Введение к работе
Актуальность темы.
В настоящее время, в связи с антропогенной трансформацией внешней среды, повысилась роль возбудителей сапроноэных инфекций и,в частности, лйстерий в инфекционной патологии человека. Как известно возбудитель листериоэа- L. Monocytogenes f-чг swi«.o«» -"" ло 70 дет назад, ол«=уг-, «, i»*\»r,-;;niu годы проблема листериоэа в»?: ітрііиоойлз сг-пуальиость.
В конце 80-х годов в ряде стран (США,Швейцария,Канада и др.) были отмечены многочисленные вспышки листериоэа у здоровых людей, связанные с употреблением в пищу инфицированных продуктов (молоко, сыр, мясо, овоши), а также внутрибольничные инфекции. Смертность при этом достигала ЗО-50Х (Farber, Peterkin, 1891).
Официальная регистрация листериоэа в России проводится только с 1992 года, тем не менее, данные различных авторов полученные, с помощью серологических методов, указываю- на значительный уровень заболеваемости этой инфекцией и на широкое носительство возбудителя у людей.
Род LISTERIA в настоящее время включает в себя 6 видов, широко распространенных во внешней среде, иа которых L.monocytogenes и- L.ivanovii являются патогенными для человека.
ОТСуТСТВИе ЭффеКТИВНЫХ иеТОДОВ ЯИаГИОСТИКИ, ЧуВСТВИТе. jHHX и
опецифичных систем для типирования штаммов лйстерий гатрудняет эпидемиологический анализ инфекций,вызванных этим возбудителем и поэтому в последние годы делаются попытки использовать молекулярно- биологические методы (рестрикционый анализ, ДНК-ДНК гибридизация)."
йвучение L.monocytogenes как факультативного внутриклеточно-ю паразита и вызываемой им инфекции давно проводится , в разных
странах. Однако, остаются невыясненными ряд вопросов, касающихся биологических - особенностей и поведения листерий в разных объектах, а также эпидемиологии' листериоэа. Известно, что L.monocytogenes относится к условно-патогенным микроорганизмам, поэтому риск заболевания листериозом зависит как от состояния макроорганизма, так и от степени вирулентности возбудителя. Особый интерес представляет вопрос о патогенных свойствах листерий, выделяемых из продуктов питания и окружающей среды. В этой связи совершенно Счэвиднз необходимость современных .истем для типирован.ия штаммов данного возбудителя и разработки аффективных методов диагностики листериоза.
В связи с этим, целью настоящего исследования являлось типи-
рование штаммов L. monocytogenes на основании изучения биологичес
ких и генетических особенностей для оценки их эпидемической зна
чимости. '
Задачи исследования
-
Отработать условия выделения листерий из различных источников..
-
Типировать выделение штаммы L.monocytogenes о использованием специфических сывороток и бактериофагов.
-
Исследовать вирулентность и''биологические характеристики выделенных культур на различных экспериментальных моделях.
-
Отработать условия для выделения плагмидной ДНК из листерий и изучить плазмидный состав исследуемых штаммов L.monocytogenes
Б- Провести рестрикционный аналиа хромосомной ДНК о использова-' нием рестриктазы, позволяющей четко -дифференцировать рестрик-тограммы выеденных штаммов.
В- Провести анализ различных методов типирования листерий в плане их использования для оценки эпидемической значимости выде-
ленных культур L.monocytogenes. Научно-практическая новизна работы
Разработана схема выделения штаммов листерий из различных источников,позволившая выделить 128 культур L.monocytogenes из клинического материала, продуктов питания и сточнну *>~- z "~л,кя»
С помоет*»» ««-^г^вййият» ~~~^~іьііо. что г-кс-ленные из разных ИЧТОТГПХ2 іїтп"?яі откосятся к 4 сероварам: 1/2а, 1/2в, 1/2с и 4в, иэ них наиболее часто - 622 культур относились к серовару 4в и 32% - к 1/2а. Результаты серотипирбвания коррелировали с данными фаготипирования.
Выявлено, что наибольший процент высоковирулентных штаммов, выделенных из клинического материала, относились к серовару 4в (54%) и 1/2а (40Х), иэ пищевых продуктов и окружающей среды - к 4в (76Х).
На основе модифицированной методики выделен1" плазмидной ДНК из штаммов листерий было установлено, что только 12 из 128 выделенных культур несли плазмиды молекулярной массой от 15 до 39 ВД.
Рестрикционный анализ хромосомной ДНК штаммов L.monocytogenes с использованием рестриктавы Eco R1 ня оснс-е пульс-электро-йпро?2 позволил отнести рестриктограммы высоковирулентных штаммов L.monocytogenes серсвара 4в к 1 и 2 типам, а серовара 1/2 - к 2 и 3 типам.
Сравнительное изучение различных методов тиг—рования листерий (серо- и фаготипирование, анализ плаэмидного состава, рестрикционный анализ) показало, что рестрикционный анализ на основр пульс-электрофореза в сочетании о серотипирозанием позволяет эффективно дифференцировать потенциально опасные для людей штаммы L.monocytogenes.
Апробация диссертационной работы состоялась на научной конференции Отдела медицинской микробиологии НИИЭМ им.Н.Ф.Гамалеи РАМН 30 мая 1995 года. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи. Материалы диссертации доложены на Всероссийской конференции по проблемам листериова (1993 г., г.Покров)t на Международном симпозиуме " Пищевые эооноэы-'' (1995 г., Москва), на 7 Европейском конгрессе по клинической микробиологии и инфекционным заболеваниям (1995 г., Вена, Австрия) и на 12 Международном симпозиуме 'по проблемам листериова (1995 г., Западный Перт, Австралия).
0Г>;:ем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 114 страницах машинописного текста, иллюстрированы 2 схемами, 13 рисунками и 11 таблицами. Диссертация состоит иэ введения, обвора литературы, результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов и списка литературы, включающего 113 источников.