Введение к работе
Актуаэт'""іть проблемы. Острые кипечные инфекции /ОКИ/ являются серьезной ьроблемой инфекционной патологии. 2м принадлехит ведущее иесто в структура заболеваемости, особенно у детей / Bocfcemutl, 1990/. Эффективность лечэбнкх, профилактических и противоэпидеиичес-ках цзроприатий во многой зависит от знания этиологического фактора /В.П. Солодовников к соавт., 1983/. Кзэзду тем,- несмотря на постоянное соворгянствоЕшаю лабораторной діагностики, рсгу-.лтаруется в средней 5С# ОКК кеуэтакозяенкоЯ этиология /М.И.Шапиро, А.А.Дегтярев, IS90/. Часть керассніровЕапшх случаев зтиологичаски монет бкть связана с условно паязгеншаы бактарияздї / А.И.Иїзаноа, 1952; Е.П.Берна-ссвсхая и соле?., ISS4; З.А.Посвовит, 1984г Л.Б.Сейдуллаеза и соаат., 1987/. К тагам возбудителям относятся Citrobacter freundii, слоесбншэ знзызать иак групзсвіге, так а спорадические заболевания. /Б.П.р2Гккскзя, 1Э77; В.Г.&нн, 1980; В.Л.Романов и соавт., 1980? Н.5.Лросяуся2:о2а и соавт., 1962; В.О.ЗйпкобскиЯ, ISS4/. Сдаако гасга-извка этиологического диагноза кишечной цктробзктзр-инйекцйи гагд-ставляст определен ив трудности, поскольку указанны» баятераа кзрзд-г~; встречаются з состава нормальной киярофлорн / В.Г.Пзтроясакі» (VLBapico, 1975/. Поэтому разработка критериев э?аалсп;чгсл Ззначи-к-сат; обнаружения c.frenadii при диареях пркобрзтаот гетмз значение.
Одшаї кз доказательств этиологической рола цатробгвтер при ОКИ является регистрация гуморального ницункого ответа на антигены возбудителя. Для этих целей используется реаацза агкшпагавди с ауто-шташки. Стаыдарткке и более чувствительшз погода выявления р,нтй-тел я цитрсбастер вд разрабстзш. известны единичные сообщения о пра-иеаэшш резицни пассивной гвнагаазкинацаи /РИГА/ с эритрещитаиг сснейЗклизгровгшаги! неочиценкшя антигенами / B.3,Jfer ^дьник и соавт., 1974/ к антагенаки аутоягаимов цатробактер / A.iy^usjwuuxTOoc и
йоавт., IS79; В.Г.Винн, IS8Q.'.
Необходим поиск и других более ранних показателей данного забслэ-ваігия. К тоник подходам следует отнести индикации антигена в выделениях больного / Ю.И.ЛИТИНСККЙ и соавт., 1988/, определение копроан-тигел / И.Б.Куваова и соаат., I9S5/ я реакции клеточного иммунитета / Л.Б.Хазенсск к соавт., IS87/, услеино использованные при дизентерии и сальмонедлезах / Б.В.Каральник и соавт., IS82; НЛЛ.Чурнина, ІС-В4; ІЛ. В. Суслова, 1985; Н.И.Гурарий и соавт., 1988; СЯ.Тендетняз и ооавт., 1590/ и которые еца не "применялись в диагностике кишечной цатробактер-инэекции. В этой связи возникает необходимость разработки щшунореагектов и выбора эффективных цетодов исследования. Среда диагностических препаратов привлекают вниианке сеисибилизированшз эритроциты из-за невысокой стоимости диагностики и техшгчасжой доступности реакций / В.А.ІЕамардин, Т.Н. Тугамбаев, І9Б9/.
Сложность рассматриваемой проблемы заключается также з ток, что нет четких критериев определения потенциальной способности штшшов цктробактер зкзывать заболевание. В последние годы все больяэе вки-ыакиа удаляется изучению факторов патогенности, свойственных возбудителям кишечних инфенцрй - адгезивности и энтеротоксигенностя / С.Т.Мнацаканов, 1982; С.С.Гизатуллина, И.О.Еиргєр, 1985; В.М.Бондаренко, и соавт., 1986/. Методы определения указанных признаков, достушыз практический лаборатория!!, не разработаны. Не потерял актуальности вопрос совершенствования бактериологического метода диаі ностики ОКИ /Е.П.Бернасовскаа и соавт., 1964/.
Рассмотренный круг вопросов определил задачи исследования.
Цель исследования - совершенствование лабораторной диагностик:: килечной цитробактер-кифекции.
Задачи исследования;
I. На основании бактериологического обследования больных ОКИ и
эовых выявить наиболее распространенные серогруппа . эаботать рациональную схему выделения н идентификации условно паянных энтеробактерий по биохимический свойствам, основанную на шальном наборе тестов. Изучить чувствительность выделенных шгам-к антибиотикам.
