Получение иммунобиологических препаратов с антимикробной активностью на основе лейкоцитов человека Хафизова, Лариса Губаевна

Введение к работе

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Значительное место' з патологии человека, ежегодно унеся по данным мировой. статистики более 22 киллионоз жизней (Казадшн С. М. 1997), занимают иифекциошгые заболевания.

Развитие устойчивости к антибиотикам и другим химиспрепаратам, широко глжкєняєкккс її качестве зтистрсіштігх средств (Карксз В. А. с ссазт. 1935, Кузнецов В. ІІ с ссазт. 1939, Сгкзак R Я. с осанн 1933), - ие единственная причина незффектизвести проводимой тераоги. Развитие дкебахтериозов вследствие подавления нормефлеры, з также иі.пхуносупсесскрукнцее воздействие лекарственных химионрепгратоз, нередко длительно применяемых з высоких дозах, усугубляет имкуносупрессизный эффект микробных токсинов и антигенов (Спезек II Я. с ссазг. 1987, Гансза Л. А. с еоавт. 1996), что ведет к формированию вторичных рздаунедефицигез, прежде всего по гшеточвему типу (Рггпидоза Р. А 1982, УсЕчгпго ЕМс сеззт. 1982), абусЕззлГ'Зяшсж сетсе^нне уровня агпкгжкребиой защиты.

3 связи с этим внимание исследователей з последние годы направлено кг разработку и нрикекение при рлфежиогіньгх заболеваниях ког/зшексной терапии, пкпгсчгящез жяіуяебиолепгчзсхие препараты с шггашагмбньм зффгхгогг, обусловленным как прямым зоздейстлкзм на возбудителя, так и аюаредоззнньм действием, ашузщуххщм защитные механизмы и ведущим к гкики'гзгия возбудегеля нз фганизма.

Клетки крови человека могут явиться сырьем для получеіжи разнообразных биолегически активных щродуктоз. Тек, з нзгюпиазме Еешрсфильпых гранулагхягов ждеркггея миелоггероксидзза, лакгеферрин, лнзопнм, разлгичные катисізгае белки обладающие сильными антгимизфобными сгожлгдамя. В лккфодапх, нейгрофнлзх, базофилан, зозикофигЕх, мопсіїитах, маесфаггх содержатся леГкотриены - метаболиты грахидонехй кислоты, озезквеешгдз влияние is течение иммуиікх процессов (Goodwin J. S. 1985) и апииииЕцгю возбудителя из гаганизмг. ІЬзксмолскулярньїе фракции лейкоцитарного диализата содержат іргнсфз^фектср, сблглжю^ш, согласно зкяжримвїпаїшіьм (Viza D. et si 1986) и многочисленным клиническим (Dwyer J. M 1923, Viza D. et d. Ї983, Werner G., Zeria! A 1985, Facecbag H H. 1987, Li Zaian 1987) наблюдениям, терапевтической зффс<гижсстко гри инфеггдиогеюй патологии.

Было заявлено иротеганвнее действие изхшнъж, очищенных и рекомбинашикх узггерферонез з отко:неїЕМ Easccdini bsrgH (JahT. К. et d. 1970), Toxcpbsra gondii, СЬштуйа tracboffiafis ( Suribazasarai P., Ryld M. W. 1973), СахзеЗа fenreai (Turco let aL 1934), Rickettsia prowazekii (Тихо І, Plezbst H. W. 1984) и других. Позднее показано, что предварительное введение а- или [3->Ежрферона защипало жизотеых от йнфездки, вызванной SafeKEieb Uspri (Фапьчаксз И. 3. с ссазт. 1986,1987), S. агав (Зуева В. С. с ссазт. 1985, СпивгкїІЯ. ессазт. 1983,1984).

Акшмшро&ые эффекты препаратов іслерффона, аказиЕгхзЕЦйх влияние кг разззяиз инфекционного процесса, БьзгаїЕого разлгчкьая бсаержиг, обусловлены астжруїоаїимся в процессе кшерффоногш^юшшгкгом щпохнюв (Моисеев Э. А, Кшаш Е. В. 1971, Д. Л Беляев с соазт. 1983, И Я. Свизах с соазт. 1933, Езаноз Б. А 1933, Зуева Б. С. с ссазх. 1985, Беленький С. Н. с ссазт. 1983, Degree М В., Bukhoim G. 1938, Sdtriz 1989). В частности, ашибшсриашікс эффекты альфа-, бега- и гамма-Енієрфероноз связывают с гя»дукц?нй ФКО -a (Van Lfeass et ai. 1937, Cfea et aL1987, KchasectaL 19і6,ВйшдоВаіш±5, Young L. 1988).

ФНОа является одним из клкяезж цшгохкнэз, узЕстзукхцях в залтиппых резхцаж в ответ на бактериальную шжфекцшо (3v5aajs D. N. et гі. 1%5, Waam 1986, Kindemam el al 1988), рггупярующнх баккрацдарке функции найгрофклоз, акжкзруюздк к уакпиваквдж их фукк^скапьнук» гкггзгюсть (Sd&rai G. W. et aL 192S, СашрЬсйР.АеЫШ)).

