Введение к работе
Ранняя диагностика бактериальных инфекционных заболева-шй, в том числе и особо опасных, базируется на использовании шкробиологических исследований/ направленных на выделение и щентификацию возбудителей; серологических и'иммунологических ктодов,позволяющих выявить антигены возбудителей и антитела к шм.
Диагностическое и прогностическое значение при этом имеют юкззатели уровня определяемых антител в динамике инфекционно-'о процесса.. Весьма информативен позитивный результат выявлена антигена (антигенемия, антигенурия), поскольку частота об-шрукениа бактериальных антигенов в 2-3 раза превышает частоту збнаружения возбудителя. Кроме того, антигены обнаруживаются та з первые дни болезни,, а наличие их в биологических субс-грзтах не зависит от проведенной антибактериальной терзшш. їдя поиска антигенов возбудителей и антител к ним в настоящее фена используются такие высокочувствительные методы, как им-<унсфлюоресцентный, кииуноферкентяый, радиоиммунный анализ. Збяэательнкии компонентами постановки этих методов являются антитела (или антигены), меченные специальными маркерами (лю-шнесцирущие, ферменты, радиоизотопы). Кроме того, в арсенале методов диагностики бактериальных, инфекций имеются и приемы илергодизгностики, поскольку возбудители инфекционных И ИНЕЗ-зивных болезней, а такие продукты их штаболизмз способны выз-зать развитие аллергических процессов, которые часто становят-;я составной-частью патогенеза заболеваний. К числу таких ин-бекщюнно-аллергических заболеваний относятся хронические ин-
фекции (туберкулез, лепра, сифилис, лейзшаниоэ, кандидогы), также большинство бактериальных особо опасных инфекций (чума бруцелле'з, туляреыия, сап, медюидоз, сибирская язва) (Дай ва дянц СМ..Пономарев Н.Г.,Сероглагов В.В.,1972;Вершилов П.А..Чернышева М.И.,Князева Е.Н,1974;Олсуфьев Н.Г.,1975;Єа1і mand M.,Dodin А.,1933 и Др.).
Методы аллергодиагяостики до недавнего времени сводите к накожным, внутрикожным и кожным пробам. И хотя до сих по эти приемы находят применение в научной и практической работе накапливающийся материал свидетельствует об их недостатках отсутствие корреляции между уровнен сенсибилизации и чувстви тельностью кожи при некоторых аллергиях; появление сенсибили зации при постановке повторных кожных проб; возможное проявле ние после введения аллергеяз системных или общих реакций вплоть до развития анафилактического шока. Интенсивное разви тие теоретической и прикладной иммунологии способствовало по явлении новых методоврегистрации состояния гиперчувствитель нести и в частности - методов лабораторний диагностики аллер пи.
Из таких приемов наиболее щроко стала использовать;спе пифический леикоцитолиз, задержку миграции лейкоцитов, реакци блаеттрансформации лимфоцитов (РБТЛ), дегрануляциа тучных кле ток и.баэофилов, показатель повреждения нейтрофилов (ШШ) (Ва вилов Ы.11., Киселев А.С..Назарова Е.К., 1996;Суханов Н.А. с со авт.1983; Фрадкин В.А.,1985 и др.). Несомненными достоинствам этих тестов являются:' полная безвредность для пациента', воз ыожность апробации в качестве аллергена препаратов, которые н
йогди быть использованы при парентеральном введенш; возможность наблюдения за изменением состоянія сенсибилизации в процессе лечения. В то же время проявились и некоторые негативные зтороны, усложняющие такую диагностику. К ним следует отнести необходимость соблюдения стерильности при постановке большинства этих тестов, использование специальных ингредиентов (сред, лейкоцитов животных), длительность проведения реакщш.
Однако, один из лабораторных тестов диагностики сенсибилизации организма все же быстро привлек внимание клиницистов и экспериментаторов - показатель повреждения нейтрсфклов по Ірадкину В.А. (1962) . В дополнение к уде перечисленным достоинствам лабораторных методов диагностики аллергии следует отнести необходимость для постановки ППН малых обгемов крови, непродолжительное гремя для постановки и учета, а также простоту постановки теста, что предопределяет возможность внедрения этого приема в клинических лабораториях практически лпбой категории.
