЗ, СХМ2, Т798, Т716, Т304, полученные во Всесоюзном НИИ сельскохозяйственной микробиологии (ВНННСХМ), производственный штамм 425а( гибриды люцерны: Надежда, Синская, Корнеотпрысковая, Надежда х Синская, Скн-ская х Надежда, Веселоподолянская х Надежда, Прогресс х Надежда, Прогресс х Веселоподолянская селекции Украинского НИИ орошаемого земледелия {УНШ03Ї.
В вегетационных и лабораторных опытах, проведенных на базе Отдела почвенной микробиология Южной зоны СССР ВНИИСХМ изучали эффективность бобово-риаобвального комплекса сои, используя результаты одновременного определения интенсивности дыхания клубеньков и их нитрогеназной активности.
Объектами исследований при изучении влияния выращивания риса бессменно и в севообороте, а также минерально: и органических удобрении в виде сидератов на состав и нитрогеназкую активность азот-фиксирупцих микроорганизмов в почве ризосферы риса были многолетние опыты Всесоюзного НИИ риса в элитно-семеноводческом хозяйстве "Красное" Красноармейского района Краснодарского края. Схема опытов; I) бессменный посев p-z.ca с 1937 года без удобрений; 2) бес -сменный посев + сидерати (озимая рожь + зимукций горох 300 ц/га); 3) бессменный посев + ^і$оРі20%0» 4^ Рис Б севообороте по пласту люцерны + «бсВДбО*4,
Объектом исследования при изучении влияния поверхностной и зяблевой вспашки и минеральных азотных удобрений в почве ризосферы риса на состав и нитрогенаэнув активность азотфихсирупщих микроорганизмов были многолетние стационарные опыты Украинской НИС риса в Скадовском районе Херсонской области. Схема опытов: I) зяблевая вспашка на 20-22 см без удобрений; 2) зяблевая вспашка + 100 азота в основную обработку; 3) зяблевая вспашка + ЗД5 азота в основную + 25$ по всходам + ZZ% азота в кущение; 4) поверхностная (минимальная) обработка не. 10-12см без удобрений; 5) поверхностная обработка + IOOJ азота в основную обработку; 6) поверхностная обработка + 50? азота в основную обработку + 29 азота по всходам + 23Ї азота в «уценив.
На всех многолетних стационарных полевых опытах исследования проводились в течение 3-5 лет. В таблицах, графиках и рисунках представлены средние данные за годы исследований.
В вегетационных ц деляночных опытах оценивали эффективность инокуляции штаммами ассоциативных микроорганизмов Klebsiella ер. ІОф-УІ, 28ф-Ш, Enterobacter aarogejies ЗСф-УН, Izoepirllluo. braeileae^ 107'и 200, Azospirillum 1іро*гшд Дтт_йі АсЬгошо-bactar єр, Ін-УІІ, Agrobectwiuni rauiobaeter 204, Jtchrooo-bacter ej. 3P-II, Boetoc Є2* 2-У, Hostoc linckla 2Й-І, АлаЬавпа .eollcola- 29-11, AsOEpirillwa угаьііепеа 7a, Clostridium sp. 218 и 250, iaEthctaccti- sp, 202 и других нь рас-
тения проса сорта Мироновское 51, Беселоподолянекое 632 и Саратовское 5, пшеницы - сорта Безостая I, Обркй, Парус, Ильичевка, ярового ячменя сорта Одесский 82 и 100, озимого ячменя сортов Росава и Циклон, риса - сорта Краснодарский 424 и Спальчик. Все вегетационные опыты проводились в 6-12 кратной повторности.
Полевые и производственные испытания по изучения влияния инокуляции Аюьі>ігі1іи;ь braeilfcusa штаммы 107 и 200 на урожай зерна проса проводили на базе стационара Украинского НИИ орошаемого гемледелия, в колхозах им. Близнюка и им, Островского Малькове ко го района Черкасской области (почвы - серые лесные) и в совхозе "Крымский" Сахского района Крымской области (почва - чернозем южный тяжелосуглинистый). Агротехника выращивания проса обычней ДУія этих зон, но без внесения азотных удобрений.
Нолевые и производственные испытания с растениями риса проводили в опытно-показательном совхозе "Пятиозершй" Краеноперекоп-ского района Крымской области на темно-каштановой солонцеватой почве. Испытывали опытные образцы препратов, изготовленных на основе feiternUtet tsi- atrogoji»fi ЗОф-УІІ (риэоэнтерин), ^grobacce-;ii^ r&diObHcttsI- 04 (риэоагрин), АгуїрігІНіш lipofeiiuu Дуі о {аЗОрИЗИн), Clottriaiuci ^itbt&ui'iuiiUiii 250, Moetoo liuokia
2Є-Ї.
Полевые испытания биопрепарата азоризина на основе Ar.lipj—
ferum Д^^_^ с растениями озимого ячменя сорта Росава проводили набаэе Украинского ШСЇ орошаемого земледелия. На базе этого же института проводили испытания биопрепарата ризофлавина на пшенице, изготовленного на основе flavobacterium ь-р.ЗО ( автор штамма Л.Ф.Васюк, ВШІСХМ, Ленинград).
