Введение к работе
Актуальность исследования. В последние годы значительно возрос интерес исследователей к использованию хемилюинесценции для различных аналитических целей. Регистрация спонтанного и усиленного свечения биологических субстратов позволила увеличить чувствительность по выявлению исследуемых веществ. Недавно хемилюмкнесцентные реакции начали применяться в имиукоаналиьах. однако имеются лииь единичные работы, посвященные применению хемилюминесценгного иммуноанализа в медицинской микробиологии. Показана возможность виявлення бо-тулинического токсина, антигенов чумы, 'лептоспир, синегнойной палочки, антител к вирусу краснухи, цитомегаловирусу и возбудителю малярии ^Коровник С.А. с соавт., 1991, Ntcktess v. et йс, I9C5). З то же время в доступной литературе отсутствуют работы по использованию анализа для лабораторной диагностики сибирской язвы.'
Одновременно хемидюминесценцио возможно использовать для изучения функциональной активности фагоцитов лабораторных животных и человека. Применительно к возбудителю сиблрской язвы такие работы единичны, к теку .же пока отсутствуют сравнительные данные по пригодности хемилюминесцентного метода исследования с визуальными для оценки функционального состояния фагоцитов при их контакте с возбудителем сибирской язвы.
Таким образом, применение хемклюминесцектного анализа для оценки клеточного и гуморального им^т-гитета представляется заманчивым, так как использование одного прибора для измерения сверхслабого свечения позволит не только'- ла. ранних этапах, развития заболевания обнаруживать возбудитель сибирской язвы и антитела к нему, но и оценивать фагоцитарную активность макрофагов и лейкоцитов животного и человека.
Цель работн- разработка иетода'хемилюминесцент-ного анализа для иммунодиагностики сибирской язвы.
Основные задачи исследования: ' I. Оптимизация условий хемилюминесцентного иммуноанализа для Э(?фектйвного обнаружения в. anthracis.
-
Оценка возможности использования хемилюминесцентного иымуноанализа для выявления антигенов и-антител в диагностике экспериментальной сибиреязвенной инфекции.
-
Хемилюминесцентный анализ активности фагоцитов in vitro лабораторных животных по отношению к клеткам_сибкреязвенного микроба различного антигенного состава.
Научная новизна
Разработан высокоэффективный метод хемилюминесцентного им
муноанализа для . .-.явления антигенов и специфических иммуногло
булинов В. anthracis. 1
Впервые на основе хемилюминесцентного иммуноанализа разработана система дифференциальной оценки иммуноглобулинов к различным антигенным комплекса;.! возбудителя сибирской язвы.
Предложен тест-объект для хемилюминесцентного анализа функциональной активности фагоцитов in vitro лабораторных животных, инфицированных В» anthracis.
Показана динамика фагоцитарной активности полишрфноядер-ных лейкоцитов в процессе иммунизации лабораторных животных различными антигенными комплексами сибиреязвенного микроба с помощью хемилюминесценции.
Практическая ценность. Результатом проделанной работы явились методические рекомендации "Использование хемилюминесцентного иммуноанализа для лабораторной диагност.. :и особо опасных инфекций", утвержденные 25 сентября 1991 года заместителем начальника ГЭУ МЗ СССР Г.Г.Онищенко в
- 4 -методическом пособии "Современные метода диагностики 00Й и способы их применения" под редакцией д.м.н,-проф. Л.Ф.Зыкина и к.м.н. ст.н.с. С.А.Коровкина. - Саратов, 1952.
Вышеуказанный документ используется в практической и научной работе ряда лабораторий Волгоградского научно-исследовательского противочумного института.
Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены:
на Симпозиуме с метдуна^.д.ым участием "Иммунодефицита и аллергия" (Москва, T9S0;
на ХУЛ съезде Всесоюзного общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов им. И.й.Мечникова (Алма-Ата, 198
на Рабочем совещании "Состояние и перспективы развития диагностики бактериальных инфекций" (Оболенск, 1989
на заседании секции "Инфекционная иммунология" Первого Всесоюзного иммунологического съезда (Сочи, 1989;
на У7 Всероссийском съезде микробиологов, эпидемиологов и паразитологов (Нижний Новгород, I99T1
ОСНОВШЕ ПОЛОНЕННЯ, ВЫНОСЖЕ НА ЗАЩИТУ: I „ Оптимизация и- адаптация условий проведения хемилюминее-цшткого жмуноанализа для иммунодиагностики си;" ірской язвы.
2. Высокоэффективная детекция антигенов Б. antbracisH специфических иммуноглобулинов к ним при помощи хемилюминесцентно-го иммуноаналиэа.
-
Использование, хемилюминесценткс иммуноанализа в'качестве самостоятельного метода лабораторной диагностики сибирской язвы.
-
Возможность определения функциональной активности фаго-
цитов лабораторных лшвотных, иммунизированных антигенами B.aath-гасіа с помощью хемилюминесцентного анализа.
П у б л .л к а ц' и и. Основное содержание работы отражено в 9 опубликованных статьях.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованных источников, в которыГ: входит 46 отечественных и Г2Т иностранный источник. Работа изложена на 126 страницах машинописного текста, включает 12 таблиц и 19 рисунков.