Введение к работе
Актуальность проблеми. Вр настоящего времени остается высокой заболеваемость детей раннего возраста кишечными инфекциям., вызванными энтеропатогенными эпермхнямн, сальмонеллами, клебсчо.^-лаки, псездоюнадаш, протеем, другиі.гі условно-патсненними знтз-робактерчр.ми и ассоциациями отих микроорганизмов (Г.А. Тимофеева, Л.А.Антонова, 1985; Н.В.Воротнщеза и соавт., ID87; Л.Б.Королева и соавт., 1987; Н.Н.Ваганов, 1983; С.С.Гизатулина и соазт.,1988; О.Е.Сергеев, Н.У.Головина, 1939).
В большом проценте случаев килечные инфекции у детей раннего Еозраста возникают на фоне или сзпровояддются дісбактериозои кишечника, который усугубляет течение основного заболевания.
Анатомические особенности и функциональная незрелость нелу-дочно-кишечногэ тракта новорожденных и детей раннзго еозраста, неполноценность ИХ ИММУННОЙ eHCTeMU СПОССбСТВуЕТ Т.ТКеЛОМу КЛИНКЧСС--
кому течению ккиечкых инфекций и высокой летальности (В.В. Гавр:;-шоз, К.А.Сотникова, 1965; Л.А.Гульман и соавт., ISS5; D.А.Мазурин, И.іі.Воронцов, 1986; Н.Н.Володин и соав?., 1997).
Антибиотики и химиопрепараты, применяемые в качество этнотроп-ных средств лечения кишечных инфекций, малоэффективны Е СЙЯЗИ С тем, что условно-патогенные эчтеробакторпи - возбудители диарей--ных заболеваний, как правило, обладают широкой лекаре таенной ус-то йчивостьо.
Антибиотики и химиопрепараты не безвредна для организма ребенка, вызывают нежелательные побочные реакции, приводят к дальнейшему формированию антибкотикорезистентных штачмов-кікроорганиз-моз и развитию дисбактериоэа. Бактерийные препараты из иікробо? эубиотиков, используемые для лечения дисбкотических состояний, требуют длительных курсов терапии и малоэффективны при дисбактериозах, сопровождающііхся. массивным вьщелением протея. (Г.А.Тимофеева, 1984;
- 2-1984; Л. И. Черныше аа и со авт., I9B8; 0. Е. Сергеев, Н. М. Голо вина, 1939) .
Все вышесказанное определяет актуальность разработки безвредных и эффективных средств лечения у. профилактики диаройных заболеваний у детей раннего возраста.
В этом аспекте перспективным направлением представляется разработка нового класса иммунных препаратов пероральпого применения из молока и молозива коров. Основным действующим началом препаратов являются иммуноглобулины, которые в процессе эволюции выработали устойчивость к протеолитичееким ферментам, благодаря чему сохраняют антибактериальную и антитоксическую активность ка протяжении всего желудочно-кишечного тракта ребенка ( т. Tosasi et all., 1965; W. Kirsoh, I970{ b. Kill et all,, 1974).
Теоретической основой разработки и применения препаратов лак-тоглубулинов для лечения и профилактики кишечных заболеваний у детей раннего возраста является, с одной стороны, признание ведуксЯ роли в патогенезе этих заболеваний местных патологических процессов в стенке кишечника, а с другой - болыаое значение грудного вскармливания в формировании иммунитета новорожденны*, в становлении нормального биоценоза кишечника и пассивной защите его от инфекционных агентов (Л.Б.Хазексон, 1959; В.И.Ермолов л соавт.1970).
Но заданию Пі СМ СССР по науке "и технике I? 334 от 24.06.75 г. под руководством и при непосредственном участий автора была разработана технология получения противоколипротейного лактоглобулкна в экспериментально-производственных условиях.
Для организации производственного выпуска этого препарата, внедрения его в практику здравоохранения, разработки новых препаратов лактоглобуяинов направленного действия необходимо было решить ряд вопросов. Требовали существенной доработки способы получения иммунного сырья, обоснования критерии отбора атамнов для конструирования ассоциированных вакцин, уточнения оптимальные пара-
метры производства и вьпуска препаратов. Необходимо было определить и обосновать сферы, прккенвпия препаратов лактоглубуліїнов, изучить возможность обогащения ла.чтоглобулином молочных смесей для искусственного вскармливания детей с целью профилактики у них кишечних инфекций и дисбактериоэа.
