Введение к работе
Актуальность проблеми. Отсутствие тенденции к. снижению заболеваемости сальмонеллеэами в нашей стране и за рубежом, обусловленной в последнее десятилетие чаще лекарственяоустойчивыми возбудителями, чрезвычайное многообразие этиологических и клинических форм, заметное увеличение обсешненности сальмонеллами объектов внешней среда, возникновение вспышек внутрибольничной инфекции, протекающей нередко,с высокой летальностью, определяет необходимость совершенствования системы диагностических и лечебно-профилактических меролриятийШокровский В.И. с соавт., 1982, 1986;БЛо-хина И.Н. с соавт., 1984; Петровская В.Г., IS84; Наркевич М.И. с соавт., 1989; QieruMn с. , 1981; Шеу ь. et al. , 1984; Taylor D. et &. , I984J Hadfield Т. et el. , 1985; Cohen M . et а1.,І987Я др.). Особую актуальность для современной медицины и ветеринарии приобретает проблема множественной лекарственной устойчивости микроорганизмов, которая является, как признано сейчас, глобальным явлением и требует глубокого и всестороннего исследованияШава-шин СМ.,1984, 1985).
Однако недостаточная изученность экологии, биологических и генетических свойств лекарственнорезистенгннх сальмонелл, природа, структуры и уровней их лекарственной устойчивости в конверсии эпидемического и 'инфекционного процессов, идентификационных и дифференцирующих характеристик возоудителей, молекулярной биологии я плазмид энтеробактерий при госпитальной инфекции затрудняет, как показывает практика, решение важной народнохозяйственной проблемы "Совершенствования бактериологической диагностики сальмонеллезов".
Цель исследования состояла в совершенствовании бактериологической диагностики сальмонеллезов на основе изучения биологии возбудителей и генетики их лекарственной резистентности.
Задачи исслаІіїовакіи.я;
Ї. Установить природу, структуру, уровни лекарственной устой-
чивости сальмонелл, выделенных при различных эпидемических ситуациях, основные закономерности в развитии эпидемического процесса сальмонелл <>job.
-
Изучить взаимосвязь между разной природой лекарственной устойчивости и другими биологическими свойствами бцпатогешйгг и адаптированных преимущественно к. организму человек^ г.эроаароз сальмонелл, классифицировать кояъюгагиввде н-плазмиды энтеробакгерк* при госпитальной инфекции.
-
Определить влияние детерминантов лекарственной устойчивости разной природа на показатели роста и размножения энтеробакте-рий, идентификационные характеристики, продукцию ферментативно-токсических веществ, вирулентность и чувствительность к. бактериофагам возбудителей сальмонеллезов.
-
Исследовать влияние биологических особенностей возбудителей госпитальной инфекции на состояние аэробной микрофлоры кишечника детей раннего возраста и лекарственной резистентности условно-патогенных знтеробактерий.
-
Повысить результативность бактериологической диагностики сальмонеллезов путем применения для идентификации родов кишечного семейства кардинальных дифференциально-диагностических тестов, комплекса биологических свойств возбудителей и генетики их лекарственной устойчивости.
Научная новизна.
-
Установлена диагностическая и эпидемиологическая значимость множественной и конъюгативной природа лекарственной устойчивости возоудателей сальмонеллезов, из которых 16 сороваров сальмонелл групп В, С, Д, Е дополнительно дифференцированы на 48 генетически маркированных варианта, тождественных чаще s, typiiirourium.
-
Уточнена и дополнена классификация s. typhiKuriur* на би-овары выделением "госпитальных" возбудителей в качестве варианта
биовара II , который характеризуется комплексом биологических осо-
бенностеа и спектром коныогативных r -плазмид лин групп несовместимости с молекулярной массой соответственно 64 и 32,3 ВД и неконыогативной - около 2 ВД.
-
Показана шдекулярно-генетическая идентичность конъюгатив-ных в -плазмид inc pi группы, различающихся эксцреосированннми и неэкспрёссированными детерминантами лекарственной устойчивости.
-
Установлена под влиянием кояьюгативных R -плазмид варианта биовара II., s. typbiMurium конверсия лекарственной резистентно-ста, фаговаров, вирулентности при снижении ее у стрептомицинорезис-тенгннх мутантов, некоторых не имеющих значения для идентификации
и дифференцирования ферментативных и серологических свойств возбудителей сальмонеллезов, кинетики роота кишечной палочки при удлинении, плазмидами лаг-периода, времени генерации ллазмидаыи ino pi группы о молекулярной массой 64 ВД и укорочении продолжительности генерации плазмидами ine м группы с молекулярной массой 32,3 ВД.