2. Изучить частоту выделения при ОКИ штаммов C-treundii , обла-
цих адгезивной, энтеротоксигенной и инвазивдой активносты>.йме-
ь возмолности стандартизации определения адгезинов цитробактер.
3. Определить в эксперименте особенности взаимодействия цитро- -
гер с кишечным эпителием, характеризующие его патогенные свойства.
4. Получить моновалентные антигенные и антительные эритровдтар-
диагнэстикуш /ЭД/ наиболее часто встречающихся специфичностей
робактер. Разработать способ получения поливалентного антительно-ЭЦ. Дать оценку специфичности и чувствительности реакция с разра-анньши препаратами в модельных опытах с индикаторными системами, рчить БД для обнаружения специфических антигенсвязывахщих димфо* вв /АСЛ/. ,.',,.
5. Определить эффективность реакций с разработанными иммунораа-гами по определенно антител, антигена и АСЛ на модели кишечной эобактер-инфекции. Изучить иммунологические и микробиологические ізатели экспериментальной инфекции, выззанноЯ c.freundii.
-
Выяснить возможности индикации знтигенов цитробактер в фека-t и моче больных при помоци РПГА и реакции нейтрализации антител 1т/. Изучить динамику иммунного отвага по суммарным и цисгеинре-гентным- антителам и выделения антигена, влияние возраста, пола, гельности, тяжести течения болезни, кратности исследования на эф-гивность серологических методов диагностики. Изучить возможность 5ДЄЛЄНИЯ яопроантител и АСЛ при кишечной цитробактер-инфекции.
-
Разработать тактику лабораторной диагностики кишечной датро-
бактер-инфекции.
Научная новизна работы. Впервые разработаны ак-'игенныв и антител низ ЭД цигробактер для выявления антител/антигенов и АСЛ. Установлено, что реакций с разработанншш иммунореагентгш характеризуются достаточно высокой чувствительностью и специфичностью. Показана возможность определения дезинтеграции клеток цатробактер по серологический Показателя!'., доказана принципиальная возможность применения реакций с разработанными' ЗД в лабораторной диагностике йшечноі; цигробаотер-инфекцки. -
Впервые установлено, что при кишечной цитробактер-инірекции на-бладается выделение мелкодисперсного антигена возбудителя чарез почки, в патогенетическом аспекте свидетельствующее об антигенеши. При экспериментальной цитробактер-ині}Єкции и у больных лвдеЯ с ОКИ, вызванной цвтробактер, впервые обнарузганы специсгические Д.СЛ и копро-антитела. Получены новые данные 6 характера системного антительного ответа при Ю'зечной цитробактер-ин'Тйкцик. Показана динамика, развивавшейся в процессе заболевания дезинтеграция бактерий в киаечнике.
Впервые показано, что индикация антигена в моче, динамика дезин
теграции бактерий в кишчиикеи выявление в крови АСЛ могут сяуяигь
дополнительным критерияші этиологической значимости цатробакгер при
диареях. Установлено, что определение АСЛ в периферической крови и
антигена в моче моївт быть использовано для ранней диагностики забо
левания. - .
Виявленії особенности сєропеґ;зажа штаммов С.Гієце<ііі в условиях Северного Казахстана, определены <-«риентативние особенности внделен-HLX культур. По сочетанию вариабельных признаков охарактеризовано 12 биоваров. Разработана схема выделения' и- идентификаций энтеробак-тариГ, с использованиеи минимального набора биохимических тестов. Полученные данные имеет значение не только для рационатлзации схемы
Эактериологичзского исследования и определения состава иииунореа-гентов, но и дополняют обще представления о биологических свойствах цитробактер.
На основании гистологического и электронноиикроскопичвского изучения взаимодействия цитробактер с кишечный эпителием получены доказательства их энтеропагогекности.
Полученные данные вазны не только для определения этиологических критериев, но и для познания патогенеза н иммуногенеза кишечной цитробактер-юйгекции.
Практическая значимость работы» Показано, что разработанные SA могут использоваться для лабораторной диагностики ишечной питро-бактер-иніТекции. Разработана тактика бактериологической и комплексной иммунологической диагностики этого заболевания: выделение культуры возбудителя, изучение его адгезивности, индикация антигена в фекалиях и моче, определение АСЛ, копро- и сывороточных антител. Применение двух реакций - РИГА и РИА? - позволит не- только взаимно контролировать специфичность индикации антигена, но и охарактеризовать степень его дисперсности, что ииеет диагностическое значение. Показано, что при определении сывороточных антител выявление их динамики более значимо, чем условно диагностического титра, с диЯе-ренциацией суммарных и цистеинрёзистентных антител. Выяснено, что дополнительное диагностическое значешп мояет иметь определение спе-, цинических АСЛ и динамика дезинтеграции антигена цитробактер в іека-лиях. Выявлено, что определение АСЛ uoser быть использовано для ранней диагностики диарей, зызываегах цитробактер. Установлено, что индикация антигзна в моче может слухать дополнительным критерием да*-Деренциации носительства цитробактер и низечноГ: цитробактер-ин^екции и использоваться для раннеіі диагностики этого заболевания.