Решение указанных вопросов имеет важное значение как в теоретическом, так и в практическом плане, для определения принципиально новых подходов к лечению и профилактике кишечмж заболеваний у детей раннего возраста.
Цель исследования - теоретическое и экспериментальное обоснование разработки, производственного получения и применения энте-' ральных препаратов лактоглебулиноє для лечения н профилактики наиболее распространенных кишечных инфекций и дисбактериоэов у детей посткатального и раннего возраста.
В задачи исследования входило:
Г. Разработать методические подхода к конструировало вакіглч отработать технологию получения вакцин, способы и схе.ты икмунпза-ции ими живо тнис-продуцентов с целью получения иммунного сырья.
?-. Обосновать оптимальные технологические параметры прокаленного производства и выпуска препаратов лактоглобулинов направленного действия.
-
Оценить результаты клинической и бактериологической эффективности применения лактоглобулинов для лечения колиинфзкции, езль-монеллеза, кишечного диебактериоза.
-
Изучить возможность обогащения лактоглобулином полочных продуктов детского питания ;< оценить эффективность их применения для профилактики и лечения диарейных заболеваний у детей раннего возраста.
-
Изучить некоторые механизмы действия разработанных препара-
- 4 _
тов, как новых средств отиотропной терапии.
Диссертация выполнена по основному плану научно-исследовательских работ Ростовского НИИ эпидемиологии, микробиологи;!, паразитологии и гигиены в соответствии с заданиями 2.IT.03 научно-технической програмуй ГКНТ СССР на 1986-1990 годы 0.38.06, утвержденной 30.10.85 № 556, "Комплексной программой работ по усилению профилактики заболеваний и укрепления здоровья населения СССР на 1985-1990 г.г. (5.2.9 и П. 18.24), по проблеме "Стандартизация медицинских иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики инфекционных болезней".
Исследования и разработка препаратов выполнялись под руководством и при личном участии автора с 1975 по 1990 год.
Научная новизна работ». Впервые в стране и за рубелом разработана и внедрена в практику здравоохранения промышленная технология получения безвредных и высокоэффективных препаратов лактоглобу-линов из молозива коров для лечения и профилактики острых кишечных инфекций и дисбактериоза у детей раннего возраста, обоснованы сферы применения препаратов.
Разработаны высокоиммуногенные ассоциированные вакцины, включающие штампы патогенных и условно-патогенных знтеробактерий - возбудителей диарейных заболеваний, спсгсобы и схемы иммунизации ими животных-продуцентов с целью получения иммунного сырья для промышленного производства препаратов лактошлобулинов направленного действия. Установлена возможность значительного усиления выработки специфических антител в молочной железе'коров при внутримышечном способе вакцинации глубокостельных животных.
Разработаны эрптроцитарные моно диагностикумы на основе ЛПС комплексов вакцинных итаммов, способ их стабилизации и высокоэкономичный микрометод реакции пассивной гемагглютинации для контроля специфической активности препаратов.
Впервые установлено, чм однии из механизмов действия лакіо глобулинов, приводящих к нормализации биоценоза кишечшка, является избирательное действие препаратов на токснгенныз клони эн-теробактерий.
Решена проблема обогащения молочных продуктов детского гніта ни я для грудных детей групп риска молознвньши иммуноглобулинам» в виде биологически активных добавок (ЕАД-11Г, ЬІД-ИГЛ). Теоретически и экспериментально обоснована возможность введения лактоіми булина в БАД совместно с лизоцнмом, лзктобектернями и біфідобактериями .
Новизна исследований подтверждена, ааторскими свідетєяьетваш на изобрзтения:
-
"Способ лечения протейного дисбактарчоэа" (;? 1266543).
-
"Способ моделирования дасбактериоза у крыс" (№ 1363291).
-
"Способ получения нетоксигекных субкультур бактерии рода vibiu
или Aeromonas " (» 1440026 "Т").
4. "Способ стабилизации 0-эритроци тарных диагностикумов"
(№ 1648173 "Т").
5. "Способ получения лактоглобулина (положительное решение
№ 472305/14 "Т").
Практическая значимость работи: определяется разработкой и ыша рением в практику здравоохранения нового класса безвседних и nt-^o--неэффективных средств этиотропной терапии киаечннх ьаболеваний у детей раннего возраста, разработкой и внедрением биологически активных добавок с лактоглобулином д^п обогащения продуктов детского питания детей групп риска.
