Введение к работе
'.'' :."''" .
Актуальность темы. Золотистый стафилококк считается одним из ведущих факторов в клинике гнойно-воспалительных заболеваний человека ( А.К.Акатов, В.С.Зуева. 1983; Е.Н. Левина, 1985). К настоящему времени достаточно полно изучено влияние большинства компонентов стафилококка на развитие и реализацию иммунного' ответа. Но.особое значение имеют поверхностные антигены возбудителя, с которыми макроорганизм сталкивается, в первую очередь. Одной из таких структур является пептидогликан, который представляет собой основной компонент клеточной стенки грамлоложительнух бактерий и обладает широким спектром биологической активности. На различных моделях показано, что пептидогликаны способны вызывать адъювантный [fCotani et' зі., 1974; fidan et al., І975; Nauciel, Fleck,1975; Dziarski R., 1986], нитогенный эффект [Damais С. et al., 1975, 1977; Dziarski R., Dziarski A., 1979; Dziarski R., 1980, 1986; Bessler H. et al,, 1986; Zeiger fl., 1986], активировать комплемент [Бояринова Л.В.,1984; Азов Н.Й., 1985; Лебедева В.В.. 1989; Uerbrugh Н. et al.,. 1980; Fleer fl. et al.. 1986; Stimpson S. et al., 1986; Akinori K. et al., 1987; Janusz H. et al., 19871, вызывать реакции гиперчувствительности замедленного типа [Останина Л.Н. и соавт., 1987;'G.- Grass! G., Grassi С, 1985; Finger Н. et al.. 1985; Dziarski R., 1986; Hasachika T. et al., 1986; Ichiro A. et al., 1988; Heeraj K. et al., 1988], индуцировать выработку специфических антител [Астафьев Д.Г., 1987; Uerbrugh et al.,1983; Christenson et al., 1983; 1986; Jacob E., 1987]. Однако, несмотря на активное участие пептидогликанов в реакциях гуморального иммунитета, вопрос об их специфическом взаимодействии с лимфоцитами до сих пор дискутируется, хотя принципиальная возмоі-ность такого рода реакций отмечена рядом авторов. Показано, что в культуре in vitro пептидогликан и его синтетический
- 2 -дериват (глюкозамилыурамилдипептид) стимрируют лимфоциты только сенсибилизированных гивотннх [Манько В.И. и соавт., 1989; Targouski, Вегшап, 1975], а несенсибилизированные лимфоциты пуповинной крови ареактивны по отношению к определенным дозировкам пептидогликана Е.соїІ-МІ7, в то время как лимфоциты взрослых доноров отвечают на пептидогликан продукцией нейтрофилстимулирукщих л'имфокинов [Маянский fl.H. и соавт., 1987]. В связи с этим, изучение уровня специфической реактивности лимфоцитов к пептидогликанам монет быть использовано в клинике для диагностики внутриутробного инфицирования новороаденных, а индекс реактивности лимфоцитов здоровых доноров могут служить условной нормой при исследовании того не показателя у инфекционных больных. С этой точки зрения несомненный интерес представляют сведения о специфических реакциях бактериальных пептидогликанов с лимфоцитами человека и о взаимодействии лимфоцитов с пептидогликанами в системе межклеточной и опсонической кооперации, об индивидуальных колебаниях реактивности лимфоцитов у здоровых людей и воз-моаность использования пептидогликанов в качестве аналитических препаратов в клинико-иммунологических иммледованиях.
I] ель работы-на основе определения закономерностей взаимодействия бактериальных пептидогликанов с лимфоцитами человека разработать новые методические подходы к изучению механизмов противоинфекционного иммунитета.
Задачи работы:
1. Исследовать феномен активации люминолзависимой хемилюми-несцекции лимфоцитов человека в системе с пептидогликаном золотистого стафилококка. Дать сравнительную характеристику лимфоцитсимулируюцей активности золотистого стафилококка в спектре чувствительности лимфоцитов к бактериальным пепти-
догликанам.
