Введение к работе
Актуальность проблемы
Для здравоохранения Российской Федерации клещевой энцефалит является важной проблемой краевой патологии многих регионов, где наблюдается весьма высокая заболеваемость.
Пермская область представляет собой крупнейший очаг этой инфекции. Заболеваемость по области значительно превышает уровень заболеваемости по Российской Федерации. В отдельные годы относительный показатель заболеваемости по области превышал в 4-7 раз республиканский.
Полиморфизм клинических синдромов клещевого энцефалита и нередкая встречаемость в его природных очагах, лихорадочных заболеваний с другой этиологией в весенне-летнее время, затрудняют проведение дифференциальной диагностики клещевого энцефалита.
Серодиагностика относится к ретроспективным методам и в силу недостаточной чувствительности диагноз удается подтвердить не более чем в 40% случаев (А.В.Зотов, 1973; А.Н.Волкова, 1991; Н.Н.Воробьева, Г.М.Волегова, 1992).
Широкое проэпидемичивание населения от 4,9 до 48,8% в различных климато-географических подзонах области (Р.З.Кузяев, 1968), а также профилактическое введение гамма-глобулина лицам, отмечавшим укус зараженных вирусом клещей, создают условия для образования иммунных комплексов из проішкшего вируса и антител в ранние сроки, после инфицирования.
Это обстоятельство требует внедрения в широкую практику новых приемов лабораторно-диагностических исследований.
Образование ИК является одним из этапов формирования противовирусного иммунитета, а нх выявление в крови заболевших имеет диагностическое и прогностическое значение.
Болышшство известных способов определешгя ИК позволяет изучить лишь их суммарный уровень, без учета антигенной специфичности (В.В.Хозниский, Б.Ф.Семенов, 1977;А.И.Воробьева, 1979).
Роль ИК при клещевом энцефалите изучена мало, диагностическая ценность не исследована.
Цель исследования.
Разработка экспрессного метода обнаружения специфических иммунных комплексов в крови больных и его применение в клинико-.табораторной диагностике клещевого энцефалита.
Задачи исследования.
-
Разработать методику выявления специфических иммунных комплексов в эксперименте с использовашіем зритроцитарного иммуносорбеита и метода флнюресцируюншх антител (МФА).
-
Изучить возможность обнаружешія специфических ИК в крови больных клещевым энцефалитом разработанным методом в условиях практической лаборатории в ранние сроки заболевания.
-
Изучить клинико-иммунологические особенности образования специфических ИК у людей при заболевании клещевым энцефалитом.
-
Определить класс-принадлежность антител в специфических ИК у больных клещевым энцефалитом и выявить их взаимосвязь с образованием иммуноглобулинов в динамике заболевания и показать диагностическую и прогностическую значимость.
-
Исследовать особенности иммунного ответа у лиц, с укусами вирус-содержащих клещей, путем определения вирусного антигена, специфических ИК, класс-принадлежности антител и розеткообразующей активности лимфоцитов.
Научная новизна.
1.Впервые установлена возможность концентрации специфических ИК на ЭИС при клещевом энцефалите.
2. Разработана новая модификация МФА для выявления специфических
ИК в крови людей с манифестным и бессимптомным течением клещевого
энцефалита.
-
Установлены закономерности формирования специфических ИК в крови больных клещевым энцефалитом в динамике инфекционного процесса.
-
Изучена класс-принадлежность антител в составе ИК и их взаимосвязь с образованием иммуноглобулинов в сыворотке крови больных клещевым энцефалитом и лиц, покусанных вируссодержащими клещами.
Практическая ценность и внедрение в практику.
Разработан экспрессный метод определения специфических ИК в крови больных клещевым энцефалитом. Обосновано применение метода в ранней иммунодиагностике клещевого энцефалита. Показана значимость метода при расшифровке результатов у больных со стабильными титрами антител к особенно серонегативных форм этой инфекции.
Предлагаемый метод прост, высокочувствителен и специфичен. Позволяет провести исследование за 3-4 часа. Метод экономичен, удобен. Одновременно можно провести исследование 15-20 проб крови. Лабораторный диагноз может быть поставлен по первой пробе крови, что сокращает срок диагностики на 10-15 дней.
Разработанный метод апробирован и используется в работе вирусологической лаборатории Пермского областного центра ГСЭН (Акт внедрения от 25 июля 1997 г.).
Полученные материалы о закономерностях формирования специфических ИК в крови больных клещевым энцефалитом в динамике инфекционного процесса используются при преподавании медицинской микробиологии в теме "Клещевой энцефалит" на кафедре микробиологии Пермской государственной медицинской академии (Акт о внедрении 18 мая 1996 г.).
Подготовлены методические рекомендации по выявлению специфических ИК при клещевом энцефалите МФА с использованием ЭИС.
Основные положения, выносимые в защиту (перенес).
-
Оригинальный способ выявления специфических ИК в крови больных клещевым энцефалитом с использованием ЭИС и МФА.
-
МФА с концентрацией ИК на ЭИС как диагностический тест при клещевом энцефалите в сравнении с другими способами иммунодиагностики.
З.Закономерности формирования специфических ИК при манифестном и бессимптомном течении клещевого энцефалита в динамике инфекционного процесса.
4. Прогностическая значимость выявления специфических ИК и ценность комплексного исследования крови у лиц, покусанных вируссодержа-щимн клещами.
Апробация работы.
Работа выполнена на кафедре микробиологии ПГМА и вирусологической лаборатории Пермского областного центра ГСЭН и является частью комплексной темы по изучению клещевого энцефалита на Западном Урале (N госрегистрации темы 0190005864).
Материалы работы доложены на итоговых научных студенческих конференциях Пермского Государственного медицинского ішетитута в 1990 и 1991 г.г. На иммунологической конференцш ПГМИ 1994 г., на научно-практической конференции научно-производственного объединения "Биомед" в 1994 г. и на научных сессиях ПГМИ в 1996.. 1997 г. г.
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 13 работ.
Объем и структура диссертации.