Разработана двухэтапная схема ввде-іеіаш и иденяцдкации УЕХ на
основе минимального набора биохимических тестов,позводяюцая уве чнть количество исследований на наиболее актуальные для изученн гнрритории возбудители. Выявлены йерментативше особенности изо гов, что имеет значение не только для идентификации выделенных тур, но и колет быть использовано в целях их зпадемиологическої иаркирования. Обоснована целесообразность приготовления райониі них поливалентных аггдютинирущих сывороток цитробаятер с учете распространения различных серогрупп. Показана, что при тепереш составе поливалентных сывороток цитробактер и серопейзажа цирк) рушдкх штаммов остается неиспользованной большая часть ишунерг тов. Конструирование имиунореагентов прицельно для территории ( деленный серопейзажем бактерий данного таксона позволит избеаж оправданных экономических затрат.
Предложен пригодный для практических лаборатория способ от ления адгезинов бактерий при покоїки фиксированных эритроцитов і ской связей.
По результатам исследований изданы: I. Методические рекомеї "Серологическая диагностика заболевании, вызванных бактериями ; цитробактер" /1984/, изданные в соответствии с общесоюзный пла издания методических документов на 1963 год и планом внедрения 1984 год; 2. Руководящий нормативный документ РД-42 Казахской 2-85 "Идентификация условно патогенных энтеробаятерий" /1965/, в действие с I января I9S6 года приказом Министра . здравоохран Казахской ССР от 30 декабря IS85 года; 3. Методические реконен "индикация антигена цитробактер при помощи поливалентного диаг кума" /1992/. Получены удостоверения на 12 рацпредложений по с баи приготовления ЭД цитробахтер.выявления адгезинов.по модами способов определения энтеротоксина, постановки РИГА, иммуна;іла центного анализа, получения поливалентной сыворотки цитробакте
9 рационализации тагтнгга идентификации УПЖ. Основные г"- >?э ия. вкнрсиича на зааигу.
-
сп" .ование экспериментально.! «одели килечной цитробактер-ин^екции /г.^роральное заражение кроликов/ позволяет исследовать в контролируемых условиях возможности микробиологической и иммунологической диагностики данного заболеванпя.-
-
Тактику выделения патогенных бактерий целесообразно разрабатывать применительно к условиям конкретных территории и времени на основании данных предварительного микробиологического мониторинга, отражающих этиологическую структуру ОКИ. С учетом таких данных для лазахстана предложена рациональная тактика выделения условно пато-генных энтеробактерий. '
-
Стандартизована на основе применения фиксированных эритроцитов морской свинки методика определения адгезивной активности цитро-бактер, позволяющая определять .чтот фактор патогенности в практических условиях. '
-
Обоснованы способы приготовления цигробактерных антигенных и антительных Лгоко- и поливалентных/ эритроцитарных иізгунореагентов для определения антител, антигенов и АСЛ.
-
Ксективность диагностики кишечно.": цитробактер-интекции обеспечивается применением бактериологического ч комплекса методов с использованием разработанных ЗД -"определение Сыворото :шх и копроанти-тел, индикация антигенов возбудителя в выделениях, определение АСЛ.
5. Обнаружение специфических АСЛ в крови,- антигена цитробактер в ноче по данным РоАт и дэзингеграции ачгигена в'-екалиях в динашше по серологические: показателям могут использоваться в качестве критериев эЪ10лог;ыэс::о , аначглгостп 2.Ггг-лгац при данном заболевании.
Апробация работы и пуо'лика^гл..,іатеа:іаль,- диссертации дологг.енк на итоговых научных конференциях -„олпноградс.сого иедицикекого института
їй /1960-1990/, І,ІУ,У объединенных сьез^шстгагиенистов, эпидемиолог микробиологов, вирусологов, паразитологов и инфекционистов Казахе на /Алма-Ата, 1980,1990; Чимкент, 1565/, П-2 региональных нонЗере циях по программе XHSCKD "Человек и биосфера" "Населенные пункта охрана окружапцай среда" /Целиноград,1985,1989/, зональном сомите инфекционистов и педиатров /Целиноград,1986/, заседаниях пробдош комиссии Целиноградского медицинского института /19В?, 1990/, зас< ним, областного общества инфекционистов /1990/, всесоюзной научноі конференции по биотехнологии /Целиноград, 1991/.
По теме диссертации опубликовано 37 печатных работ.
Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из Еведеи обзора литературы, б глав собственных исследовании, заключения, : доз и списка литературы. Текст изложен на 215 страницах иадиноши включая 62 таблицы и IT, рисунков* В списке литературы приведен 4 источник, в том числе 159 иностранных. СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