МйЗГОЧЖаКЕЕЫе ЗЖПерИМЄґІШ ІЖЖШЯК, ЧТО ФНОКХ 32HHSEST от

инфицирования С. гЬхеааз (VeccfercEi А еі еі 1939), Mycobacterium avium (Sack С. М. d І 1990), L. тсаосу&джез (Havel E. A 1989), привадят к унйчюжашо м&тярикньк ппззмодкй (Gi5bra G. E, Rick D. A 19S3), гозьпЕзгт киллгнг вкуїрйккекяннх возбудителей, шіріжср Trypanosoma аія, может оказыжзгь ашкзтрусный эффект (Кузнецов В. П. 1989,MssteaJ.etaL 1988),зьгь!ваяселешнзноецкг1Шока?ггхедейста-;е гаї киепонспшЕИ, шфицарозгниые ДНК- и ИЖ-вирусами (їїо М., СШаЕйу J. А І98Т;. Многие типы клеток, инфицированные бактериями, становятся вьюойочувсікпслшасї к ітдаотахсическим эффектам ФНОчх, Ешосргдашш) разрушюн&вд шфшгзровгш&к; кяеіки^р^вгнкоНИссоЕвт. 1995,HawcflE. А 1987,1989).

Высокая бкаигаическая ахшзлестъ ФНОа в реакщях неопкщфйческой зашиты от жіфжцйонньк ашгоз, его способность к енвергическому дейсты-зо с а-, Р-, у-ингерфсроаЕми (Бхзрат Бхгсаи Атарзал с соазт. 1997) к Еедосхаилнсе содгрэканж з коммерческих препаратах шперфероги доагаг актуальной задачу дакшитотшето готучеажяакгизшхлиФНСчх. ,

Для производства человеческого влрускндуцирэвакного лейкоцитарного интерферона жяжш^чотдерагосидзфицгтщесьф&е-лейкогиты периферической крови доноров. После синтеза интерферона «слрйбзташые» лейжизпы сохраняют высокую (до 80 % ) ходаеетособдасть (В. П. Кузнецов с соазт. 1988), однако по технология производства после снятия интерферона их считают отходом производства и больше їж используют. Шлому поиск возможных путей более полного . использования такого дорогого и дефжщшого сырья, как лейкоциты оериффической крови человека, является весша актуальным.

Целью настоящей работы язялась разработка новых методических подходов к комплексному использованию лейкоцитов периферической крови человека для получения лекарственных препаратов с антимикробной

-5-глсгкзкосшо.

1. йхкадсзась возможность биссЕїісза ФКО-а з пвщзсое шзэрйераногсяеза с
гхЕЗПвззгниж свежих и <«гра5сганЕЫ») легжхржв челозгха

1. Изучеть возмсхсюсть пдагсптазго использования лгйкициисз после щр/аящ/щ^ххзгшхо скзпсза а-:-ппкфяхки дж получения лечебного Ерегщта с еяезносейс фесгсра перекоса

2. Лвработггъ метод контроля еяецнфнеском гкгавнеети цегпгргяа с гкйзїїсспо фгкісра переноса

Впервые кзу-їега всзмснеоспз. направленного бзеск-пен ФЫО-а «оірабоиашшмго> (гоше бзоскшеза а-ипврі¹²?⁰³³¹) лейкгацщамз челазгка с цглъго получает гтотхквкщжецят) пршгшіа с апн&кгерйшшкй ахизюстью.

ЕЬхгкаг зозгшшзосіь кггальасаазг-к в зотеове ит-уу-птаэз ansa ФНЭ-а м}^и«щдакеїтщда (МДП) и его сеїїєіенєского преззводхяго - лйзил-сифоаш-М-гЕ:гшпгпсйлз2мші4^-мурамич,ткіїїЗіікда (ГМНД-Зу&й). Опрздешы зюкозяя биосинтеза ФЕО-tx «зірабаїгнньїкя» лейксципатяа с еспсльзсззеІї-єм грймкгга и ссчсіеекой шщукЕки мураюзідшипідами и вирусом БШ, очищенным рцргбаггзЕьм нами способом (патент Российской Федзраащ № 1709615,1993), позэсиввещим сохрггіеть его иді^іа^ощуюахіизЕосаиЕггаїїсзньзгсзої&лаа.

Исследована летгбяня и прогехждагя зффгт-акзгкяь npsnspara, пелучгнкога по разработайся технолога! на основе повторно жшяьзуемък лейявдпез, на зкспзримешаїЕЕЬк моделях сальмезеллззрюй, кщеййсзжй и ірапгюзн)й кіфскщй. Разработан метод контроля спжкфрзескей гкгивноети полученного npscspara с ЕКікгносшо фактора ткрегюса.

Показна возможность иемплекспего игпатаозгпЕЖ лейкоцитоз идгїфйрикескй

гфокі дхярзз и создания беэоивдний тєхнжзгеи гжошзодетза кшерферска Дано зхтершгаиалшее обосяшзЕиг способа получения ва лейивдпах после жфуеэдлущтававнего синтеза игаерф^Р⁰¹³ щикоккшзого прегарзпга, содержащего ФНО-а, обладающего аншмикробжй еамвкссша.

Разработана тскнапоіия получения иьмунсбжлошчэсхаго препарата с гнпааЕфобЕными свойствами, содержащего азаизваяь фактора перевеса, на основе «офаботгнішх» лейкоцитоз, используемых после зиуссїдуї^сошакхх) скніеа шггерферапа.

По результатам исследований офорвдеи ЕОрмякшю-тсшдаескзя дскумешгдня

(ЗПР и ВФС) ш «Тражфоккн челожгагскЕЙ сухой для аньекдг-й».

Апробация работы.

Материалы диссертации доложены на республиканской научной конференции «Иммунобиологические препараты» (Уфа, 1985), на республиканской научно-практической конференций «Вопросы медицинской биотехнологии и иммуноігреяаратоз» (Уфа, 1988), на научной конференции «Итоге научных исследований биологического факультета Банкирского государственного университета за 1995 год» (Уфа, 1996).

Структура к объем дассертадск

Работа изложена на 107 страницах машинописного текста, иллюстрирована 15 таблипаки и 2 рисунками. Она состоит из взедекня, обзора литературы, собственных исследований, заключения, еыводов. Список литературы содержит 141 источник отечественной литературы и 274 - иностранкой.