Основные положения, рыносимие на защиту:
I. Разработанные на основании проведенных исследований ассо циирсванные вакцины из штампов патогенных и условно-патогенных зитсробактегий, при внутримышечном введении глубокостельннм коро-
-6 -вам, обеспечивают выработку высокого уровня специфических антител . в молозиве растелившихся коров, что дает возможность проиншленно-го получения из него нового класса йиспрепаратоь - иммунных лакто-глобулинов для этиотропной терапии и профилактики кишечных заболеваний у детей раннего возраста.
-
Препараты - иммунные лактоглобулины эацяцаат экспериментальных животных от заражения вирулентныш штаммами патогенных и условно-патогенных энтеробактерий, входящих в состав ассоциированных вакцин, обладают антитоксическим эффектом, избирательно действуют на токсигенные клоны энтеробактерий, способствуют селекции нетоксигенных клонов.
-
Препараты лактоглобулинов при пероральноы введении детям раннего возраста, больным кишечными инфекциягді и дисбактериозоы, безвредны, нетоксичны, способствуют восстановлении нормального биоценоза кишечника ребенка, высокоэффективна.
-
Целесообразно использовать препараты лактоглобулинов, в виде биологически активных добавок (ЕАДЬ для обогащения молочных продуктов, предназначенных для искусственного вскармливания недоношенных и детей раннего возраста групп риска по заболеваемости кишечными инфекциями и дисбактериозом.
Внедрение. I. Издан Приказ МЗ GCCP о разрешении применения противоколипротейного лактоглобулина в практике здравоохранения № 12 от 5.01.87 г.
-
Утверждены Фармкомитетом МЗ СССР 29.05.90 г. ФС-42-328 ВС-90 на противоколипротейный лактоглобулин коровий сухой для эн-терального применения и "Инструкция по применению препарата".
-
Освоен серийный промышленный выпуск противоколипротейного лактоглобулина на 03П НПО "Ростэпидкомплекс" (1990). Утвержден РП # 328-91. Препарат внедрен в лечебные учреждения страны, направляется в первую очередь в зоны экологического бедствия (в об-
ласта, пострадавшие от Чернобыльской аварии и Алтайский край).
-
Утверждены ТУ 10.02.02 и "Технологическая инструкция" на добавки сухие молочные биологически активные для детского питания ССоюзконсерамолоко" 29.11.89 г.). Освоение серийного выпуска ЕАД--ИГ осуществляется на Омутнинском химическом заводе ПО "Восток".
-
Изданы методические рекомендации "Применение биологически активных добавок к детскому питании". .'4., 1988 (утв. 13 СССР 0.09. 88, № I1-4.3/5-33).
-
ВФС и ЭПР на лактоглобулкн против условчо-патогенних бактерий и сальмонелл представлены в Комитет по МИШ U3 СССР 9.07.90г., находятся на рассмотрении.
-
Утверждена Комитетом по МИЕП ИЗ СССР программа государственных испытаний лактоглобулина против условно-патогенных бактерий и сальмонелл. Испытания проводятся на клинических базах Ленинградского НИИ детских инфекций, ЦОЛИУВ, института педиатрии и детской хирургии МЗ РСФСР, кафедры детских икфекций Ростсеского гедяцкнскэ-го института.
Апробация работа. Материалы диссертации долокенн и сбсулж :и на Северо-Кавказской конференции "Актуальные проблемы иммунологии, аллергологии и молекулярной биологии" (1978), на У научной конференции Дагестанского ГіМ, Северо-Кавказского центра высшей пколы, Проблемной комиссии по иммунологии и иммунопатологии ft!3 PG*CP (1979), на УІ Всесоюзном симпозиуме по физиологии и биохп.ши лактации (1982), на Всесоюзном симпозиуме, посвященном 60-летию Тбилисского ШИВС: "Актуальные вопросы бактериофагии и прикладной иммунологии" (1984), на заседании Ростовского отделения Всесоюзного микробиологического общества (1935), на областной конференции "Проблемы медицинской и санитарной бактериологии" (1987), на Ш съезде детских врачей Узбекистана (1988), на заседании Союзной проблемной комне-
- в -
wii института питания АМН СССР (1986), на Всесоюзной научной конфе
ренции с международным участием "Питание: здоровье и болезнь",
(1990), на координационных совещаниях в ГКНТ СССР по проблеме обогащения продуктов питания для детей первого года жизни защитными 1-а к то райи (1982, 1983, 1984, 1985, 1986).
Апробация диссертации проведена на заседании Ученого Совета ИІІ0 "Ростэпидкомплехс" 27 декабря 1990 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 28 научных рчбот.