-
Исследовать феномен образования нейтрофил-стиыулирующих лимфокинов при стимуляции лимфоцитов пелтидогликаном золотистого стафилококка.
-
Изучить субпопуляциокные особенности активации лимфоцитов пептидогликаном золотистого стафилококка.
-
Дать сравнительную характеристику реакций пептидоглика-на золотистого стафилококка с сенсибилизированными и не-сенсибилизированными лимфоцитами человека.
-
Изучить характер взаимодействия пелгидогликана" золотистого стафилококка с лимфоцитами в системе опсонической кооперации.
Научная новизна. Впервые разработана высокочувствительная тест-система для изучения взаимодействия бактериальных пептидогликанов с лимфоцитами человека по люминол-зависимой хемилшинесценции. Предлоаен новый диагностический препарат (пептидогликан золотистого стафилококка) в качестве стимулятора хемилюминесценции лимфоцитов. Изучены субпопуля-ционные особенности активации лимфоцитов пептидогликаном золотистого стафилококка, установлено, что индукция хемилюминесценции смешанной популяции лимфоцитов связана преимущественно с В-лимфоцитами, хотя нельзя исключить участия в этом процессе и Т-клеток. Проведено сравнение реактивности сенсибилизированных и несенсибилизированных лимфоцитов человека к пептидогликану золотистого стафилококка, показано, что сенсибилизация к пептидогликану является универсальным признаком иммунологического статуса человека и характеризует широкую распространенность зтого агента. Изучены механизмы реактивности лимфоцитов к пептидогликану золотистого стафилококка в системе опсонической кооперации. Проанализирован вклад различных опсонических факторов нормальной сыворотки человека в реакции пептидогликанов с лимфоцитами. Дана сравнитель-
ная характеристика линфоцитстимулирукщей активности пепти-догликана золотистого стафилококка в спектре чувствительности лимфоцитов к бактериальным пептидогликанаы. Установлено, что пептидогликан золотистого стафилококка занимает лидирующее место по степени активации лимфоцитов как внутри рода Staphylococcus, так и среди пелтидогликанов бактерий отдаленных таксонов,
«
Те ор етическая «практическая зна-ч и м о с т ь. Материалы исследований содержат новую информацию о характере взаимодействия бактериальных пелтидогликанов с лимфоцитами человека. Экспериментально обосновано по-лоїение о специфичности взаимодействия пептидогликанов с лимфоцитами и возмовности сенсибилизации организма к этим бактериальным продуктам. Дана характеристика прямых и опсо-нинопосредованных реакций лимфоцитов с пептидогликаном золотистого стафилококка. Разработана доступная и воспроизводимая методика для определения повышенной чувствительности лимфоцитов человека к бактериальным пептидогликанаы. которая монет быть использована для функционального зондирования лимфоцитов и их рецепторов. Данная методика позволяет оценивать уровень сенсибилизации организма к бактериальным пепти-догликанам. Результаты наших исследований, полученные при исследовании реактивности лимфоцитов взрослых здоровых доноров к пептидогликану S.aureus, могут служить показателями относительной нормы при изучении того se показателя в условиях патологии ассоциированной с золотистым стафилококком.
Внедрение результатов. Метод диагностики внутриутробной стафилококковой инфекции у новорожденных применяется в лаборатории иммунологии Ни-кегородского НИИ педиатрии.
- 5 -Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на конференции молодых ученых "Актуальные вопросн медицины" (Пивний Новгород. 1989 г.); на X межинститутской научной конференции "Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях" (Челябинск, 1990 г.); на Всесоюзном совещании "Хемилшминесцентные методы в клинической диагностике" (Юрмала. 1990 г.).
П у б л и к а ц и и. По теме диссертации опубликовано б работ, список приведен в конце автореферата.
Объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 8 глав собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, включающего 30 отечественных и 90 иностранных источников. Работа изложена на 123 листах машинописного текста и содержит 32 рисунка и 5 таблиц.