Введение к работе
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Реакция антиген-антитело занимает центральное место в иммунологии. Исследование ее закономерностей ведется свыше 120 лет. Открыты коллоидно-химические свойства антител, изучены особенности образования комплексов антитело-антиген при разных соотношениях концентраций антител и антигенов, исследованы регуляторные функции иммунных антител в межклеточных и межмолекулярных взаимодействиях (Великанов И. И. . с соавт..1937, Зильбер Л.А.,1958; Бойд У.,1969; Незлин Р.С, 1972; Кульберг А.П. ,1975, 1985; Петров Н.В., 1976. 1983, 1987; Покровский В.И. с соавт.,1979; Ломов П.М.,1991. Наумов А.В. с соавт., 1992; Svejgard А.. 1995 и др.).
Показано, что в комплексах антитело-антиген, образовавшихся при избытке антител, последние несколькими слоями окружают каждую молекулу антигена. Подобные же многослойные покрытия из ' антител образуются при сааимодействии их с патогенными микроорганизмами. При обработке микробных клеток антителами, меченными флюоресцеином, на них образузтея плотные слои дюминесци-рукивдх антител, четко обнаруживаемые в люминесцентном микроскопе. -
Вместе с тем никто из исследователей не ставил как проблему изучение свойств иммунных оболочек на поверхности молекул антигенов и клеточных антигенных мембран в клане возможности дальнейшего совершенствования методов их 'применения в микробиологической диагностике. За последние .30 лет не опубликовано
ни одной обзорной статьи о проницаемости иммунных оболочек, и ни в одной монографии по микробиологии и иммунологии нет раздела, рассматривающего свойства оболочек, образуемых иммунными антителами, ни в теоретическом, ни в практической аспектах.
В связи со сказанным выше.. потребовалось собрать и обобщить разрозненные сведения об условиях образования антительных пленок или сдоев, их свойствах и значении в иммунных механизмах и диагностических реакциях. Эти данные были получены из научных публикаций, в которых образуемые антителами слои на поверхности антигенов изучались для выяснения механизмов реакций преципитации, агглютинации, связывания комплемента, опсошізации, а также реакций с антителами, меченными изсцланатом флзоресцеикэ пли электронноплотными веществами и некоторых других.
Исследование закономерностей образования иммунных оболочек на поверхности молекул антигенов и клеток, содержащих поверхностно расположенные антигены, необходимы для более глуоокогс понимания серологических реакций и поиска новых- возможностей при разработке эффективных методов микробиологической діагностики и новых лечебно-профилактических препаратов.
ЦЕЛЬ К ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ. Цель рабсти заключалась с изучении особенностей формирования иммунных оболочек из aHTHV&j на поверхности антигенов для совершенствования микробиологических и серологических диагностических методов.
ДЛЯ ДОСТИЖсКЇІЯ ОТОЙ ЦЄЛИ ОЫЛП ПОСТаЗЛеКЫ СЛЗДУВІЩ'.З OCHOPiiMi
залзчн:
'.. исследовать условия образования из антител і: иммунны: комплекс?-; оболочек на эритроцитах:
-
разработать новый метод определения циркулирующих иммунных комплексов, основанный на изменении седиментации эритроцитов под влиянием иммунных оболочек, формируемых на них этими комплексами;
-
изучить проницаемость оболочек, образующихся из антител на поверхности микробных клеток, для низкомолекулярных веществ и биополимеров, обладающих антимикробной активностью;
-
исследовать влияние некоторых условий на образовавние иммунных оболочек;
-
разработать новый метод определения титров специфических антител в сьшоротках. основанный на свойстве иммунных антител образовывать иммукомембраны с различной проницаемостью;
-
разработать методику оценки популяций вирулентных и ази-рулектных холерных вибрионов по плотности поверхностных антигенов, участвующих в Формировании антительнои иммунной оболочки.