5. Определена структурная и функциональная характеристика
аэробного биоценоза кишечника детей раннего возраста при внутри-
больничном сальмонеллезе, низкая антагонистическая активность мик
рофлоры при высокой s. typbinuriun варианта биовара II я , услов
но-патогенные энтеробактерии которой аккумулировали конъюгативные
н-ллазмяда, молекулярно-генегическа идентичные возбудителю госпитальной инфекции.
Практическая ценность заключалась в разработке, усовершенствовании о применением предложенных дриопособлений 14 способов изучения биологических свойств и генетики лекарственной устойчивости сальмонелл, изданием 5 методических рекомендаций для практических органов здравоохранения Дальнего Востока, ГСЗУ и Управления лечебно-профилактической помощи детям и матерям МЗ РСФСР. В работу органов здравоохранения внедрены "Споооб первичной идентификации воз-
- 4 -будителей сальмонелле зов" на оснований использования комплекса из 10 дифференциально-диагностических тестов; "Способ диагностики варианта биовара П.в s.typhinwrium " на основании комплекса биологических свойств а коншгативной природы лекарственной устойчивости; "Способ маркирования в эпидемиологических целях лекарственно-устойчивых возбудителей сальмонеллезов по их конъюгативным и некой гагативннм г -детерминантам". Это усовершенствовало бактериологи-ческую диагностику, эпидемиологический анализ и профилактику саль-монеллезов, снизив уровень ошибочных лабораторных заключений в пра ктических лечебно-профилактических учреждениях с 38,8 до 5-7%. Результаты работы внедрены в практическую деятельностью лечебно-профилактичесних, научных и педагогических учреждений страны.
Аптюбапия работы. Основные положения диссертации доложены: на научных конференциях Хабаровского НИИЭМ, Хабаровского государствен' ного фармацевтического института, Хабаровского отделения Всероссийского научного общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, научно-практических конференциях и семинарах для врачей Хабаровского края, Амурской, Магаданской, Камчатской и Сахалинской областей, Республиканском семинаре "Новые методы лабораторной диагностики кишечных инфекций"(Хабаровск, 1982 г.), Пленумах проблемной к6миссии"Кишечнне инфекции"(Ленинград, 1978,1982 гг.), Пленуме Все-союзной проблемной комиссии "Медицинская микробиология"(Тернололь, 1983 г.), Пленуме лабораторного Совета МЗ СССР(Воронеж, 1977 г.), ІУ Всероссийском съезде эпидемиологов и микробиологов (Волгоград, 1978 г.). Диссертация обсуждена и одобрена на научной конференции институтов(Хабаровск, 1989 г«).
Публикации. Основное содержание работа отражено в 36 опубликованных статьях и 5 методических рекомендациях.
Положения, вцнооимыэ на залету:
I. "Госпитальные" штаммы s.typhimurium - вариант биовара
II представляют клон возбудителей, адаптированный только к орга-
низму человека преимущественно детей раннего возраста.
-
Значительный рост вкутрибольничной заболеваемости детей обусловлен вариантом бдовара II s. typblmuritra , который диагностируется и дифференцируется на основании комплекса биологических особенностей я не-формируется при приобретении лишь я -ллазмид..
-
Конъюгативная R -ллазмидная устойчивость не изменяет идентификационные характеристики возбудителей сальмонеллезов, вызывает конверсию лекарственной устойчивости, фаговаров, кинетики роста,ви-' рулентности при снижении ее у стрептодацинорезистеятннх мутантов.
-
Вариант биовара II з.*урЫяаг1«п вызывает структурные из-
менения в аэробном биоценозе кишечника детей раннего возраста, длительно дерсистируег в организме человека, снижает антагонистическую активность микрофлоры, условно-патогенные энтеробактерии которой приобретают конъюгативные н -ялазмиды, молекулярно-генетически идентичные возбудителю "госпитального" сальмонеллеза.
Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, главы с описанием материалов и методов исследования, шести глав собственных исследований с обзором литературы, заключения, выводов, рекомендаций для практического внедрения и списка литературы, содержащего 456 ссылки, в том числе 273 на отечественные и 183 на иностранные источники, иллюстрирована 47 таблицами, 15 рисунками, изложена на 402 страницах.