Накотившійся опыт использования ІШН в научной и практической работе с целью выявления сенсибилизации к бактериальным антигенам не только показал его высокую информативную ценность, но и Ескрыд основной недостаток - субъективность учета результатов теста. Интенсивность проявления амебоидного движения, альтерации клеток в присутствии специфического аллергена зо разному оценивается исследователями и не поддается приборному учету, в то же время чувствительны!.» и объективным методом регистрации функционального состояния фагоцитирующих и иммуно-яомпетентных клеток является хемилюминесцентный анализ. С по-
- б -
мозыо этого метода было показзяо, что у больных с адлергичес каш заболеваниями можно в ранние- сроки.относительно быстро просто выявлять гиперчуствительность к различным аллергена контролировать ее изменение в процессе специфического лечения Наличие серийно выпускаемой аппаратуры позволяет избегать не определенности и несравнимости результатов, получаемых разлив ными исследователями при использовании хемилшинесцентного мє тодз (Барабой Б.А,,0рел В.Э.,1983;НеЕМятулин А.Л.,1989; Оре В.Э., 19781 Рассанов СП. .Маянский А.Н.,Чеботарь И.Б.,198' Canplell А.К.,Hallet М.В..Weeks 1.,1985).В доступной литерат> ре имеются единичные сведения об использоезнїш хемклюминес центного метода для оценки имиунореактиввости организмз щ особо опасных инфекциях. . ЦЕЛЬ РАБОТЫ.
Изучить информативность хешшзминесцентного метода, каї
і о&ьєктиеного интегрального показателя. активации фагоцитирующих и иммунокомпетентных клеток крови, вызванного специфическим аллергеном и отражающего степень сенсибилизации макроорганизма антигенами возбудителей особо опасных инфекций.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. -
-
Получить аллергены (антигены) из штаммов возбудителе 00И для использования их в ППН и ХЛ анализе.
-
Разработать и оптимизировать условия постановки и уч; та ХЛ метода и провести сравнительную оценку его эффективное с ППН.
-
Изучить информативность и специфичность ХЛ метода і вакцинальном и инфекционном пррцессах, вызванных Еозбудителяї ООН.
-
Определить ценность показателей ХЛ метода для ранней диагностики ООИ.
-
Изучить возможность' использования ХЛ метода, для опосредованного обнаружения возбудителей ООИ а объектах знеснеи среды.
ВперЕые теоретически обоснована и доказана в эксперименте возможность хємилшинесцентной регистрации феномена активации фагоцитирующих и иммузскомпетентных клеток крови з присутствие специфических антигенов, как интегрального показателя интенсивности гипєрсексибаяизации мзкроорганлзмз при инфекционном и вакцинальном процессах, вызванных возбудителями ООИ.
Впервые показана снсокая информативность хешшмкяесцент-нсго анализа (в сравнении с микроскопной регистрацией ШШ и методами серологической диагностики) в качестзе приема ранней диагностики особо опасных инфекций. ПРАКБІЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.
-
Разработан и предложен прссгой, ' доступный для лабораторій любого профшш ХЛ метод регистрации функционального состояния фагоииткруадих ійиунокомпетентпьк клеток крови.
-
На примере ООИ показана Еысокая информативность ХЛ метода з ранней диагностике этих инфекций.
-
Показано, что с помощью ХЛ метода возможно обнаружение возбудителей ООИ в объектах внесней среды путем заражения ими экспериментальных животных и последующей регистрацией у них гипэрсенсибилизации, что позволяет рекомендовать его как дополнительный тест-в схеме индикации ООП.
4. Материалы диссертационной работы использованы при оформлении методических рекомендаций 'Применение хемклшинес-центного метода для диагностики чумы, сапа и мелиоидозз и обнаружения их возбудителей в объектах внешней среды", утвержденных в ноябре 1995г. директором Волгоградского НИШ, академиком РЭА, профессором Тихоновым Н.Г. ОСНОВНЫЕ ПОЛОНЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.
-
Хемихшинесцентная регистрами активации фагоцитирующих и ишунокоыпетентных клеток крози .в присутствии специфического антигена, как способ определения гиперреактивности экспериментальных животных, зараженных или вакцинированных возбудителями 00J1.
-
Диагностическая значимость ХЛ метода в ранней диагностике ООЛ в сравнении с микроскопной регистрацией ПШ и традиционными методами .диагностики.
-
Использование ХЛ метода в качестве дополнительного теста в схеме индикации возбудителей ООЛ.
Материалы диссертации доложены и обсузкдены на расшіреншх научно-производственных советах Астраханской противочумной станции (1992, 1992гг.), научных.конференциях Волгоградского НШНй (1994, 1995гг.), Всероссийского НЙПЧИ "Микроб"(1995), Харьковского НИИ микробиологии и иммунобиологии им. И.И.Мечни-кобз (1995), охрзкенн в гакдвчитедъном отчете при непосредственном участии автора в качестве исполнителя (К госрегистрации НИР-01.9.20 006770) ' и в одном инструктивно-методическое документе.
ПУБЛИКАЦИИ. " Основные положения и результаты исследования изложены в четырех опубликованных научных работах.
Диссертация состоит из введеній, обзора литературы, 4 глаз собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, в который входят 111 отечественных и S7 иностранных источников. Работа изложена на. $$ страницах, содержит IS таблиц, 5 рисунков. *