- впервые проведен анализ и обобщение опубликованных'данных
о формировании антителами иммунных оболочек на поверхности
антигенов, а также обоснована актуальность изучения иммунных
оболочек, формируемых антителами ка поверхности антигенов, их
структуры и роли в защитных механизмах и реакциях;
- впервые проведены исследования проницаемости оболочек, образуемых иммунными антителами на поверхности клеток животных (эритроцитах) и бактерий, к низкомолекулярным веществам и биополимерам, обладающим литическои или антіімикробной активностью:
- изучены с помощью люминесцентного и электронного микрос
копов, а также аппарата для проточной цитофлхгариметрии накоти-
- о -
рые закономерности формирования иммунных оболочек на поверх- 1 ности микробных клеток;
в экспериментах с эритроцитами получены новые данные о роли различных концентраций антител и растворимых имму^пых комплексов антитело-антигенв образовании иммунных оболочек;
на основании проведенных исследований разработан метод
JM)eJШШIШJ^ffi-JЗ-JфCШ-JЖЩeЙ-П^
гистрированный в качестве изобретения;
установлено, что при высоких концентрациях поликлональкых или моноклональиых антител на поверхности клеток, , содержащих гомологичные антигены, образуются из антител иммунные оболочки, обладающие свойством полупроницаемых мембран; при низких концентрациях антител из них формируются крупнопористые оболочки, проницаемые как для низкомолекулярных, так и для высокомолекулярных веществ;
изобретен новый способ определения титров антител, основанный на их свойстве образовывать, в зависимости от'концентрации, полупроницаемые или проницаемые иммунные оболочки;
установлены существенные различия в образовании иммунных оболочек у вирулентных и авирулентных холерных вибрионов.
Полученные экспериментальные данные о свойствах иммунных оболочек будут способствовать дальнейшему развитию теории ви- . рулентности микроорганизмов, совершенствованию методов диагностики и идентификации патогенных микроорганизмов.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ ?АВ0ТЫ. Показана практическая целесообразность разработки новых методов микробиологической и серологической диагностики на основе Феномена образования полупро-
ицаемых иммунных оболочек из антител, гомологичных антигенам, іокалнзованнія.! на поверхности клеток или других биологических : синтетических структурах.
Разработан ноени диагностический тест "Способ определения інркулирущих иммунных комплексов в крови" (А. С. П1698784. 991 г.).
Изобретено: "Устройство для оценки аллергических кожнііх іроб" рекомендованное также для определения размеров кожной іеакцш! при титровании аллергенов и холерного экзотоксина" патент N 1790396, 1992 г.).
Предложен "Способ определения титра антител в противохолерных иммунных сыворотках, препятствующих вибриоцидному действию фотаминсульфата". (А. С. СССР N 1837232, 1992 г.).
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ И ВНЕДРЕНИЕ. Материалы работа доложены и ібсулсденьї:
На внутрнниститутских конференциях СарШ'ИСГ и РНКПЧИ 'Микроб", 19S9-1995 гг.
На Первом Всесоюзном иммунологическом съезде (Сочи .15-17 ЮЯбря 1989 Г. ).
На заседании Всероссийского иммунологического общества '.Саратов 1990 г.
На .15 конгрессе Европейской Академии Аллергологии и Кли-глческои иммунологии. Париж - Франция, май 10-15 19Э2 г.
На Всесоюзной научной конференции "Иммунология и специфическая профилактика особо опасных инфекций". 21-23 сентября 1993 г. . '
изобретение:- "способ определения содержания иммунных комп-
лексов в крови" внедрено в работу Саратовского НИИ сельской гигиены и кафедры кожных и венерологических болезней Саратовского Государственного медицинского университета.
Изобретение: "Способ определения титра антител в противохо
лерных иммунных сыворотках, препятствующих вибриоцидному дейс
твию лротаминсульфата" используется в научно-исследовательской
_ра№ге_ЕолШИПЩ1_ііайкро4^ ~~ ~~
На патент: "Устройство для оценки аллергологических кожных проб" получены положительные заключения из клиники койных болезней Саратовского Государственного медицинского института (1987), зам.министра №3 РСФСР (1990), Саратовского отделения Всесоюзного общества иммунологов (1990),, Всесоюзного научно-исследовательского противочумного института "Микроб" (1991). Ростовского противочумного института (1991).