Введение к работе
Актуальность проблемы
В настоящее время псевдотуберкулйз продолжает оставаться серьёзной проблемой здравоохранения. Для этой инфокыии характерна эпидемическая заболеваемость, регистрировавшаяся ранее с большой частотой в организованных датскіа коллективах. В последние годы имеет место тенденция к большему вовлечению в эпидемический процесс взрослых (военные контингента, профтехучилища и т.д.) на Фоне утяжеления клинического течения болезни.
В этой связи актуально проведение исследовании, направлении на разработку новых профилактических препаратов для защиты от инфекции. Сейчас заметно возросло внимание исследователей к поиску кандидатов для приготовления псевдотубер-кулезноа вакцины и изучению иммунологической перестройки организма, обусловленной введением протективных антигенов (Дзадзиева М.Ф., 1981; Тимченко Н.Ф. и созпт., 1990; Быст-рова А.Н., 1991; Борисова В.Н. и соавт.,1991; Кузнецова Т.Д. и соавт., 1991).
В ПОСЛеДНИЭ ГОДЫ бЫЛИ ПОЛУЧОЯЫ аКТИВНЬга аНТИГеНЫ Virginia pseudotuberculosis С рЭЗЛИЧНЫМИ ИММУНОХИМИЧЄСКИМИ ХарЭК-
теристиками - высокомолекулярная Фракция лшгаполисахарида, белки наружной мембраны, аттенуированныа бесшгазмидяый мутант Щенева Г.Я. , 1986; Тимченко Н.Ф. и соавт., 1990;
Isberg Я.Д. et „1., 19В7; . Rosqvist R. et al., 1988; Forsberg Й. Et al., 1991) -,ЗНЗЧЄНИЄ KOTOpHX ДЛЯ ИММуНОГфОФИ-
лактики, а также для диагностических целей, изучено недостаточно .
Изложенное определило необходимость комплексной оценки активных антигенов иэрсиний, направленной на выбор эффективных препаратов, защищающих макроорганизм от псевдотуберкулезной инфекции и перспективных для создания новых диагностических препаратов.
Цель исследования - охарактеризовать ИММУНОГеННЮ И
протектйвные свойства антигенов v.pseudotuberculosis; оценить эффективность их применения для зашиты ОТ ИНФЄКЦИИ и создания диагностических препаратов.
Задачи исследования:
1. ПОЛуЧвНИв аКТИВШХ аЯТИГеНОВ y.pseudotuberculosis
для защиты от развития инфекции.
-
Оценка протективных свойств антигенов с различной иммунохимичеокой характеристикой на модели экспериментальной инфєкши.
-
Определение протективноа активности антигенов при сочетанком их применении.
-
ОЦвНКа ЗФФЄКТИВН0СТИ Применения аНТИГеНОВ Y.pseudotuberculosis с диагностическими цзлями.
Положения, выносимые на защиту:
-
В результате сравнительного испытания протективных свойств корпускулярного (аттенуированный. мутант) и субъединичного ( высокомолекулярная фракция липополисахаридэ -ВМФ ЛПС) антигенов показано, что антигены, преимущественно содержащие липополисахаридныа комплекс, недостаточно эффективно защищали организм экспериментальных животных от инвазии возбудителя и не препятствовали его дассеминации в органы и ткани.
-
Сочотанное применение высокомолекулярной Фракции липополисахарида и белков наружной мембраны <БШ) обеспечивало наиболее выраженную защиту организма животных от заражения высоковирулентным, иггаммом Y.pseudotuberculosis, обусловленную активизацией Факторов как клеточного, так и гуморального иммунитета, а также Факторов несшцифичоской резистентности.
-
Для оптимизации технологии получения иммунодиагнос-тичееких препаратов целесообразно использование ВМФ ЛІС у.pseudotuberculosis. Ей строгая специфичность и выраженная активность обусловливают перспективу Эффективного использования ВМФ ЛПО для получения как антигенных (зритроцитарныи диагностику» >, так и иммуноглобулиновых і тест-системы > препаратов.
Научная новизна и теоретическая значимость
Впервые проведено комплексное изучение иммуногенных и
ПрОТеКТИВНЫХ СВОЙСТВ ОрИГИНаЛЬНЫХ аНТИГвНОВ Y.pseudotuberculosis: генетического 2-х маркерного рекомбдаантэ, утратизшэ-го вирулентность « авторское свидетельство n 1786675 от в октября 1992 г.), ВМФ ЛПС И БНМ.
На основе микробиолого-морФологического изучении взаимодействия антигенов иерсиниа с макроорганизмом на модели экспериментальных животных охарактеризованы протективные свойства изученных антигеновопределена динамика Формирования иммунного ответа; показано значение клеточных факторов иммунитета в защите иммунных животных от заражения высоковирулентным ЫТаМИОМ Y.pseudotuberculosis.
С учвТОМ бИОЛОГИЧесКИХ особенностей V.pseudotuberculosis предложен комплекс антигенов «ВМФ ЛПС и БНМ», создающий у экспериментальных животных выраженную запрету от инфекции.
Обосновано преимущество использования ВМФ ЛПС в технологии получения строго специфичных и активных гиперимушых сывороток перед другими образцами антигенов. Эта сыворотки и их Фракции могут служить свнситиаом для конструирования различных имяунодиагностических прэпарзтов.
Показана эффективность использования ВМФ ЛПС при получении антигенного эритроцитаряого диатностикума, превосходящего по чувствительности и специфичности аналогичный зрит-роцетарныа коммэрчвсниа дяагностикум.разработганиж на основа антигена y.pseudotuberculosis, полученного по БеСТФЗЛЮ.
Практическая значимость
Оптимизирована технология получения псввдоггуберкулэзвоа ЕмаїуноФермс тгноа тест-системы в результате использования высокоспецифичного антигена (ВМФ ЛПС). Показана строгая специфичность и высокая чувствительность препарата.
Разработанная тест-система усгоино прошла Государственные испытания. Утверждены ВфС « м 42-354-ВС-92) и ЭПР (n 389-92), даны показания к её применении з практике, осуЕэствляется серийный выпуск.
Оригинальная схема иммунизация комплексом активных антигенов «ЕЧф ЛПС и БНМ) с различными кммунохимическими характеристиками, позволяющая получить гидаркмунные сыворотки с высоким титром сгацкфических антител, рекомендована
для использования в технологии получения новых псевдотуберкулезных диагностических препаратов.
Полученные характеристики безвредности, протективноа активности комплекса антигенов (ВМФ ЛПС и БНМ> v.pseudotuberculosis на Фоне выраженного специфического иммунитета позволяют рассматривать его как перспективный в качестве вакцинного варианта.
Апробация работы
Материалы диссертации доложены на международной конференции "Медицинская биотехнология, иммунология и СПИД" (Сэнкт-Петербург,1991г.>; на заседании Санкт-Петербургского научного общества микробиологов и эпидемиологов ( 1892 г.); на юбилейной конференции к 70-летш института имени Пастера "Актуальные проблемы инфекционной патологии" ( 1933 г.).
По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ} получено авторское свидетельство.
Структура и объем работы
Материалы диссертации изложены на (56 страницах машинописи. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 20 рисунками. Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, 5 глав собственных исследований, заключения, выводов и указателя литературы, включающего 127 отечественных и 88 зарубежных источников.