Производственные опыты с ризофлавиноы проводили в совхозах "Гвардейский", "Радуга", "Родниковый", им.Дзержинского Симферопольского района на сортах пшеницы Безостая I и Обрий. Площадь опытного и контрольного поля по 10 га. Минеральные азоткыэ удобрения вносили весной в подкормку відозв не превшапцей 60 кг/га.
В основу микробиологических анализов была положена методика разведения почвенных суспензий с использованием элективных питательных сред (Аристовская с соавт., 1962; Красильников, 1966). Учет общей численности и выделение аэробных аэотфкхсирутацих бактерий проводили на средах Эиби, Доберейнер, Проктора-Вильсона, полужидкой ДАС {Берестецкий с еоавї., 1985; proctor, vtlleoa,
1959; Tariano et al., 1978; bo^uej-, Jiloereiaer, 1982), а также использовали модифицированный метод накопительных культур (Берес-тецкий, 1586).
Азотфиксируицие бактерии p. CloKtriaiuu учитывали методом предельных разведений на дифференцированных средах, рекомендованы* В.Т.Емцевым (I96S), факультативные и облигатные анаэробы различали по методу В. И.Дуды (1976) на картофельио-морковном агаре (КАМ) с нейтральротом (Емцеа, Дзадзамия, 1969)- Для оценки количественного соотношения аэробных и анаэробных микроорганизмов в ризосфере риса по основным фазам развития растений проводили аэробных посев на КМА.
Учет общей численности водорослей и цианобактерий проводили ни агаризсванкой среде 1?б по Громову (Громов, 1965), а аэотфикси-рущих - на этой же среде, но без азота.
Качественный состав микроорганизмов определяли в соответствие с характеристиками приведенными в определителях Н.А.Красильнихова (1949), И.М.Голлербах с соавт. (1953), Берги ( в»rgey, 1957,1974) и А.В.Топачевского и Н.П.Масюк (I9S4), а также работами В.И.Дуды (1973), В.Л.Беликовои (1973), О.А.Килриановой с соавт. (1973), Е.В.Головлева и Л.Ы.ВарышниховоЙ (1978), Е.Н.Кваскикова и Б.Н,Писарчук (I960), Т.А.Калининской С соавт. (1981), P. Hyleinon et al. , (1973), J.Terraad et al. (1978), C.Eodriguei (1982), Ї.Jttllet and H.peldmf * (1984).
Содержание % Г+Ц в ДНК изучаемых штаммов определяли по Мармуру и Доти ( Иаяниг, Doty, 1962). Для адентификации азослирилл и сравнения их со стандартными штаммами использовали пиродитическую масс-слехтрометри» (Кравченко с соавт., 1984).
Поиск оптимального сочетания составных частей питательных сред и других условий культивирования с цель» изучения вопроса получения посевного материала и культивирования штаммов при промышленном проиэводс* в-- биопрепаратов проводили методом математического планирования t киїеримантов (Максимов, Федоров, 1969).
Интенсивность "дыхания" почвы определяли во выделению С02 и поглощение (>2 как непосредственно в почве опытных учатсхов (Лично, 1982), так и манометрическим методом на аппарате Варбурга (Се-мкхатова, Чулаловскал, 1965). Целлюдсзолитическуо активность определяли по распаду льняной ткани в почве при экспозиции 1 мес. (Вострое, Петрова, 1961; Иишустин с соавт., 1970). Активность окис-
лительно-восстановителъных ферментов (каталазы, дегидрогеназы, ло-лифенолоксидазы, перохскдазы) изучали по методике, предложенной А.Ш.Галстяном (1958, 1978). Интенсивность окислительно-восстановительных процессов (ОВП) изучали методом фотобумажной автографии (Востров, Петрова, 1961). Аэотфиксиругаую активность (АА) почвы, корней растений и чистых культур изучали методом ацетиленредукции ( Hardy at ai., І9Є8), а для ризосферы риса а модификаций Ц.Ы.Ума-рова (1976), на газовом хроматографе "Хроц - 5".
Анализ рострегулирующих и ингибирукцих веществ проводили к<-методу Кефели и Турецкой (1964)» а комплекса соединения с индоль-ной группировкой по rfuret at а^ (1980, 1984).
Общий азот в сухом растительном веществе и лиофильковысушенном экстракте водорасворимых корневых выделений растений определяли методом микрокьельдаля (Ермаков, 1987). Крахмал определяли полярографически по Эверсу (Ермаков, І987Ї, амилозу по Воробьеву (1971). Сахара - полумикрометодом в модификации В.А.Араеимовича (Ермаков, 1987). Органические кислоты определяли по методике, описанной в монографии В.Рачинского и Т.Галона (1953). Для определения аминокислотного состава анализируемые образцы подвергали гидролизу с 6н. НСІ в течение 24 час при І05С ііО общепринятой методике (Плешков, 1968). АминокислотныЛ состав образцов определяли на автомат иче о ком анализаторе AAA-88I (ЧССР), серосодер-гащие аминокислоты - в гидролиэатах с предварительной оксидацией надмура-вьшой кислотой. Одновременное определение интенсивности дыхания клубеньков и их нитрогенаэной активности проводили ПО методике разработанной авторами СПатыка, Князев, 1986).
Математическая обработка экспериментальных данных проводилась по руководствам И.Ашмарина, 4.Воробьева (1982) и Б.Доспехова (1985).